ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 05.12.2023
Просмотров: 128
Скачиваний: 1
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Hou H, Zhan C, Chen C, Lv W, et al. Correlation of chest Ct and RT-PCR testing in coronavirus disease 2019 (COVID-19) in China: A report of 1014 cases. Radiology 2020:200642).
Таким образом, dPCR является методом выбора для оптимального определения вирусной нагрузки у бессимптомных и выздоравливающих пациентов.
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора первым в Российской Федерации разработал и зарегистрировал Набор реагентов «Вектор-ПЦР
РВ
1 ... 6 7 8 9 10 11 12 13 14
-2019-nCoV–RG» для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом, основанным на амплификации кДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР) и гибридизационно-флуорецентной детекции продуктов амплификации в режиме реального времени и Набор реагентов «Вектор-OneStepПЦР-CoV-RG» для выявления РНК коронавирусов SARS и нового коронавируса 2019-nCoV (SARS-CoV-2) методом, основанным на обратной транскрипции (ОТ) и последующей амплификации кДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР) и гибридизационно-флуоресцентной детекции продуктов амплификации в режиме реального времени.
ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора первым в Российской Федерации разработал, зарегистрировал и первым внедрил в производство набор реагентов «SARS-CoV-2-ИФА-Вектор» для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к коронавирусу SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови человека (регистрационное удостоверение № РЗН 2020/10017 от
10.04.2020). Метод основан на иммуноферментном анализе, широко распространенном и в
Российской Федерации, и в мире. Метод обладает высокой чувствительностью (100%) и специфичностью (100%) благодаря включению в набор в качестве антигена цельновирионного инактивированного коронавируса SARS-CoV-2. Набор предназначен для установления факта перенесенной ранее инфекции и для исследований постинфекционного и, в будущем, поствакцинального иммунитета, а также может быть использован для отбора наиболее эффективной вакцины по такому важному показателю, как гуморальный иммунитет.
При атипичной пневмонии абсолютная лимфопения (количество лимфоцитов <1,0 10 9
/ л), в том числе снижение CD4 и CD8, наблюдалась в 98% случаев инфицирования коронавирусом
SARS. В ряде случаев регистрируется лейкопения и тромбоцитопения, повышение уровня ЛДГ (до
1500 Е/л), умеренное повышение уровня АЛТ (до 200 Е/л) и АСТ (до 200 Е/л) и повышение уровня
КФК
(Tsang KW, Ho PL, Ooi GC, Yee WK, et al. A Cluster of Cases of Severe Аcute Respiratory Syndrome in Hong Kong. N Engl J Med ;
348:1977-1985, DOI: 10.1056/NEJMoa030666).
Дисфункция печени с аномальным содержанием аланиновой трансаминазы были отмечены у 29,6% пациентов при госпитализации, но увеличилась до 75,9% из тех, кто получает системный кортикостероид и рибавирин при лечении инфекции SARS.
Позднее появление Ig M вероятно может быть прогностическим признаком тяжелого течения коронавирусной инфекции. Были получены данные, согласно которым у половины пациентов с поздним образованием антител класса М впоследствии наблюдалось тяжелое течение COVID-19: они поступали в отделение интенсивной терапии и находились там более трех суток.
Рентгенограмма грудной клетки первоначально не выявляет изменений у четверти пациентов. Компьютерная томография высокого разрешения (КТВР) грудной клетки может обнаружить небольшие ранние паренхиматозные поражения. Основные поражения, выявляемые
КТВР включали в себя внутрилобулярное интерстициальное утолщение, уплотнение и помутнение в виде матового стекла, которые вовлекают в процесс преимущественно периферические поля легких, их нижние доли (рис. 30).
У 12% пациентов развилось спонтанно-средостение, а у 20% у пациентов развились признаки острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС) в течение 3 недель. Баротравмы происходили в 26% случаев при критически тяжелых случаях инфекции SARS, возможно, из-за
снижения эластичности легких
(David S.C. Alimuddin Zumla, Severe Acute Respiratory Syndrome Historical, Epidemiologic, and
Clinical Features // Infect Dis Clin N Am 33 (2019) 869–889).
