Файл: Содержание Введение Производственная практика в гсббж.rtf
Добавлен: 12.12.2023
Просмотров: 382
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
«Optima 7300 DV Атомно-эмиссионный спектрометр с индуктивно связанной плазмой» предназначен для одновременного многоэлементного анализа (более 30 элементов), низкие пределы обнаружения, прекрасная воспроизводимость;«КВАНТ 2А атомно-абсорбционный спектрометр» предназначен для определения химических элементов: свинца, магния, меди, цинка и др, в продукции растительного и животного происхождения, почве, донных отложениях;«SHIMADZU AA7000 атомно-абсорбционный спектрометр» предназначен для определения тяжелых металлов и других химических элементов в продукции животного, растительного происхождения, почве, донных отложениях;«Концетратометр KH-3» - предназначен для измерения массовой концентрации нефтепродуктов, жиров, в пробах питьевых, природных и сточных вод, почвах, донных отложениях;«Лабораторная центрифуга MPW-251» предназначена для сепарации смесей, суспензий и соматических жидких сред на составляющие компоненты различной плотности под воздействием центробежной силы.Практическое ознакомление с отделом мониторинга и дополнительного образованияЗанимается доставкой проб, заключением договоров с заказчиками, определением спроса и потребностей рынка в услугах Учреждения.Осуществляет прием и шифрование проб. Формирует общий протокол испытательной лаборатории.Специализируется на наблюдении результатов лабораторных исследований, ведении их учета, определение статистической тенденции, проведение свода и анализа отчетной информации ФГБУ ЦНПВРЛ о результатах лабораторных исследований.Организует работу по метрологическому обеспечению лаборатории и инженерно-техническому обслуживанию лабораторного оборудования.Методы исследования пищевых продуктов в ФГБУ ЦНПВРЛ в отделе ветеринарно-санитарной экспертизы
Сущность метода.Метод основан на количественном подсчете колоний микроорганизмов, вырастающих в глубине и на поверхности плотного питательного агара при температуре 30 +/- 1 °С в течение 72 ч [23]. При определении количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов руководствуются ГОСТом 26670-91 и ГОСТом 10444.15-94 с учетом нижеизложенных рекомендаций.Проведение анализа.Для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 300 колоний [23].Перед посевом чашки маркируют. На дно чашки карандашом по стеклу наносят номер исследуемого образца, разведение и дату.По 1 куб. см каждого разведения образца, вносят в 2 чашки Петри (параллельное определение). Посевной материал можно вносить от большего разведения к меньшему, пользуясь одной пипеткой. Пипетку с посевным материалом держат под углом 45°, касаясь концом пипетки дна чашки, не выдувая последнюю каплю из пипетки. Затем, не позже чем через 20 мин., вносят в чашку питательную среду, расплавленную на водяной бане и остуженную до 45 °С, осторожно и равномерно перемешивают содержимое чашки. Высота слоя питательной среды должна быть не менее 4 - 5 мм [23].После застывания среды чашки переворачивают крышками вниз и помещают в термостат при 30 +/- 1 °С на 72 ч (допускается предварительный учет через 48 ч с последующим окончательным учетом еще через 24 ч) [23].После инкубации подсчитывают все выросшие колонии на тех чашках, где их количество составляет 15 - 300 колоний, при этом чашки располагают вверх дном на темном фоне. Подсчет производят при помощи лупы с увеличением от 4 до 10 раз или специального прибора для счета колоний.Если инкубированные чашки с разведением 1:10 не содержат колоний, то результат выражают так: меньше чем 1 х 10 КОЕ (колониеобразующих единиц) на 1 г исследуемого образца. Если на каждой из двух параллельных чашек с разведением 1:10 содержится меньше чем 15 колоний, то результат выражается так:менее чем 1,5 х 10 .Если количество колоний более 15, подсчитывают колонии на обеих чашках с одним и тем же разведением и вычисляют среднюю величину, умножают среднюю величину на соответствующее разведение и получают число микроорганизмов в 1 г продукта.При подсчете микроорганизмов целесообразно руководствоваться ГОСТом 26670-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Методы культивирования микроорганизмов".
