Файл: Учебное пособие для высших сельскохозяйственных учебных заведений по специальности Ветеринарная медицина.pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 25.10.2023
Просмотров: 832
Скачиваний: 3
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
. Один из них представляет собой величину удоя перед- ней (индекс вымени), другой удоя левой половины вымени, выраженную в процентах к общему удою.
Остаточное молоко (полнота выдаивания). Под остаточным молоком понимают количест- во молока, не выдоенное доильным аппаратом и определяемое с помощью ручного доения.
Для машинного доения наиболее пригодны коровы с ваннообразной и чашевидной фор- мами вымени сосками цилиндрической и конической формами, длиной б-8 см, диаметром 2-3см, с расстоянием от дна вымени до земли не менее 50 см, с общей балльной оценкой более 16 баллов, со средней скоростью молокоотдачи 1,5-3,5 кг/мин, индексом вымени не ниже 40%, и с наличием остаточного молоканеболее 300 г.
Клинические методы исследования молочной железы
Клиническое исследование животного проводят по общепринятой схеме: регистрация жи- вотного; сбор анамнеза; исследование органов и систем организма; исследование молочной желе-
139 зы.
При сборе анамнестических данных и их анализе необходимо установить начало заболе- вания или нарушения функциональной деятельности молочной железы, характер проявления первых признаков заболевания и предполагаемую причину. С этой целью в ходе сбора сведений выясняют условия кормления и содержания животных, ухода за молочной железой, для молочных коров — уровень удоя за лактацию и высший суточный удой, способ доения и качество молока, порядок запуска. Устанавливают время и течение последних родов, длительность сухостойного периода, состояние молочной железы до и после родов, стадию полового цикла, время осемене- ния, время заболевания молочной железы и основные признаки заболевания, состояние хозяйства в отношении заболеваний животных вообще и заболевания молочной железы, в частности, было ли заболевание или функциональное нарушение деятельности молочной железы у данного живот- ного в предыдущие годы.
При клиническом осмотре главное внимание уделяется исследованию молочной железы, которое осуществляют в такой последовательности: осмотр, пальпация, выдаивание и исследова- ние секрета молочной железы.
Осмотр. При осмотре определяют степень общего развития молочной железы, учитывая функциональное ее состояние и месяц лактации, форму молочной железы, форму и постановку сосков, состояние кожи молочной железы (цвет, наличие или отсутствие ран, травм, бородавок и др.), симметричность четвертей.
Пальлация. При заболевании отдельных четвертей или долей молочной железы сначала пальпируют условно здоровые. Начинают пальпацию с кончика соска. Путем ощупывания и пробного доения определяют степень развития и тонус сфинктера соскового канала. По силе, применяемой для выдаивания вместимого соска, а также по толщине молочной струи удается выявить аномалии соскового канала, обусловливающие тугодойность или, наоборот, самопроиз- вольное истечение молока. Затем исследуют состояние соска и его цистерны раскатыванием между пальцами соска, что позволяет выявить морфологические изменения в стенке цистерны или установить в ее полости наличие молочных камней. Далее пальпируют паренхиму молочной железы.
У коров после доения паренхима прощупывается в виде упругой, дольчатой ткани. Кроме консистенции, устанавливают, нет ли уплотнений тканей вымени, болевой реакции, определяют местную температуру отдельных участков молочной железы прикладыванием тыльной стороны кисти руки к симметрично расположенным точкам вымени. Задние четверти вымени, рас- положенные между конечностями, как правило, несколько теплее передних. Выявляют состояние надвыменных лимфатических узлов, расположенных у верхней границы задних четвертей, иногда на 2—3 см выше железистой ткани. Нормальная молочная железа имеет эластичную кожу, легко собирающуюся в складки, паренхима умеренно упругая, лимфатические узлы у коровы величиной до голубиного яйца, упругой консистенции, подвижны.
При воспалительных процессах молочная железа увеличена, плотная, болезненная и горя- чая, надвыменные лимфатические узлы могут быть увеличены, болезненны, неподвижны, уплот- нены.
Лабораторные методы исследования секрета молочной железы
Лабораторное исследование молока проводят при диагностике субклинического (скрыто- го) мастита, контроле за результатами лечения коров с поражениями молочной железы, для опре- деления качественных показателей.
Органолептическая оценка молока (секрета)
Определение цвета. В цилиндриз бесцветного стекла емкостью 100-200 мл наливают мо- локо и рассматривают при отраженном дневном свете.
Молоко от клинически здоровых лактирующих коров имеет цвет от белого до слабо жел- того.
В первые 20-30 дней сухостойного периода секрет жидкий, серовато-белого цвета.
Во второй половине сухостойного периода секрета мало (3-5 мл), имеет желтовато- коричневый (редко серовато-белый цвет).
После родов (до 5-7 дней) молозиво желтоватого цвета различных оттенков.