Рис. 30. Грудная томография пациента с «матовым стеклом» в переднелатеральной области сегмента левой нижней доли легкого
(David S.C. Alimuddin Zumla, Severe Acute Respiratory Syndrome Historical,
Epidemiologic, and Clinical Features // Infect Dis Clin N Am 33 (2019) 869–889)
Серологические исследования. Первые проведенные крупномасштабные серологиеские исследования свидетельствуют о том, что антитела к коронавирусу могут исчезать из организма человека, который переболел COVID-19. Анализ на наличие антител к SARS-CoV-2 у 61 075 испанцев показал, что антитела есть лишь у 5% (4,6-5,2% проверенных в зависимости от вида теста). Исследователи пришли к выводу, что риск заболеть коронавирусом не зависит от пола, но на него может влиять география: в районе Мадрида и Барселоны, крупных мегаполисов, доля людей с антителами превысила 10% и 7%, соответственно, тогда как среди жителей прибрежных населенных пунктов она оказалась меньше – 3%. У детей младшей 10 лет антитела выявляли реже, а у медицинских работников – в два раза чаще, чем среди популяции в целом. Почти треть людей с найденными антителами заявили, что они не заметили у себя симптомов болезни. При этом у 14% участников исследования, которые за 2 месяца до этого сдали положительные пробы, и они оказались положительными на антитела, при повторном тестировании антител не выявили.
В большинстве случаев антитела исчезали у людей, у которых при заболевании COVID-19 симптомы были слабо выраженными или отсутствовали вовсе
(Marina Pollán, Beatriz Pérez-Gómez, Roberto
Pastor-Barriuso, Jesús Oteo, Miguel A Hernán, Mayte Pérez-Olmeda , Jose L Sanmartín, Aurora Fernández-García, Israel Cruz, Nerea Fernández de Larrea, Marta Molina, Francisco Rodríguez-Cabrera, Mariano Martín, Paloma Merino-Amador, Jose León Paniagua, Juan F Muñoz-Montalvo,
Faustino Blanco, Raquel Yotti, on behalf of the ENE-COVID Study Group. Prevalence of SARS-CoV-2 in Spain (ENE-COVID): a nationwide, population-based seroepidemiological study// https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31483-5).
На формирование коллективного иммунитета сделала ставку в своей стратегии борьбы с коронавирусом Швеция — она не стала вводить серьезных карантинных мер и ограничений. В результате в этой стране один из самых высоких в Европе уровней смертности от коронавируса: в стране зарегистрировали 73 344 заболевших и 5447 смертей. Для сравнения: в соседней Дании –
(David S.C. Alimuddin Zumla, Severe Acute Respiratory Syndrome Historical, Epidemiologic, and
Clinical Features // Infect Dis Clin N Am 33 (2019) 869–889).
Рис. 30. Грудная томография пациента с «матовым стеклом» в переднелатеральной области сегмента левой нижней доли легкого
(David S.C. Alimuddin Zumla, Severe Acute Respiratory Syndrome Historical,
Epidemiologic, and Clinical Features // Infect Dis Clin N Am 33 (2019) 869–889)
Серологические исследования. Первые проведенные крупномасштабные серологиеские исследования свидетельствуют о том, что антитела к коронавирусу могут исчезать из организма человека, который переболел COVID-19. Анализ на наличие антител к SARS-CoV-2 у 61 075 испанцев показал, что антитела есть лишь у 5% (4,6-5,2% проверенных в зависимости от вида теста). Исследователи пришли к выводу, что риск заболеть коронавирусом не зависит от пола, но на него может влиять география: в районе Мадрида и Барселоны, крупных мегаполисов, доля людей с антителами превысила 10% и 7%, соответственно, тогда как среди жителей прибрежных населенных пунктов она оказалась меньше – 3%. У детей младшей 10 лет антитела выявляли реже, а у медицинских работников – в два раза чаще, чем среди популяции в целом. Почти треть людей с найденными антителами заявили, что они не заметили у себя симптомов болезни. При этом у 14% участников исследования, которые за 2 месяца до этого сдали положительные пробы, и они оказались положительными на антитела, при повторном тестировании антител не выявили.