Полученный результат округляют до числа, кратного:- 5, если среднее арифметическое число микроорганизмов менее 100;- 20, если среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и оканчивается цифрой 5;- 10, если среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и не оканчивается цифрой 5 [23].Ответ выражают в виде числа КОЕ/г с указанием соответствия или несоответствия микробиологическому нормативу на этот показатель [23].Бактерии группы кишечных палочек (колиформные бактерии)Условно выделяемая по морфологическим и культуральным признакам группа бактерий семейства энтеробактерий, используемая санитарной микробиологией в качестве маркера фекальной контаминации, относятся к группе так называемых санитарно-показательных микроорганизмов [24]. В соответствии с принятой международной номенклатурой к бактериям группы кишечных палочек (БГКП) отнесены факультативно-анаэробные, грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 36 +/- 1 °С в течение 24 - 48 ч, в основном являющиеся представителями родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia (т.е. учитываются как цитратотрицательные, так и цитратположительные варианты БГКП). Методы исследования на БГКП приведены в ГОСТе Р 50474-93.Сущность метода.Метод основан на высеве определенного количества продукта в жидкую селективную среду, содержащую лактозу для определения сбраживающей способности по образованию кислоты и газа и, при необходимости, пересева культуральной жидкости на поверхность плотных специальных агаризованных сред для подтверждения принадлежности по культуральным и биохимическим признакам выделенных колоний к колиформным бактериям [24].Проведение анализа.Для посева используют то количество продукта, в котором предусматривается отсутствие БГКП. Посев производят в среду Кесслер с лактозой (с поплавками) в соотношении разведения и среды 1:10 [24].Пробирки или колбы с посевами помещают в термостат при температуре 36 +/- 1 °С на 24 - 48 ч, после этого посевы просматривают и при отсутствии признаков роста - газообразования или помутнения среды - дают заключение об отсутствии БГКП (коли-форм) в исследуемой массе изделия [24].Из пробирок или колб со средой Кесслер, в которых обнаружено газообразование или помутнение, производят пересев на среду Эндо или Левина [24]. Посев производят петлей по поверхности хорошо подсушенной среды штрихами для получения изолированных колоний. Чашки с посевами помещают крышками вниз в термостат с температурой 36 +/- 1 °С на 18 - 24 ч [24].
При отсутствии на среде Эндо или Левина колоний, типичных для бактерий группы кишечных палочек (на среде Эндо - красных и темно-красных с металлическим блеском или без него, розовых или бледно-розовых; на среде Левина - черных с металлическим блеском, темных с черным центром, сиреневых с темным центром), дают заключение об отсутствии БГКП в исследуемом количестве продукта и соответствии его нормативу на бактерии группы кишечных палочек (колиформные бактерии) [24].При наличии на среде Эндо или Левина колоний, характерных для кишечных палочек, из них готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют [24].Наличие в мазках-препаратах грамотрицательных, не содержащих спор палочек, указывает на присутствие бактерий группы кишечных палочек в анализируемой массе изделия и несоответствие его микробиологическому нормативу.При выявлении на среде Эндо мелких бесцветных колоний, подозрительных на наличие возбудителей кишечных инфекций, колонии снимают и изучают на принадлежность к патогенным микроорганизмам семейства кишечных, а в случае подтверждения извещают территориальное учреждение госсанэпиднадзора и при необходимости передают туда для дальнейшей идентификации [24].Определение бактерий рода SalmonellaСальмонеллы - обширный род семейства энтеробактерий, включающий более 2000 сероваров, большинство которых обладает патогенными свойствами [25]. Сальмонеллы - факультативно-анаэробные грамотрицательные, в основном подвижные палочки или неподвижные (S. pullorum, S. gallinarum и др.), хорошо растущие на обычных питательных средах и разнообразных пищевых субстратах [25].При исследовании образцов на наличие сальмонелл руководствуются ГОСТом Р 50480-93 с учетом нижеизложенных методических рекомендаций. Сущность метода.Метод основан на высеве определенной массы (количества) продукта, в которой нормируется отсутствие патогенных микроорганизмов, в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов, последующем накоплении бактерий в жидких селективных средах, выявлении бактерий, образующих типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики [25].Проведение анализа.Навеску продукта (25 г), соответствующую нормативу на сальмонеллы, засевают в колбу с пептонным буферным раствором в соотношении 1:9 для предварительного неселективного обогащения. Посевы инкубируют при 36 +/- 1 °С в течение 18 - 24 ч. После этого производят пересев культуры из пептонного буферного раствора в две среды для селективного обогащения. Для этого 10 куб. см культуральной жидкости переносят в 100 куб. см магниевой среды и в 100 куб. см тетратионатной среды, или по 10 куб. см культуры переносят в 100 куб. см селенитовой среды и в 100 куб. см тетратионатной среды [25].