Секрет от больных маститом коров может быть водянистым с синюшным оттенком, иметь желтоватый, соломенно-желтый, красноватый или красный цвет, о наличием беловатых крошек иди хлопьев казеина, желтовато-зеленоватых сгустков гноя, желтоватых крошек фибрина, осадка эритроцитов, тяжей слизи.
Определение консистенции. Устанавливают наблюдение за переливанием молока по стен- кам стеклянных сосудов (стаканов, пробирок, мензурок и т.д.).
140
Молоко (молозиво) от клинически здоровых коров представляет собой однородную жид- кость, без осадка и хлопьев.
Секрет вымени во второй половине сухостойного периода вязкий, тягучий, клейкий (ме- дообразный).
Секрет больных маститом коров расслаивается при отстаивании на осадок, плазму, сливки лучше всего на холоде при температуре 6-8°С. Наличие слизи устанавливают при поворачивании пробирки с секретом вокруг своей оси в наклонном положении под углом 40-45 0
к горизонтали.
Определение запаха. В стакан наливают 50 мл молока и подогревают на водяной бане до комнатной или более высокой (не выше 50°С) температуры.
Молоко от здоровых коров имеет своеобразный специфический запах.
Секрет больных маститом коров может иметь гнилостный, ихорозный запах, запах аммиа- ка, сероводорода и др.
Определение вкуса. В рот набирают небольшое количество молока и определяют его вкус.
Заглатывание анализируемого молока не целесообразно, таккакв последующем вкусовой эффект снижается.
Молоко от здоровых коров имеет специфический, слегка сладковатый вкус.
Секрет больных маститом животных приобретает соленый,горький вкус, прогорклый, ме- таллический привкус и др.
Определение механической загрязненности. Степень чистоты молока определяется с по- мощью прибора «Рекорд», представляющего собой стандартное фильтровальное устройство.
Мерной кружкой отбирают 50 мл хорошо перемешанного молока (для ускорения фильтро- вания молоко подогревают до 35-40°С) и выливают в сосуд прибора, в который предварительно устанавливают ватные фильтры или фланель с диаметром фильтрующей поверхности 27-30мм.
Фильтрование через фланелевые фильтры проводят под давлением. После окончания фильтрова- ния фильтр вынимают, помещают на лист пергаментной бумаги и просушивают на воздухе, предохраняя от попадания пыли.
В зависимости от количества на фильтре механической примеси, (пыль, волоски, частицы корма, песок и др.) молоко распределяют по степени чистоты на три группы: молоко 1-й группы - на фильтре отсутствуют частицы механической примеси; 2-й группы - на фильтре имеются от- дельные частицы механической примеси; 3-й - на фильтре заметный осадок мелких или крупных частиц механической примеси.
Постановка пробы отстаивания. Из долей вымени молоко, давшее с одним из диаг- ностических реактивов положительную и сомнительную реакцию, надаивают в отдельные пробирки в конце доения по 10-15 мл и выдерживают при температуре 4-8°С в течение 16-18 ч, а затем просматривают. Учитывают цвет, наличие осадка или примесей, высоту слоя сливок и их внешний вид.
Пробу считают положительной при наличии осадка объемом 0,1 мл и больше, а также при появлении осадка до 0,1 мл с одновременным изменением цвета молока (водянистое) и характера сливок (слизистые, хлопьевидные, тягучие).
Цитологические методы исследования молока
В молоке содержатся клетки крови, соединительной ткани и десквамированный эпителий молочной железы, объединенные в общее название соматические клетки (СК). Количество СК подвержено значительным колебаниям и является одним из основных показателей функциональ- ного состояния органа. Основную роль, которую выполняют клетки крови (лейкоциты) в молоч- ной железе - это фагоцитоз, и их увеличение в молоке связано с раздражением вымени или с воспалением тканей. Однако увеличение числа СК может происходить и под действием различных физиологических факторов: в молозивный период, в конце лактации, во время течки, с возрастом животного.
Для дифференциации физиологического и патологического увеличения числа СК необхо- димо подсчитывать их в молоке из каждой доли вымени в отдельности, так как воспалительный процесс, как правило, возникает в одной, двух, реже трех долях.
Дифференциацию раздражения вымени (нарушение секреции) от воспалительного процес- са тканей проводят путем повторного через 2-3 суток подсчета СК в молоке из тех же долей вымени после устранения причины, вызвавшей патологический процесс. При раздражении выме- ни через этот срок количество СК снижается и приходит в норму.
Согласно требованию Международной молочной Федерации (ММФ) в молоке здоровых коров количество СК не должно превышать 500 000 в 1 мл. В нашей стране животное считают подозрительным в заболевании маститом при содержании СК в 1 мл молока от 800 000 и более.
Подсчет СК проводят прямыми и косвенными методами.
141
Прямые методы подсчета соматических клеток
К ним относят метод подсчета на стекле по Прэскотту-Бриду, камерные методы по
Н.М.Хилькевичу, И.И.Архангельскому и др. в модификации В.И.Слободяника, подсчет с помо- щью электронного прибора «Фоссоматик», электронных счетчиков частиц: целлоскоп, «Культер-
Каунтер», пикоскель, гемоцитометр кондуктометрический марки ГЦМК-3 и др.
