ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 22.03.2019
Просмотров: 918
Скачиваний: 3
fee
т
a
i
При микроскопическом анализе кисл
внимание на видовой состав микрофлоры п ° Молочных пр0дуктов
характеризуются свойственной им микр0<ЬлппДУКТа- Различные к и ^ ККльно обРащают
простокваши, кефира, сметаны и творога Л И' так как для приготпп! 'ОЛОЧНЫе пР°дУкты
культур S. locu s, S. C r e ta n s . S
I m m M V ч т п Я м
_____
Vрис JO).
^стоящие из чистых
Поэтому, чтобы сделать вывод 0 с в е ж е й
'
ШИ
з жать микрофлору закваски и как она в ы ", яди?пМ° Л0ЧН0Г0 "Р°ДУкта,
Из продукта приготовляют ОКПЯп,^..... _
ЯДИТ П°Д микроскопа.
'
Г к о Г би
„т П0Д «
С
Г
необходимо
(комоинированныи фиксатор: смесь 1 части
ниР0ванным фиксатопт, „
метиленового синего). При м и к р о е к о п и р о в а н и и о п р ^ д е ^ ^ ’ Части >Фира. О лТа^и
соотношение
молочнокислых
микробов
з а к ю с к Г р Эрфологию и количественное
микрофлору, которая определяет загрязненность п р о д у в , '^ г»^Р»РУкг,
постороннюю
п .).
^ Дуета (дР ° * * и . бациллы, мицелий и т
Например, накопительную культуру молочнокисл
к
следующим образом. Свежее молоко разливают в nnofim,™
бактеРий м°*н о получить
емкостью в 100-200 мл, наполняя их на 2/3 о б ь е 7 ~
, ! РД! НМеЙеР ° - - - о л б ы
помешают в термостат при 30-35°С . Если и с п о л и с ™
Р
от ватными пробками и
пробирку предварительно вносят по I м Г к и с л о г Г м а ю Г ' г Г '
™ * КаЖЛ>Ю
образуется плотный сгусток, приступают к м и н » ™
После того как в молоке
бактерий и определению молочной кислоты.
пическому изучению молочнокислых
Для микроскопирования готовят временные или постоянные (фиксированные)
препараты. В последнем случае препарат высушивают, фиксируют „а спиртовке или см 2
сью спирта с эфиром ( I : I ) и окрашивают метиленовой синью или карболовым фуксином
Препарат рассматривают под объективом с увеличением х40, а затем под иммерсионным
объективом, увеличивающим в 90 раз
ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАЗМЕРОВ МИКРООРГ АНИЗМОВ
С ПОМОЩЬЮ ОПТИЧЕСКОГО МИКРОСКОПА
Размеры бактерий варьируют в широких пределах — от 0,2 до 125 мкм. У большинства
патогенных бактерий — от десятых долей микрометра до нескольких микрометров.
При характеристике размеров бактерий обычно указывают длину и ширину клетки
в микрометрах (1 0 ~ 3 мм). В качестве инструментов измерения используют окуляр- и
объект-микрометры.
Окуляр-микрометр — стеклянная пластинка, на которой линия в 5 мм разделена на
10 или 2 0 делений (размещают в окуляре).
Объект-микрометр — предметное стекло с линией длиной 0,5 или 1 мм. разделенной
на соты е доли.
Для микроскопирования готовят временные или постоянные (фиксированные)
препараты. В последнем случае препарат высушивают, фиксируют на спиртовке или сме
сью спирта с эфиром (1 :1 ) и окрашивают метиленовой синью или карболовым фуксином
Препарат рассматриваю т под объективом с увеличением х40. а затем под иммерсионным
объективом, увеличивающим в 9 0 раз.
п л ш п и .
1
Л
О П РЕД ЕЛ ЕН И Е РАЗМЕРОВ МИКРООРГАНИЗМОВ С ПОМОЩЬЮ
ОПТИЧЕСКОГО МИКРОСКОПА
Размеры бактерий варьируют в широких пределах
^
" п
" 0™
патогенных бактерий — от десятых долей
^ 1вают W,)H\ и ширину клетки
При хар ак т^ и сти к е
'измерения' используют окуляр- и
в микрометрах ( 1 0 - мм). b к ачеы вс
к.