Посевы инкубируют 24 ч на магниевой и селенитовой средах при температуре 36 +/- 1 °С, а на тетратионатной среде при температуре 43 +/- 1 °С [25].Через 24 ч инкубирования культуры пересевают на три агаризованные среды: висмут-сульфит агар, среду Плоскирева и среду Эндо (взамен Эндо можно использовать среду Левина) [25].Допускается использование одной чашки каждой из сред для одновременного высева с двух селективных сред [25].Посевы инкубируют при температуре 36 +/- 1 °С в течение 24 - 48 ч [25].После 24 ч инкубирования посевов проводят предварительный учет результатов, а после 48 ч - окончательный [25].После инкубирования посевов на дифференциально-диагностических средах отмечают рост колоний, характерных для бактерий рода Salmonella:- на висмут-сульфит агаре - колонии черные с характерным металлическим блеском, а также зеленоватые с темно-зеленым ободком и с пигментированием среды под колонией;- на среде Плоскирева - колонии бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо;- на среде Эндо - колонии круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные;- на среде Левина - колонии прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.При отсутствии в посевах на дифференциально-диагностических средах характерных для бактерий рода Salmonella колоний дают заключение об отсутствии бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске продукта.При наличии хотя бы на одной дифференциально-диагностической среде характерных для бактерий рода Salmonella колоний проводят их дальнейшее изучение [25].Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных колоний к бактериям рода Salmonella.Не менее трех характерных колоний с каждой дифференциально-диагностической среды (а в случае наличия 1 - 2 типичных колоний - каждую из них) пересевают на скошенную поверхность мясопептонного агара или среды из сухого питательного агара [26]. Часть колоний пересевают штрихом по поверхности и уколом в столбик трехсахарного агара. Посевы инкубируют при температуре 36 +/- 1 °С в течение 24 ч [26].Из отобранных для биохимического подтверждения колоний готовят мазки и окрашивают по Граму (по ГОСТу 10444.1).Бактерии рода Salmonella являются бесспоровыми грамотрицательными палочками с закругленными концами [26].После инкубации посевов, проводят учет результатов ферментации лактозы, глюкозы и сахарозы на трехсахарном агаре:- пожелтение скошенной части среды указывает на ферментацию лактозы или сахарозы или обоих сахаров (пожелтение столбика среды с разрывом агара или пузырьками газа указывает на ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа, пожелтение столбика среды без разрывов или пузырьков газа указывает на ферментацию глюкозы до кислоты без образования газа);
-
Исследования на паразитарную чистоту в отделе ветеринарно-санитарной экспертизы
Сущность метода.Метод основан на количественном подсчете колоний микроорганизмов, вырастающих в глубине и на поверхности плотного питательного агара при температуре 30 +/- 1 °С в течение 72 ч [23]. При определении количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов руководствуются ГОСТом 26670-91 и ГОСТом 10444.15-94 с учетом нижеизложенных рекомендаций.Проведение анализа.Для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 300 колоний [23].Перед посевом чашки маркируют. На дно чашки карандашом по стеклу наносят номер исследуемого образца, разведение и дату.По 1 куб. см каждого разведения образца, вносят в 2 чашки Петри (параллельное определение). Посевной материал можно вносить от большего разведения к меньшему, пользуясь одной пипеткой. Пипетку с посевным материалом держат под углом 45°, касаясь концом пипетки дна чашки, не выдувая последнюю каплю из пипетки. Затем, не позже чем через 20 мин., вносят в чашку питательную среду, расплавленную на водяной бане и остуженную до 45 °С, осторожно и равномерно перемешивают содержимое чашки. Высота слоя питательной среды должна быть не менее 4 - 5 мм [23].