Метод Прэскотта-Брида. Чистое предметное стекло кладут на лист бумаги, расчерченный на квадраты со стороной 1 см. Пробу молока тщательно перемешивают и с помощью микропипет- ки наносят на 3-4 квадрата предметного отекла по 0,01 см
3
. Нанесенную каплю молока равномер- но распределяют по площади квадрата стеклянной палочкой или препаровальной иглой. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют и одновременно обезжиривают нанесением сначала ме- тилового спирта на 10-15 мин, а затем спирт-эфирной смеси до высыхания. Окрашивают мазок рабочим раствором краски Романовского-Гимза (3-4 мл продажного раствора на 100 мл дистилли- рованной воды) методом подслаивания иди при вертикальном положении стекла в течение 20-30 мин. После окрашивания мазок промывают водой и высушивают при комнатной температуре.
Подсчет соматических клеток ведут под микроскопом с иммерсионным объективом. В ка- ждом мазке просматривают 100 полей зрения. Подсчитанное число клеток умножают на коэффи- циент с учетом значений объектива и окуляра и определяют их количество в 1 см
3
молока. Для выведения коэффициента с помощью объект-метра определяют диаметр поля зрения микроскопа и вычисляют площадь одного поля зрения по формуле πR
2
. Затем вычисляют, сколько полей зрения микроскопа размещаются на площади 1 см
2
. Полученный результат переводят на объем.
Пример: определение коэффициента пересчета при окуляре 7 и объективе 90. В поле зре- ния размещается 17 делений объект-метра. Величина одного деления - 0,01 мм. Диаметр поля зрения - 0,01 мм х 17 = 0,17мм, радиус - 0,085 мм. Площадь одного поля зрения -3,14 x 0,085 2
=
0,023 мм
2
или 0,00023 см
2
. Площадь 100 полей зрения будет равна 0,00023 см
2
х 100 = 0,023 ом
2
На площади 1 см
2 таких участков будет: 1 : 0,023 = 43,48. Взятый объем молока 0,01 см
3
в 100 раз меньше 1 см
3
. Коэффициент в данном случае будет равен 4348 (43,48х100).
За окончательный результат принимают среднее арифметическое двух параллельных оп- ределений.
Метод Н.М.Хилькевича. В пробирку наливают 0,4 мл разведенной краски Романовского-
Гимза. (1 мл дистиллированной воды и 5 капель краски) и 20 мм
3
исследуемого секрета вымени, получают разведение 1:20. Через 15-30 мин заполняют камеру Горяева. Лейкоциты подсчитывают в 1 большом квадрате и результат умножают на 5000.
Метод И.И.Архангельского и др. Сначала готовят солюбилизирующий раствор по сле- дующей прописи. К 0,9% раствору натрия хлорида, содержащего 1% формалина и 12,5% этилово- го спирта, добавляют 1% солюбилизатора и нагревают при 60°С в течение 20 мин. В качестве солюбилизатора используют синтанол ДС-10 (оксиэтилированные жирные спирты фракции С
10
-
С
16
с 10 молями окиси этилена) или ПП-40 (полиоксиэтилированное производное пентола с 40 молями окиси этилена). После растворения солюбилизатора к раствору добавляют I% насыщенно- го спиртового раствора основного фуксина и фильтруют через бумажный фильтр. Краску к солю- билизирующему раствору добавляют непосредственно перед опытом.
Для подсчета соматических клеток в пробирку, содержащую 10 мл солюбилизирующего раствора с красителем, добавляют 0,1 мл тщательно перемешанного молока и прогревают в водя- ной бане при 80°С 30 мин. После остывания содержимое пробирки перемешивают и вносят каплю жидкости под покровное стекло счетной камеры : Горяева, Фукс-Розенталя или др. Подсчет кле- ток ведут под микроскопом (окуляр 7 или 10, объектив 8 или 10) во всей камере или в определен- ном ее объеме.
Расчет количества соматических клеток в 1 см
3
проводят по формуле:
1000 х С х А
Х= --------------------------,
V где Х - количество соматических клеток в 1 см
3
молока;
А - количество подсчитанных соматических клеток;
С - разведение;
1000 - множитель, приводящий результат к объему 1см
3
;
V - объем, в котором подсчитаны клетки.
Метод И.И.Архангельского и др. в модификации В.И. Слободяника. Модификация метода
И.И. Архангельского и др. заключается в том, что насыщенный спиртовой раствор основного фуксина добавляют к солюбилизирующему раствору в количестве не I%, а 0,25%. и используют готовый красящий раствор в количествене 10 мл, а 5.
142
Это позволяет готовить полностью красящий раствор заблаговременно и использовать его в течение 15 дней после приготовления.