объект-микрометры.
„.щетинка, на которой линия в 5 мм разделена на
Ок\ляр-микрометр — стеклянная
10 или 2 0 делений (размешают в окуляре)
15
Объект-микрометр
на сотые доли.
предметное стекло с линией длиной 0.5 или
мм- Ра*дС;
,
сниой
Объект-микрометр помещаю! на предметный столик и, глядя в оку |Я
микрометром, совмещают начальную черту в объект- и окуляр-микрометрах
,С окУ;,*р-
ляют
цену деления окуляр-микрометра при данных окуляре и объективе
а'см °пРеДе-
П ри и ер
Шкала объект-микрометра составляет I мм, и одно ее деление о
г е. 10 мкм. При совмещении шкалы объект-микромегра три его деления <т
1
° ,?
мч
соответс
составляет
•• • е- 30
mkmi
лвуют
14 делениям окуляр-микрометра, отсюда одно деление окуляр-микромета
яег 30/14 = 2,14 мкм. После того как определена цена одного деления окуляр-ми*,
ппметпа
вместо объект-микрометра помещают препарат с исследуемым объекту
На поим ер палочковидный микроб по длине занимает 3, а по ширине - 0 , 5 деления окуляр
микрометра
Если одно деление окуляр-микрометра составляет 2 мкм. то Х1ина
бактериальной клетки будет 3-2 = 6 мкм, а ширина - 0,5 • 2 - 1 мкм
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОЙ МАССЫ
Выбор метода для определения бактериальной массы зависит от того, с какой ме 1ьн
это определение проводится. Для оценки урожая обычно взвешивают сырые или с\\ие
отцентрифугированные
клетки.
При
определении
интенсивности
обмена
или
ферментативной активности исходят из содержания в клетках белка или азота. Часто выбор
метода диктуется такими соображениями, как простота или быстрота работы в
повседневной практике предпочтение отдается не прямым, а косвенным методам (посте
соответствующей калибровки).
Прямые методы
1. Сырую биомассу определяют после осаждения клеток центрифугированием. Посте
центрифугирования отмытых клеток можно определить сухую массу. Оба метода не сво
бодны от довольно больших систематических ошибок.
Гораздо большую точность обеспечивает определение общего азота (метод микро-
Кьельдаля и микродиффузионный метод определения аммиака), а также определение об
щего содержания углерода (по Ван Спайку — Фолчу).
3. В повседневной практике часто определяют содержание бактериального бедка
Хорошие результаты дают модификации биуретового метода и другие колориметрические
методы. М икрометоды основаны на измерении количества характерных компонентов
белка: тирозина, триптофана (по Лоури или Ф олину).
Косвенные методы
Г Д л я определения клеточной м ассы весьма полезны методы, основанные на
измерении мутности клеточных суспензий. На практике обычно определяют оптическую
плотность суспензии (турбидиме грия). Для некоторых целей более
точные
результаты дай
определение светорассеяния (неф елометрия). Однако прямая (линейная) зависимойь
между этими показателями и бактериальной массой наблюдается лишь при очень ни м л
плотностях клеточных суспензий. Поскольку рассеяние света
зависит
от
диамсфа. фор’||
и показателя преломления рассеиваю щ их частиц, в том числе клеточных |<к1К,^ )ПИ
приходи
1
ся о г случая к случаю проверять соотнош ение между оптическими веди инь ^
более прямыми показателями, такими как сухая биомасса, содержание в ней
образование
( ( i ^ " ч ,с ,т ) 0 ,,п м а - непосредственно связанные с росли
| и к о т по
1
ч ,м т ,. ,,;т к ,,с ,о г ^ М0,УТ служить адекватной мерой бактерн
и
,,,,ov' ,,p"«*WuwVr и n»Y случаях, когда другие метод»
2 11оказат
(поглощение (У.
оказываюгея
iie n p n n i'm n ?,11
ОПрсле
,сн,,ям прибегают
в
тех случаях,
koi
.
..