В большинстве случаев антитела исчезали у людей, у которых при заболевании COVID-19 симптомы были слабо выраженными или отсутствовали вовсе
(Marina Pollán, Beatriz Pérez-Gómez, Roberto
Pastor-Barriuso, Jesús Oteo, Miguel A Hernán, Mayte Pérez-Olmeda , Jose L Sanmartín, Aurora Fernández-García, Israel Cruz, Nerea Fernández de Larrea, Marta Molina, Francisco Rodríguez-Cabrera, Mariano Martín, Paloma Merino-Amador, Jose León Paniagua, Juan F Muñoz-Montalvo,
Faustino Blanco, Raquel Yotti, on behalf of the ENE-COVID Study Group. Prevalence of SARS-CoV-2 in Spain (ENE-COVID): a nationwide, population-based seroepidemiological study// https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31483-5).
На формирование коллективного иммунитета сделала ставку в своей стратегии борьбы с коронавирусом Швеция — она не стала вводить серьезных карантинных мер и ограничений. В результате в этой стране один из самых высоких в Европе уровней смертности от коронавируса: в стране зарегистрировали 73 344 заболевших и 5447 смертей. Для сравнения: в соседней Дании –
13 089 заболевших при всего лишь 609 смертях. По данным компании Werlabs, в среднем по
Швеции антитела есть только у 10,8% проверенных.
Вакцины
В настоящее время самым эффективным средством борьбы с инфекционными заболеваниями является
вакцинация
Несмотря на высокую долю коронавирусов человека OC43, 229E, HKU1 и NL63 в общей заболеваемости ОРВИ, разработка вакцин против заболеваний, вызываемых этими коронавирусами, по актуальности не входит в число приоритетных задач. Это связано с низким процентом случаев, когда заболевший вынужден обращаться за медицинской помощью и небольшое количество тяжелых случаев. Активность в разработке вакцины против ТОРС- коронавируса (SARS) была практически свернута из-за прекращения циркуляции этого вируса в человеческой популяции. Вакцины против MERS-CoV находятся в разработке, но из-за невысокого интереса к этому продукту с коммерческой точки зрения эти вакцины до сих пор не присутствуют на рынке. Тем не менее, данные о структурно-функциональных свойствах белков коронавирусов, иммунопатогенезе заболевания, механизмах и факторах, влияющих на формирование иммунного ответа, стали остро востребованы после начала пандемии COVID-19.
Создание эффективной вакцины требует оценки потенциального вклада каждого антигена в формирование иммунного ответа.
Поверхностный белок S коронавирусов является важной мишенью для действия вакцин, потому что через него реализуется механизм рецепторного связывания вируса с клеткой хозяина.
Белок S коронавирусов человека распознает различные рецепторы клеток человека, в первую очередь - ACE2 (коронавирусы SARS и SARS-CoV-2), APN (коронавирусы 229Е), DPP4 (коронавирус
MERS), 9-O-acetylated sialic acid (коронавирусы ОС-43, HKU1). В S1-субъединице белка S содержится рецептор-связывающий домен (RBD), субъединица S2 необходима для слияния мембран клеток-хозяина и вируса, гомология между RBD белков S коронавирусов SARS и SARS-
CoV-2 составляет примерно 75%
(Sun C, Chen L, Yang J, Luo C, Zhang Y, Li J, et al. 2020. SARS-CoV-2 and SARS-CoV Spike-RBD structure and receptor binding comparison and potential implications on neutralizing antibody and vaccine development. BioRxiv. doi:
10.1101/2020.02.16.951723)
В работе (
Syed Faraz Ahmed, Ahmed A. Quadeer, Matthew R. McKay . Preliminary Identification of Potential Vaccine Targets for the COVID-19 Coronavirus (SARS-CoV-2) Based on SARS-CoV Immunological Studies // Viruses 2020, 12, 254; doi:10.3390/v12030254) были определены Т-клеточные эпитопы SARS-CoV-2. Т-клеточные эпитопы, были определены экспериментально с использованием 2 различных типов анализа: (i) положительные анализы, которые тестировались на Т-клеточный ответ против эпитопов и (ii) положительные анализы, которые тестировались на связывание с эпитопом-МНС. Всего было выявлено 115 Т-клеточных эпитопов, 27 из которых не содержали мутаций в доступных последовательностях SARS-CoV-2
(Syed
Faraz Ahmed, Ahmed A. Quadeer, Matthew R. McKay . Preliminary Identification of Potential Vaccine Targets for the COVID-19 Coronavirus
(SARS-CoV-2) Based on SARS-CoV Immunological Studies // Viruses 2020, 12, 254; doi:10.3390/v12030254).