Расчеты ведут по вышеизложенной формуле с учетом сделанного разведения пробы моло- ка.
Подсчет на приборе «Фоссоматик». Принцип работы прибора основан на том, что ядра соматических клеток молока окрашивают флюорохромовыми красителями и равномерно распре- деляют образец на вращающемся барабане. С помощью электронного устройства учитывается количество флюоресцирующих точек и полученный результат с помощью самописца фиксируется на ленте.
Производительность работы прибора составляет 180 проб молока в 1 ч.
Подсчет на электронных счетчиках частиц: целлоскопе «Культер-Каунтере», пикоскеле, гемоцитометре кондуктометрическом марки ГЦМК-3 и др. Принцип действия этих приборов основан на изменении электрического сопротивления частиц, подлежащих подсчету. При прохож- дении соматических клеток через капиллярное отверстие скачкообразно повышается сопротивле- ние, это служит импульсом, который регистрируется и подсчитывается электронным путем.
Счетчики снабжены дискриминатором - устройством, которым подсчитывают только частицы определенной величины.
Косвенные методы определения соматических клеток
Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов масти- дина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества
(ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реак- цию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молоч- но-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы, определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов прово- дят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы для диагностики субклинического мастита и пробах сборного молока для определения в нем примеси анормального.
Для диагностики мастита по молоку из каждой доли вымени используют диагностические реактивы малой концентрации: мастидин 2%, димастин 5%, мастоприм I%, в пробе Уайт-Сайда
4% раствор едкого натра.
Для диагностики мастита у коров по молоку разового или суточного удоя используют 10% раствор димастидина и 20% димастина, а для определения примеси анормального молока в сбор- ном - 2,5% раствор мастоприма и маститодиагност (реактив Загаевского).
Наличие в составе мастидина, кроме ПАВ, индикатора бромкрезолпурина, а в димастине фенолового красного, позволяет судить по изменению цвета смеси о величине рН исследуемого молока.
При использовании этих реактивов для диагностики субклинического мастита основным диагностическим признаком является образование желеобразного сгустка, а изменение цвета смеси – ориентирующим.
Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл
10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллиро- ванной или прокипяченной воды.
В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-автомата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 с. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения пластинки в горизонтальной плоскости.
Реакцию учитывают по густоте желе: отрицательная реакция (-) - однородная жидкость: сомнительная реакция (±) - следы образования желе; положительная реакция (+) - ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.
На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции (-) образуется однородная смесь. При сомнительной реакции (±) во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити
(тяжи) без тенденции образования сгустка. Положительная реакция (+) - отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пла- стинки в центре луночки.
Определение рН молока по цвету:
143 светло-сиреневый, дымчатый - рН молока нормальная (6,5-6,8); почти белый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5); темно-сиреневый - повышенная щелочность молока (рН больше 8).
Проба с 5% раствором димастина. Раствор димастина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.
Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании моло- ка с 2% раствором мастидина.
Определения рН молока по цвету: оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) – нормальная реакция молока ( рН
6,5-6,8); желтый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5); красный - повышенная щелочность молока (рН больше 6,8); алый и малиновый - ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7,0).
Проба с I% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натром (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде.
Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводяткакпри исследовании моло- ка с 2% раствором мастидина.
Проба Уайтсайда.Готовят 4% раствор едкого натра на дистиллированной воде, который добавляют по 2,5 мл к молоку (по 1 мл) в каждую луночку молочно-контрольной пластинки.
Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании моло- ка с 2% раствором мастидина.
Спустя 30 с. признаки желеобразования могут исчезнуть.
Проба с 10% раствором мастидина. Диагностику мастита у коров по молоку разового или суточного удоя проводят при контрольных дойках и взятии проб для определения жира и других показателей молока. Молоко в количестве 1 мл берут из молокомера или суточной пробы и выливают в луночку молочно-контрольной пластинки. Затем добавляют 1 мл 10 % раствора мастидина.
Техника постановки пробы на пластинках ПМК-1 и ПМК-2 и учет реакции по образова- нию желе и цвету проводят как указано раньше.
Для определения пораженной доли вымени от животных, давших положительную и со- мнительную реакцию с 10% раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 2% раствором мастидина, или 5% раствором димастина, или 1% раствором масто- прима, или пробой Уайтсайда.
Проба с 20% растворам димастина. Постановку пробы и учет реакции проводят как с 5% раствором.
Соответствие количества соматических клеток (млн./мл), подсчитанных по методу Прэ- скотта-Брида, показаниям реакции молока из долей вымени коров с 2% раствором мастидина и
5% раствором димастина по данным А.И.Ивашуры, представлены в таблице 2:
Таблица. 2.
Соответствие количества соматических клеток показаниям реакции молока
Реактив
Реакция с реактивом; количество СК
-
+/-
+
Мастдин
213408 1168248 -3752443 6987531 -21179849
Димстин
107230 1656400 -4759550 9279290 -27936675
Проба с 2,5% раствором мастоприма. Примесь анормального молока в сборном опреде- ляют на молокоперерабатывающих предприятиях.
