Файл: Дипломная работа По специальности 060301 фармация Пятигорск, 2017 Работа выполнена на кафедрах.docx
Добавлен: 11.12.2023
Просмотров: 103
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Глава 3. Разработка методик анализа глазной мази с доксициклина гидрохлоридом
3.1. Определение подлинности доксициклина гидрохлорида в мази
3.1.1. Цветные качественные реакции.
Для подтверждения подлинности доксициклина гидрохлорида, с учетом особенностей их химического строения, использовали качественные реакции, рекомендованные НД.
При разработке методик качественного анализа глазной мази, руководствовались тем, что доксициклина гидрохлорид способен образовывать цветные качественные реакции. Известно, что для идентификации доксициклина гидрохлорида используют качественные реакции с хлоридом железа (III) и нипропруссидом натрия. Кроме того, это лекарственное вещество содержит ион хлора, который можно определить реактивом – раствором нитрата серебра.
Для испытания на подлинность готовили модельную смесь мази. 5 г геля растворяли в 20 мл воды (раствор А). При анализе мази на липофильной основе 5 г мази растворяли в 20 мл воды при нагревании на водяной бане, охлаждали и фильтровали.
Для определения подлинности доксициклина гидрохлорида в мази поступали согласно следующим методикам:
Реакция с хлоридом железа (III)
К 1 мл раствора А добавляли 0,5 мл 0,1 М гидроксида натрия и 0,2 мл раствора хлорида железа (Ш). Наблюдали образование темно-красно-коричневого окрашивания.
Реакция на хлориды
К 1 мл раствора А добавляли 0,5 мл разведенной азотной кислоты, и после растворения веществ прибавляли 0,5 мл раствора нитрата серебра, наблюдали образование белого творожистого осадка.
Реакция с нитропруссидом натрия
К1 мл раствора А прибавляли 0,5 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия и 0,5 мл нитропруссида натрия. Наблюдали образование фиолетового окрашивания.
Установлена специфичность для качественных реакций. Качественные реакции были проведены на сопутствующие вещества и сделан вывод об отсутствии положительного эффекта.
Таким образом, с помощью цветных качественных реакций можно подтвердить подлинность доксициклина гидрохлорида в глазной мази.
3.1.2. Метод тонкослойной хроматографии
Подлинность доксициклина гидрохлорида определяли с помощью ТСХ.
1,0 г модельной смеси мази растворяли в 10 мл этанола. 4 мкл раствора наносили на хроматографическую пластинку и растворы стандартного образца (СО) доксициклина гидрохлорида. В качестве подвижной фазы использовали хлороформ – спирт этиловый – кислоту уксусную ледяную
( 5:1:4 ).
Хроматографирование осуществляли восходящим методом, проявляли в йодной камере. На хроматограмме (рисунок 5) наблюдались 2 пятна испытуемого раствора, соответствующих по величине
и интенсивности окрашивания пятнам стандартного образца доксициклина гидрохлорида.
Для обнаружения пятен вычисляли величину
по уравнению:
,где а – расстояние от линии старта до центра пятна; b– расстояние от линии старта до фронта подвижной фазы.
Значения Rf, вычисленные по результатам трех определений составили: для доксициклина гидрохлорида 0,29
0,03.Известно, что методику считают специфичной, если при хроматографировании анализируемого образца и свидетеля наблюдается совпадение зон адсорбции по значениям Rf.
При выполнении анализа наблюдали совпадения по значениям Rf зон адсорбции стандартных образцов с пятнами лекарственных препаратов.
Таким образом, метод тонкослойной хроматографии можно использовать для подтверждения подлинности доксициклина гидрохлорида в мази.
3.2. Количественное определение доксициклина гидрохлорида в глазных мазях
Так как основное лекарственное вещество, входящее в состав глазной мази: доксициклина гидрохлорид имеет в своей структуре хромофорные группировки, то для его анализа может быть использован спектрофотометрический метод анализа.
Были снят спектр поглощения 0,001% раствора доксициклина гидрохлорида в воде (рис 1) и установлено, что имеются две области интенсивного максимума при длинах волн
=277 нм и 
= 348нм.Это согласуется с данными литературы, а значит данный образец субстанции может быть использован в качестве СО при определении доксициклина гидрохлорида.в мазях спектрофотометрическим методом.
МЕТОДИКА
Для приготовления раствора навеску 0,001 доксициклина гидрохлорида помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл., растворяли в воде и доводили до метки тем же растворителем. 1мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили водой до метки и перемешивали.
Рисунок 1 - Спектр поглощения 0,001% раствора доксициклина гидрохлорида в воде
Следующим этапом исследования явилось изучение спектров поглощения доксициклина гидрохлорида в изучаемых образцах мазей.
МЕТОДИКА:
Точную навеску – 1 г модельной смеси мази помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл воды, перемешивали, доводили тем же растворителем до метки. 10 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили до метки, перемешивали. Снимали спектры поглощения водных растворов образцов гелей на спектрофотометре СФ-56 (рис 2) . В качестве раствора сравнения использовали воду.