Для измерения и .^ и
Ж ,,а ,,Рнм сР при очень малой плотности клеточных с>спои
и Другие методы
*
П рим с,,я,ь ,и ф о метрические, манометрические,
>лскф<
1Ы
311Й
эхимптсокпе
на сотые доли
Объект-микромегр
предметное стекло с линией длиной 0,5 или I и.
Объект-микромегр помещаю! на предметный столик и, глядя в
окуляр
микрометром, совмещают начальную черту в объект- и окуляр-микрометрах ъ
ляют цену деления окуляр-микрометра при данных окуляре и объективе
'см
° пРсДе-
Пример.
Шкала объект-микрометра составляет 1 мм. и одно ее деление
е 30
^КМ)
у'— г
—
■
■
-------
лч«лсние равно ю.
2
Ю мкм. При совмещении шкалы объект-микрометра три его деления <т
твуют 14 делениям окуляр-микрометра. отсюда одно деление окузяп- С ^ М|
ier 30/14 = 2,14 мкм После того как определена цена одного деления ^ИКр<>Ме1
рометра. вместо объект-микрометра помешают препарат с исследуемым
Например, палочковидный микроб по длине занимает 3, а по ширине —
0 5
и и*.
°
ГЬскт°м
»
’ мления окуЛЯр.
составляет
микрометра. Если одно деление окуляр-микрометра составляет 2 мкм
бактериальной клетки будет 3-2 = 6 мкм, а ширина — 0,5 • 2 = 1 мкм.
то Длина
О П РЕДЕЛЕН ИЕ БАКТЕРИАЛЬНОЙ МАССЫ
Выбор метода для определения бактериальной массы зависит от того, с какой
это определение проводится. Для оценки урожая обычно взвешивают сырые или с\Хие
отцентрифу гированн ые
клетки.
При
определении
интенсивности
обмена *И1И
ферментативной активности исходят из содержания в клетках белка или азота. Часто выбор
метода диктуется такими соображениями, как простота или быстрота работы в
повседневной практике предпочтение отдается не прямым, а косвенным методам (посте
соответствующей калибровки).
Прямые методы
1. Сырую биомассу определяют после осаждения клеток центрифугированием Посте
центрифугирования отмытых клеток можно определить сухую массу. Оба метода не сво
бодны от довольно больших систематических ошибок.
Гораздо большую точность обеспечивает определение общ его азота (метод микро-
Кьельдаля и микродиффузионный метод определения аммиака), а также определение об
щего содержания углерода (по Ван Слайку — Фолчу).
3. В повседневной практике часто определяю т содержание бактериального бедка.
Хорошие результаты даю т модификации биуретового метода и другие колориметрические
методы. М икрометоды основаны на измерении количества характерных компонентов
белка: тирозина, триптофана (по Лоури или Ф олину).
Косвенные методы
Г Д л я определения клеточной м ассы весьма полезны методы,
основанные
на
измерении мутности клеточных суспензий. На практике обычно определяют отичеек\ю
плотность
суспензии (турбидиметрия). Д ля некоторых целей более точные
резчлыачы
лаи
определение светорассеяния (неф елометрия) Однако прямая (линейная)
зависимой
ь
между этими показателями и бактериальной массой наблюдается лишь при очень
плотностях клеточных суспензий. П оскольку рассеяние света зависит от диамефа.
и показателя преломления рассеиваю щ их частиц, в том числе клеточных вк1К^ мИ и
приходится от случая к случаю проверять соотнош ение между оптическими вс.
hi
^
более прямыми показателями, такими как сухая биом асса, содержание в ни» ак
2. Показатели интенсивности м етаболи зм а, непосредственно связанные „ ^ ,ерИ-
( поглощение 0 :. образование СО: или ки слот), могут служить адекватной
^ методы
альной массы. К такого рода определениям прибегаю т в тех случаях,
k o l m
лр>
.....„ч
--------------- ----
.....
-
'тн осги клеточных
оказы ваю тся непригодными, например при очен ь малой пло
Для измерения можно применять титром етрические, манометрические. )-,с‘к1Г
и Друз не методы.
имичес
КИС
16