Остаточное молоко (полнота выдаивания). Под остаточным молоком понимают количест- во молока, не выдоенное доильным аппаратом и определяемое с помощью ручного доения.
Для машинного доения наиболее пригодны коровы с ваннообразной и чашевидной фор- мами вымени сосками цилиндрической и конической формами, длиной б-8 см, диаметром 2-3см, с расстоянием от дна вымени до земли не менее 50 см, с общей балльной оценкой более 16 баллов, со средней скоростью молокоотдачи 1,5-3,5 кг/мин, индексом вымени не ниже 40%, и с наличием остаточного молоканеболее 300 г.
Клинические методы исследования молочной железы
Клиническое исследование животного проводят по общепринятой схеме: регистрация жи- вотного; сбор анамнеза; исследование органов и систем организма; исследование молочной желе-
139 зы.
При сборе анамнестических данных и их анализе необходимо установить начало заболе- вания или нарушения функциональной деятельности молочной железы, характер проявления первых признаков заболевания и предполагаемую причину. С этой целью в ходе сбора сведений выясняют условия кормления и содержания животных, ухода за молочной железой, для молочных коров — уровень удоя за лактацию и высший суточный удой, способ доения и качество молока, порядок запуска. Устанавливают время и течение последних родов, длительность сухостойного периода, состояние молочной железы до и после родов, стадию полового цикла, время осемене- ния, время заболевания молочной железы и основные признаки заболевания, состояние хозяйства в отношении заболеваний животных вообще и заболевания молочной железы, в частности, было ли заболевание или функциональное нарушение деятельности молочной железы у данного живот- ного в предыдущие годы.
При клиническом осмотре главное внимание уделяется исследованию молочной железы, которое осуществляют в такой последовательности: осмотр, пальпация, выдаивание и исследова- ние секрета молочной железы.
Осмотр. При осмотре определяют степень общего развития молочной железы, учитывая функциональное ее состояние и месяц лактации, форму молочной железы, форму и постановку сосков, состояние кожи молочной железы (цвет, наличие или отсутствие ран, травм, бородавок и др.), симметричность четвертей.
Пальлация. При заболевании отдельных четвертей или долей молочной железы сначала пальпируют условно здоровые. Начинают пальпацию с кончика соска. Путем ощупывания и пробного доения определяют степень развития и тонус сфинктера соскового канала. По силе, применяемой для выдаивания вместимого соска, а также по толщине молочной струи удается выявить аномалии соскового канала, обусловливающие тугодойность или, наоборот, самопроиз- вольное истечение молока. Затем исследуют состояние соска и его цистерны раскатыванием между пальцами соска, что позволяет выявить морфологические изменения в стенке цистерны или установить в ее полости наличие молочных камней. Далее пальпируют паренхиму молочной железы.
У коров после доения паренхима прощупывается в виде упругой, дольчатой ткани. Кроме консистенции, устанавливают, нет ли уплотнений тканей вымени, болевой реакции, определяют местную температуру отдельных участков молочной железы прикладыванием тыльной стороны кисти руки к симметрично расположенным точкам вымени. Задние четверти вымени, рас- положенные между конечностями, как правило, несколько теплее передних. Выявляют состояние надвыменных лимфатических узлов, расположенных у верхней границы задних четвертей, иногда на 2—3 см выше железистой ткани. Нормальная молочная железа имеет эластичную кожу, легко собирающуюся в складки, паренхима умеренно упругая, лимфатические узлы у коровы величиной до голубиного яйца, упругой консистенции, подвижны.
При воспалительных процессах молочная железа увеличена, плотная, болезненная и горя- чая, надвыменные лимфатические узлы могут быть увеличены, болезненны, неподвижны, уплот- нены.
Лабораторные методы исследования секрета молочной железы
Лабораторное исследование молока проводят при диагностике субклинического (скрыто- го) мастита, контроле за результатами лечения коров с поражениями молочной железы, для опре- деления качественных показателей.
Органолептическая оценка молока (секрета)
Определение цвета. В цилиндриз бесцветного стекла емкостью 100-200 мл наливают мо- локо и рассматривают при отраженном дневном свете.
Молоко от клинически здоровых лактирующих коров имеет цвет от белого до слабо жел- того.
В первые 20-30 дней сухостойного периода секрет жидкий, серовато-белого цвета.
Во второй половине сухостойного периода секрета мало (3-5 мл), имеет желтовато- коричневый (редко серовато-белый цвет).
После родов (до 5-7 дней) молозиво желтоватого цвета различных оттенков.
Секрет от больных маститом коров может быть водянистым с синюшным оттенком, иметь желтоватый, соломенно-желтый, красноватый или красный цвет, о наличием беловатых крошек иди хлопьев казеина, желтовато-зеленоватых сгустков гноя, желтоватых крошек фибрина, осадка эритроцитов, тяжей слизи.