После застывания среды чашки переворачивают крышками вниз и помещают в термостат при 30 +/- 1 °С на 72 ч (допускается предварительный учет через 48 ч с последующим окончательным учетом еще через 24 ч) [23].После инкубации подсчитывают все выросшие колонии на тех чашках, где их количество составляет 15 - 300 колоний, при этом чашки располагают вверх дном на темном фоне. Подсчет производят при помощи лупы с увеличением от 4 до 10 раз или специального прибора для счета колоний.Если инкубированные чашки с разведением 1:10 не содержат колоний, то результат выражают так: меньше чем 1 х 10 КОЕ (колониеобразующих единиц) на 1 г исследуемого образца. Если на каждой из двух параллельных чашек с разведением 1:10 содержится меньше чем 15 колоний, то результат выражается так:менее чем 1,5 х 10 .Если количество колоний более 15, подсчитывают колонии на обеих чашках с одним и тем же разведением и вычисляют среднюю величину, умножают среднюю величину на соответствующее разведение и получают число микроорганизмов в 1 г продукта.При подсчете микроорганизмов целесообразно руководствоваться ГОСТом 26670-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Методы культивирования микроорганизмов".
Полученный результат округляют до числа, кратного:- 5, если среднее арифметическое число микроорганизмов менее 100;- 20, если среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и оканчивается цифрой 5;- 10, если среднее арифметическое число микроорганизмов более 100 и не оканчивается цифрой 5 [23].Ответ выражают в виде числа КОЕ/г с указанием соответствия или несоответствия микробиологическому нормативу на этот показатель [23].Бактерии группы кишечных палочек (колиформные бактерии)Условно выделяемая по морфологическим и культуральным признакам группа бактерий семейства энтеробактерий, используемая санитарной микробиологией в качестве маркера фекальной контаминации, относятся к группе так называемых санитарно-показательных микроорганизмов [24]. В соответствии с принятой международной номенклатурой к бактериям группы кишечных палочек (БГКП) отнесены факультативно-анаэробные, грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 36 +/- 1 °С в течение 24 - 48 ч, в основном являющиеся представителями родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia (т.е. учитываются как цитратотрицательные, так и цитратположительные варианты БГКП). Методы исследования на БГКП приведены в ГОСТе Р 50474-93.Сущность метода.Метод основан на высеве определенного количества продукта в жидкую селективную среду, содержащую лактозу для определения сбраживающей способности по образованию кислоты и газа и, при необходимости, пересева культуральной жидкости на поверхность плотных специальных агаризованных сред для подтверждения принадлежности по культуральным и биохимическим признакам выделенных колоний к колиформным бактериям [24].Проведение анализа.Для посева используют то количество продукта, в котором предусматривается отсутствие БГКП. Посев производят в среду Кесслер с лактозой (с поплавками) в соотношении разведения и среды 1:10 [24].Пробирки или колбы с посевами помещают в термостат при температуре 36 +/- 1 °С на 24 - 48 ч, после этого посевы просматривают и при отсутствии признаков роста - газообразования или помутнения среды - дают заключение об отсутствии БГКП (коли-форм) в исследуемой массе изделия [24].Из пробирок или колб со средой Кесслер, в которых обнаружено газообразование или помутнение, производят пересев на среду Эндо или Левина [24]. Посев производят петлей по поверхности хорошо подсушенной среды штрихами для получения изолированных колоний. Чашки с посевами помещают крышками вниз в термостат с температурой 36 +/- 1 °С на 18 - 24 ч [24].