Для приготовления раствора доксициклина гидрохлорида в мази на липофильной основе точную навеску – 1 г модельной смеси мази помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл воды, ставили на кипящую водяную баню и нагревали до расплавления основы. Охлаждали до застывания основы. Жидкость сливали в мерную колбу вместимостью 100 мл. Извлечение повторяли еще 2 раза по 20 мл. Все извлечения объединяли в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводили водой до метки, перемешивали. Содержимое колбы фильтровали, отбрасывали первые 15 мл фильтрата . 10 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили до метки, перемешивали. Снимали спектры поглощения водных растворов образцов гелей на спектрофотометре СФ-56 (рис 3) . В качестве раствора сравнения использовали воду.
Рисунок 2 - Спектры поглощения 0,001% раствора доксициклина гидрохлорида в мазях на гидрофильных основах
1.ГЭЦ 2.Карбопол 3.Beneceel TYPE: K4M-PH-CR 4.KMC аквилон
Рисунок 3 - Спектры поглощения 0,001% раствора доксициклина гидрохлорида в мазе на липофильной основе
Вывод: Как видно из рисунков спектры поглощения доксициклина гидрохлорида в мазях имеют те же значения максимума светопоглощения что ,что и СО доксициклина гидрохлорида . Поэтому их можно использовать для подтверждения подлинности доксициклина гидрохлорида в мазях.
Однако как видно из рисунка 2 интенсивность поглощения различаются у мазей значительно, в зависимости от используемой основы. Так наибольшее светопоглощение наблюдали у доксициклина гидрохлорида в мази, приготовленной на КМС аквилон, а наименьшее на ГЭЦ. Что связанно с различной степенью высвобождения действующего вещества из основы.
Поэтому дальнейшее исследование проводили на образцы геля доксициклина гидрохлорида приготовленные на основе КМС аквилон, Beneceel TYPE: K4M-PH-CR и мази на липофильной основе.
Методика количественного определения доксициклина гидрохлорида и геле
Точную навеску – 1 г геля помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл воды, перемешивали, доводили тем же растворителем до метки. 10 мл помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили до метки, перемешивали. Измеряли оптическую плотность раствора А при длине волны 348 нм.
Количественное содержание доксициклина гидрохлорида рассчитывали по формуле:
Аx оптическая плотность анализируемого раствора
аx навеска геля (г)
аx навеска СО доксициклина гидрохлорида (г)
Аст оптическая плотность стандартного раствора
Результаты количественного определения доксициклина гидрохлорида в геле приведены в таблице 4.
Таблица 4 – Результаты количественного определения доксициклина гидрохлорида в геле спектрофотометрическим методом
Аст=0,370
| Навеска геля, г. | А348 | Найдено доксициклина гидрохлорида, г/100 г геля | Метрологические характеристики |
| 1,0027 1,0056 0,9183 0,9449 1,024 1,0325 | 0,361 0,368 0,352 0,358 0,377 0,387 | 0,973 0,989 1,036 1,024 0,995 1,013 |  = 1,005S2=5,53∙10-4 S=0,024 Sx =0,0096 ε = ± 2,46 % |
Как видно из данных таблицы относительная погрешность количественного определения доксициклина гидрохлорида методом непосредственной спектрофотометрии не превышает
2,46 %.Методика количественного определения доксициклина гидрохлорида в мазе на липофильной основе
Для приготовления раствора доксициклина гидрохлорида в мази на липофильной основе точную навеску – 1 г модельной смеси мази помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл воды, ставили на кипящую водяную баню и нагревали до расплавления основы. Охлаждали до застывания основы. Жидкость сливали в мерную колбу вместимостью 100 мл. Извлечение повторяли еще 2 раза по 20 мл. Все извлечения объединяли в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводили водой до метки, перемешивали. Содержимое колбы фильтровали, отбрасывали первые 15 мл фильтрата . 10 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили до метки, перемешивали. Измеряли оптическую плотность раствора А при длине волны 348 нм.
Количественное содержание доксициклина гидрохлорида рассчитывали по формуле:
Аx оптическая плотность анализируемого раствора
аx навеска геля (г)
аx навеска СО доксициклина гидрохлорида (г)
Аст оптическая плотность стандартного раствора
Результаты количественного определения доксициклина гидрохлорида в мази приведены в таблице 5.
Таблица 5 – Результаты количественного определения доксициклина гидрохлорида в мази спектрофотометрическим методом
Аст=0,370
| Навеска геля, г. | А348 | Найдено доксициклина гидрохлорида, г/100 г геля | Метрологические характеристики |
| 0,9246 1,0197 1,018 1,027 0,9545 1,038 | 0,351 0,369 0,362 0,386 0,375 0,359 | 0,961 0,978 1,026 1,016 0,987 1,005 |  = 0,9955S2=6,02∙10-4 S=0,025 Sx =0,01 ε = ± 2,59 % |
Как видно из данных таблицы относительная погрешность количественного определения доксициклина гидрохлорида методом непосредственной спектрофотометрии не превышает
2,59 %.