Определение консистенции. Устанавливают наблюдение за переливанием молока по стен- кам стеклянных сосудов (стаканов, пробирок, мензурок и т.д.).
140
Молоко (молозиво) от клинически здоровых коров представляет собой однородную жид- кость, без осадка и хлопьев.
Секрет вымени во второй половине сухостойного периода вязкий, тягучий, клейкий (ме- дообразный).
Секрет больных маститом коров расслаивается при отстаивании на осадок, плазму, сливки лучше всего на холоде при температуре 6-8°С. Наличие слизи устанавливают при поворачивании пробирки с секретом вокруг своей оси в наклонном положении под углом 40-45 0
к горизонтали.
Определение запаха. В стакан наливают 50 мл молока и подогревают на водяной бане до комнатной или более высокой (не выше 50°С) температуры.
Молоко от здоровых коров имеет своеобразный специфический запах.
Секрет больных маститом коров может иметь гнилостный, ихорозный запах, запах аммиа- ка, сероводорода и др.
Определение вкуса. В рот набирают небольшое количество молока и определяют его вкус.
Заглатывание анализируемого молока не целесообразно, таккакв последующем вкусовой эффект снижается.
Молоко от здоровых коров имеет специфический, слегка сладковатый вкус.
Секрет больных маститом животных приобретает соленый,горький вкус, прогорклый, ме- таллический привкус и др.
Определение механической загрязненности. Степень чистоты молока определяется с по- мощью прибора «Рекорд», представляющего собой стандартное фильтровальное устройство.
Мерной кружкой отбирают 50 мл хорошо перемешанного молока (для ускорения фильтро- вания молоко подогревают до 35-40°С) и выливают в сосуд прибора, в который предварительно устанавливают ватные фильтры или фланель с диаметром фильтрующей поверхности 27-30мм.
Фильтрование через фланелевые фильтры проводят под давлением. После окончания фильтрова- ния фильтр вынимают, помещают на лист пергаментной бумаги и просушивают на воздухе, предохраняя от попадания пыли.
В зависимости от количества на фильтре механической примеси, (пыль, волоски, частицы корма, песок и др.) молоко распределяют по степени чистоты на три группы: молоко 1-й группы - на фильтре отсутствуют частицы механической примеси; 2-й группы - на фильтре имеются от- дельные частицы механической примеси; 3-й - на фильтре заметный осадок мелких или крупных частиц механической примеси.
Постановка пробы отстаивания. Из долей вымени молоко, давшее с одним из диаг- ностических реактивов положительную и сомнительную реакцию, надаивают в отдельные пробирки в конце доения по 10-15 мл и выдерживают при температуре 4-8°С в течение 16-18 ч, а затем просматривают. Учитывают цвет, наличие осадка или примесей, высоту слоя сливок и их внешний вид.
Пробу считают положительной при наличии осадка объемом 0,1 мл и больше, а также при появлении осадка до 0,1 мл с одновременным изменением цвета молока (водянистое) и характера сливок (слизистые, хлопьевидные, тягучие).
Цитологические методы исследования молока
В молоке содержатся клетки крови, соединительной ткани и десквамированный эпителий молочной железы, объединенные в общее название соматические клетки (СК). Количество СК подвержено значительным колебаниям и является одним из основных показателей функциональ- ного состояния органа. Основную роль, которую выполняют клетки крови (лейкоциты) в молоч- ной железе - это фагоцитоз, и их увеличение в молоке связано с раздражением вымени или с воспалением тканей. Однако увеличение числа СК может происходить и под действием различных физиологических факторов: в молозивный период, в конце лактации, во время течки, с возрастом животного.
Для дифференциации физиологического и патологического увеличения числа СК необхо- димо подсчитывать их в молоке из каждой доли вымени в отдельности, так как воспалительный процесс, как правило, возникает в одной, двух, реже трех долях.
Дифференциацию раздражения вымени (нарушение секреции) от воспалительного процес- са тканей проводят путем повторного через 2-3 суток подсчета СК в молоке из тех же долей вымени после устранения причины, вызвавшей патологический процесс. При раздражении выме- ни через этот срок количество СК снижается и приходит в норму.
Согласно требованию Международной молочной Федерации (ММФ) в молоке здоровых коров количество СК не должно превышать 500 000 в 1 мл. В нашей стране животное считают подозрительным в заболевании маститом при содержании СК в 1 мл молока от 800 000 и более.
Подсчет СК проводят прямыми и косвенными методами.
141
Прямые методы подсчета соматических клеток
К ним относят метод подсчета на стекле по Прэскотту-Бриду, камерные методы по
Н.М.Хилькевичу, И.И.Архангельскому и др. в модификации В.И.Слободяника, подсчет с помо- щью электронного прибора «Фоссоматик», электронных счетчиков частиц: целлоскоп, «Культер-
Каунтер», пикоскель, гемоцитометр кондуктометрический марки ГЦМК-3 и др.