Интересно, что все они присутствовали в N (16) или S (11) белках вируса. Анализы связывания МНС были выполнены для
19 из этих 27 эпитопов. Определено, что они связаны только с пятью различными аллелями MHC
(с разрешением 4 цифры): HLA-A*02: 01; HLA-B*40: 01; HLA-DRA*01: 01; HLA-DRB1*07: 01 и HLA-
DRB1*04: 01. Сумарный охват для этих эпитопов оценивается для населения Земли примерно в
59,76%, а для Китая – 32,36% (Табл. 8).
Таблица 8.
Т-клеточные эпитопы белков N и S вируса SARS-CoV, полученные с использованием положительных анализов Т-клеток (всего 27 эпитопов).
Для дальнейшего расширения поиска и выявления потенциально эффективных Т-клеток- мишеней, охватывающих более высокие процент населения, были рассмотрены еще 229 эпитоп-
последовательностей, 102 из них располагаются в белках S (66) или N (36). Отображение 66 эпитопов на кристаллическую структуру белка S коронавируса SARS показало, что 3 из них
(GYQPYRVVVL, QPYRVVVLSF и PYRVVVLSF) были полностью локализованы в мотиве рецептор- связывающего домена вируса SARS
(https://www.uniprot.org/uniprot/P59594)
, важного для проникновения вируса в клетку.
Аналогично были определены В-клеточные эпитопы белков вируса SARS.
Были получены данные о структуре 298 линейных В-клеточных эпитопов и обнаружено, что 49 последовательностей эпитопов идентично совпадают с белковыми последовательностями вируса SARS-CoV-2. Интересно, 45 из них были получены из белок S (23) или N (22) (табл. 9), в то время как остальные 4 находились в белке М.
Таблица 9.
Линейные В-клеточные эпитопы в S- и N-белках коронавирусов SARS и SARS-CoV-2 (22эпитопа в белке N, и 23 эпитопа в белке S, 20 из которых расположены в субъединице S2).
Коронавирус, вызывающий заболевание Ближне-восточный респираторный синдром (MERS), относится к роду Betacoronavirus семейства Coronaviridae и генетически близок к коронавирусам летучих мышей HKU4 и HKU5. Первые случаи заболевания были зарегистрированы в июне 2012 года. В университете Питтсбурга (США) собраны 2 конструкции на основе аденовируса, в одну из которых встроен полный ген, кодирующий поверхностный S-белок БВРС-КоВ, а во вторую – экстрацеллюлярный домен этого белка. Обе конструкции вызывали у иммунизированных мышей образование антител, в том числе антител, нейтрализующих вирус при проверке на клетках
(
Eun
(GYQPYRVVVL, QPYRVVVLSF и PYRVVVLSF) были полностью локализованы в мотиве рецептор- связывающего домена вируса SARS
(https://www.uniprot.org/uniprot/P59594)
, важного для проникновения вируса в клетку.
Аналогично были определены В-клеточные эпитопы белков вируса SARS.
Были получены данные о структуре 298 линейных В-клеточных эпитопов и обнаружено, что 49 последовательностей эпитопов идентично совпадают с белковыми последовательностями вируса SARS-CoV-2. Интересно, 45 из них были получены из белок S (23) или N (22) (табл. 9), в то время как остальные 4 находились в белке М.
Таблица 9.
Линейные В-клеточные эпитопы в S- и N-белках коронавирусов SARS и SARS-CoV-2 (22эпитопа в белке N, и 23 эпитопа в белке S, 20 из которых расположены в субъединице S2).