Метод Прэскотта-Брида. Чистое предметное стекло кладут на лист бумаги, расчерченный на квадраты со стороной 1 см. Пробу молока тщательно перемешивают и с помощью микропипет- ки наносят на 3-4 квадрата предметного отекла по 0,01 см
3
. Нанесенную каплю молока равномер- но распределяют по площади квадрата стеклянной палочкой или препаровальной иглой. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют и одновременно обезжиривают нанесением сначала ме- тилового спирта на 10-15 мин, а затем спирт-эфирной смеси до высыхания. Окрашивают мазок рабочим раствором краски Романовского-Гимза (3-4 мл продажного раствора на 100 мл дистилли- рованной воды) методом подслаивания иди при вертикальном положении стекла в течение 20-30 мин. После окрашивания мазок промывают водой и высушивают при комнатной температуре.
Подсчет соматических клеток ведут под микроскопом с иммерсионным объективом. В ка- ждом мазке просматривают 100 полей зрения. Подсчитанное число клеток умножают на коэффи- циент с учетом значений объектива и окуляра и определяют их количество в 1 см
3
молока. Для выведения коэффициента с помощью объект-метра определяют диаметр поля зрения микроскопа и вычисляют площадь одного поля зрения по формуле πR
2
. Затем вычисляют, сколько полей зрения микроскопа размещаются на площади 1 см
2
. Полученный результат переводят на объем.
Пример: определение коэффициента пересчета при окуляре 7 и объективе 90. В поле зре- ния размещается 17 делений объект-метра. Величина одного деления - 0,01 мм. Диаметр поля зрения - 0,01 мм х 17 = 0,17мм, радиус - 0,085 мм. Площадь одного поля зрения -3,14 x 0,085 2
=
0,023 мм
2
или 0,00023 см
2
. Площадь 100 полей зрения будет равна 0,00023 см
2
х 100 = 0,023 ом
2
На площади 1 см
2 таких участков будет: 1 : 0,023 = 43,48. Взятый объем молока 0,01 см
3
в 100 раз меньше 1 см
3
. Коэффициент в данном случае будет равен 4348 (43,48х100).
За окончательный результат принимают среднее арифметическое двух параллельных оп- ределений.
Метод Н.М.Хилькевича. В пробирку наливают 0,4 мл разведенной краски Романовского-
Гимза. (1 мл дистиллированной воды и 5 капель краски) и 20 мм
3
исследуемого секрета вымени, получают разведение 1:20. Через 15-30 мин заполняют камеру Горяева. Лейкоциты подсчитывают в 1 большом квадрате и результат умножают на 5000.
Метод И.И.Архангельского и др. Сначала готовят солюбилизирующий раствор по сле- дующей прописи. К 0,9% раствору натрия хлорида, содержащего 1% формалина и 12,5% этилово- го спирта, добавляют 1% солюбилизатора и нагревают при 60°С в течение 20 мин. В качестве солюбилизатора используют синтанол ДС-10 (оксиэтилированные жирные спирты фракции С
10
-
С
16
с 10 молями окиси этилена) или ПП-40 (полиоксиэтилированное производное пентола с 40 молями окиси этилена). После растворения солюбилизатора к раствору добавляют I% насыщенно- го спиртового раствора основного фуксина и фильтруют через бумажный фильтр. Краску к солю- билизирующему раствору добавляют непосредственно перед опытом.
Для подсчета соматических клеток в пробирку, содержащую 10 мл солюбилизирующего раствора с красителем, добавляют 0,1 мл тщательно перемешанного молока и прогревают в водя- ной бане при 80°С 30 мин. После остывания содержимое пробирки перемешивают и вносят каплю жидкости под покровное стекло счетной камеры : Горяева, Фукс-Розенталя или др. Подсчет кле- ток ведут под микроскопом (окуляр 7 или 10, объектив 8 или 10) во всей камере или в определен- ном ее объеме.
Расчет количества соматических клеток в 1 см
3
проводят по формуле:
1000 х С х А
Х= --------------------------,
V где Х - количество соматических клеток в 1 см
3
молока;
А - количество подсчитанных соматических клеток;
С - разведение;
1000 - множитель, приводящий результат к объему 1см
3
;
V - объем, в котором подсчитаны клетки.
Метод И.И.Архангельского и др. в модификации В.И. Слободяника. Модификация метода
И.И. Архангельского и др. заключается в том, что насыщенный спиртовой раствор основного фуксина добавляют к солюбилизирующему раствору в количестве не I%, а 0,25%. и используют готовый красящий раствор в количествене 10 мл, а 5.
142
Это позволяет готовить полностью красящий раствор заблаговременно и использовать его в течение 15 дней после приготовления.
Расчеты ведут по вышеизложенной формуле с учетом сделанного разведения пробы моло- ка.
Подсчет на приборе «Фоссоматик». Принцип работы прибора основан на том, что ядра соматических клеток молока окрашивают флюорохромовыми красителями и равномерно распре- деляют образец на вращающемся барабане. С помощью электронного устройства учитывается количество флюоресцирующих точек и полученный результат с помощью самописца фиксируется на ленте.
Производительность работы прибора составляет 180 проб молока в 1 ч.
Подсчет на электронных счетчиках частиц: целлоскопе «Культер-Каунтере», пикоскеле, гемоцитометре кондуктометрическом марки ГЦМК-3 и др. Принцип действия этих приборов основан на изменении электрического сопротивления частиц, подлежащих подсчету. При прохож- дении соматических клеток через капиллярное отверстие скачкообразно повышается сопротивле- ние, это служит импульсом, который регистрируется и подсчитывается электронным путем.
Счетчики снабжены дискриминатором - устройством, которым подсчитывают только частицы определенной величины.
Косвенные методы определения соматических клеток
Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов масти- дина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества
(ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реак- цию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молоч- но-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы, определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов прово- дят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы для диагностики субклинического мастита и пробах сборного молока для определения в нем примеси анормального.
Для диагностики мастита по молоку из каждой доли вымени используют диагностические реактивы малой концентрации: мастидин 2%, димастин 5%, мастоприм I%, в пробе Уайт-Сайда
4% раствор едкого натра.
Для диагностики мастита у коров по молоку разового или суточного удоя используют 10% раствор димастидина и 20% димастина, а для определения примеси анормального молока в сбор- ном - 2,5% раствор мастоприма и маститодиагност (реактив Загаевского).
Наличие в составе мастидина, кроме ПАВ, индикатора бромкрезолпурина, а в димастине фенолового красного, позволяет судить по изменению цвета смеси о величине рН исследуемого молока.
При использовании этих реактивов для диагностики субклинического мастита основным диагностическим признаком является образование желеобразного сгустка, а изменение цвета смеси – ориентирующим.
Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл
10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллиро- ванной или прокипяченной воды.
В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-автомата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 с. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения пластинки в горизонтальной плоскости.
Реакцию учитывают по густоте желе: отрицательная реакция (-) - однородная жидкость: сомнительная реакция (±) - следы образования желе; положительная реакция (+) - ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.
На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции (-) образуется однородная смесь. При сомнительной реакции (±) во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити
(тяжи) без тенденции образования сгустка. Положительная реакция (+) - отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пла- стинки в центре луночки.
Определение рН молока по цвету:
143 светло-сиреневый, дымчатый - рН молока нормальная (6,5-6,8); почти белый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5); темно-сиреневый - повышенная щелочность молока (рН больше 8).
Проба с 5% раствором димастина. Раствор димастина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.
Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании моло- ка с 2% раствором мастидина.
Определения рН молока по цвету: оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) – нормальная реакция молока ( рН
6,5-6,8); желтый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5); красный - повышенная щелочность молока (рН больше 6,8); алый и малиновый - ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7,0).
Проба с I% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натром (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде.
Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводяткакпри исследовании моло- ка с 2% раствором мастидина.
Проба Уайтсайда.Готовят 4% раствор едкого натра на дистиллированной воде, который добавляют по 2,5 мл к молоку (по 1 мл) в каждую луночку молочно-контрольной пластинки.
Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании моло- ка с 2% раствором мастидина.
Спустя 30 с. признаки желеобразования могут исчезнуть.
Проба с 10% раствором мастидина. Диагностику мастита у коров по молоку разового или суточного удоя проводят при контрольных дойках и взятии проб для определения жира и других показателей молока. Молоко в количестве 1 мл берут из молокомера или суточной пробы и выливают в луночку молочно-контрольной пластинки. Затем добавляют 1 мл 10 % раствора мастидина.
Техника постановки пробы на пластинках ПМК-1 и ПМК-2 и учет реакции по образова- нию желе и цвету проводят как указано раньше.
Для определения пораженной доли вымени от животных, давших положительную и со- мнительную реакцию с 10% раствором мастидина, отбирают пробы молока из каждой четверти и исследуют с 2% раствором мастидина, или 5% раствором димастина, или 1% раствором масто- прима, или пробой Уайтсайда.
Проба с 20% растворам димастина. Постановку пробы и учет реакции проводят как с 5% раствором.
Соответствие количества соматических клеток (млн./мл), подсчитанных по методу Прэ- скотта-Брида, показаниям реакции молока из долей вымени коров с 2% раствором мастидина и
5% раствором димастина по данным А.И.Ивашуры, представлены в таблице 2:
Таблица. 2.
Соответствие количества соматических клеток показаниям реакции молока
Реактив
Реакция с реактивом; количество СК
-
+/-
+
Мастдин
213408 1168248 -3752443 6987531 -21179849
Димстин
107230 1656400 -4759550 9279290 -27936675
Проба с 2,5% раствором мастоприма. Примесь анормального молока в сборном опреде- ляют на молокоперерабатывающих предприятиях.