Коронавирус, вызывающий заболевание Ближне-восточный респираторный синдром (MERS), относится к роду Betacoronavirus семейства Coronaviridae и генетически близок к коронавирусам летучих мышей HKU4 и HKU5. Первые случаи заболевания были зарегистрированы в июне 2012 года. В университете Питтсбурга (США) собраны 2 конструкции на основе аденовируса, в одну из которых встроен полный ген, кодирующий поверхностный S-белок БВРС-КоВ, а во вторую – экстрацеллюлярный домен этого белка. Обе конструкции вызывали у иммунизированных мышей образование антител, в том числе антител, нейтрализующих вирус при проверке на клетках
(
Eun
Kima, Kaori Okadaa, Tom Kennistona, et al. Immunogenicity of an adenoviral-based Middle East Respiratory Syndrome coronavirus vaccine in
BALB/c mice// Vaccine,Volume 32, Issue 45, 14 October 2014, Pages 5975–5982)
В институте вирусологии (Марбург, Германия) препарат против Ближне-восточного респираторного синдрома был разработан на основе штамма Анкара вируса осповакцины, в который был встроен полный ген, кодирующий поверхностный S-белок MERS. Препарат вызывал у иммунизированных мышей образование вирус-нейтрализующих антител и активацию клеточного звена иммунитета (формирование CD8+ T-клеток). Препарат обладал протективностью при использовании специально подготовленной модели животных (мыши с трансдуцированным рецептором человеческой дипептидил-пептидазы 4)
(
Asisa Volz, Alexandra Kupke, Fei Song, et al. Protective efficacy of recombinant Modified Vaccinia virus Ankara (MVA) delivering Middle East Respiratory Syndrome coronavirus spike glycoprotein // J Virol.
2015 May 27. pii: JVI.00614-15. [Epub ahead of print).
Китайские ученые (институт микробиологии, Пекин) совместно с американскими
(Медицинское отделение Техасского университета, Галвестон) показали иммуногенность рекомбинантного белка, содержащего остатки 377-588 рецептор-связывающего домена БВРС-КоВ.
В препарат введен адъювант MF59. Препарат вызывал у иммунизированных мышей образование вирус-нейтрализующих антител и активацию клеточного звена иммунитета
(
Jian Tang, Naru Zhang, Xinrong
Tao, et al. Optimization of antigen dose for a receptor-binding domain-based subunit vaccine against MERS coronavirus// Human Vaccines &
Immunotherapeutics, Volume 11, Issue 5, 2015 pages 1244-1250).
В сентябре 2014 года фирма Greffex (США) запросила Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний (National Institue of Allergy and Infectious Diseases) о проведении доклинических испытаний вакцины против БВРС – GreMERSfi. Вакцина представляет собой рекомбинантный аденовирус, содержащий встройку поверхностного белка
MERS
(иммунизирующая доза 3×10 8
геном эквивалентов)
(
http://www.greffex.com/platform/)
Фирма Novavax (США) сообщила о разработке вакцины на основе поверхностного (S) белка коронавируса MERS, используя технологии рекомбинантных вирусоподобных наночастиц
(
Novavax.
Novavax produces
MERS-CoV vaccine candidate. http://www.novavax.com/download/releases/2013-06-
06%20CoronaV%20FINAL%20PR.pdf (Accessed on June 13, 2013)).
В обзоре 2015 года авторы указали на 2 причины того, что вакцины против БВРС медленно разрабатываются. Первая – это отсутствие животной модели, на которой можно проверить эффективность препарата, второе – это то, что из-за низкого числа случаев БВРС, фармацевтические компании имеют мало стимулов продвигать разрабатываемые препараты, так как расходы на клинические испытания очень высоки
(
Papaneri AB, Johnson RF, Wada J, Bollinger L, Jahrling PB, Kuhn
JH. Middle East respiratory syndrome: obstacles and prospects for vaccine development // Expert Rev Vaccines. 2015 Apr 11:1-14. [Epub ahead of print).
COVID-19. По информации ВОЗ к июлю 2020 года 23 вакцины против COVID-19 по всему миру находятся на разных стадиях клинических испытаний на людях, еще 140, включая 10 российских – находятся в стадии доклинических испытаний
(
https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/novel- coronavirus-landscape-covid-19e7269232504f4ce8bb2fe20709e830bd.pdf?sfvrsn=4c9a242c_3&download=true
).
Одними из первых приступили к клиническим испытаниям разработчики инактивированной вакцины – SinoVac и вакцины на основе рекомбинантного аденовируса
ChAdOx1-nCov19
–
Университет
Оксфорда
(
https://gmpnews.ru/2020/05/sredi-razrabatyvaemyx-vakcin-protiv- koronavirusa-eksperty-vydelyayut-mrnk-vakciny/
).
Китайская национальная биотехнологическая группа (CNBG), входящая в состав государственной китайской национальной фармацевтической группы (Sinopharm), провела