При отсутствии на среде Эндо или Левина колоний, типичных для бактерий группы кишечных палочек (на среде Эндо - красных и темно-красных с металлическим блеском или без него, розовых или бледно-розовых; на среде Левина - черных с металлическим блеском, темных с черным центром, сиреневых с темным центром), дают заключение об отсутствии БГКП в исследуемом количестве продукта и соответствии его нормативу на бактерии группы кишечных палочек (колиформные бактерии) [24].При наличии на среде Эндо или Левина колоний, характерных для кишечных палочек, из них готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют [24].Наличие в мазках-препаратах грамотрицательных, не содержащих спор палочек, указывает на присутствие бактерий группы кишечных палочек в анализируемой массе изделия и несоответствие его микробиологическому нормативу.При выявлении на среде Эндо мелких бесцветных колоний, подозрительных на наличие возбудителей кишечных инфекций, колонии снимают и изучают на принадлежность к патогенным микроорганизмам семейства кишечных, а в случае подтверждения извещают территориальное учреждение госсанэпиднадзора и при необходимости передают туда для дальнейшей идентификации [24].Определение бактерий рода SalmonellaСальмонеллы - обширный род семейства энтеробактерий, включающий более 2000 сероваров, большинство которых обладает патогенными свойствами [25]. Сальмонеллы - факультативно-анаэробные грамотрицательные, в основном подвижные палочки или неподвижные (S. pullorum, S. gallinarum и др.), хорошо растущие на обычных питательных средах и разнообразных пищевых субстратах [25].При исследовании образцов на наличие сальмонелл руководствуются ГОСТом Р 50480-93 с учетом нижеизложенных методических рекомендаций. Сущность метода.Метод основан на высеве определенной массы (количества) продукта, в которой нормируется отсутствие патогенных микроорганизмов, в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов, последующем накоплении бактерий в жидких селективных средах, выявлении бактерий, образующих типичные колонии на агаризованных дифференциально-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella биохимические и серологические характеристики [25].Проведение анализа.Навеску продукта (25 г), соответствующую нормативу на сальмонеллы, засевают в колбу с пептонным буферным раствором в соотношении 1:9 для предварительного неселективного обогащения. Посевы инкубируют при 36 +/- 1 °С в течение 18 - 24 ч. После этого производят пересев культуры из пептонного буферного раствора в две среды для селективного обогащения. Для этого 10 куб. см культуральной жидкости переносят в 100 куб. см магниевой среды и в 100 куб. см тетратионатной среды, или по 10 куб. см культуры переносят в 100 куб. см селенитовой среды и в 100 куб. см тетратионатной среды [25].
Посевы инкубируют 24 ч на магниевой и селенитовой средах при температуре 36 +/- 1 °С, а на тетратионатной среде при температуре 43 +/- 1 °С [25].Через 24 ч инкубирования культуры пересевают на три агаризованные среды: висмут-сульфит агар, среду Плоскирева и среду Эндо (взамен Эндо можно использовать среду Левина) [25].Допускается использование одной чашки каждой из сред для одновременного высева с двух селективных сред [25].Посевы инкубируют при температуре 36 +/- 1 °С в течение 24 - 48 ч [25].После 24 ч инкубирования посевов проводят предварительный учет результатов, а после 48 ч - окончательный [25].После инкубирования посевов на дифференциально-диагностических средах отмечают рост колоний, характерных для бактерий рода Salmonella:- на висмут-сульфит агаре - колонии черные с характерным металлическим блеском, а также зеленоватые с темно-зеленым ободком и с пигментированием среды под колонией;- на среде Плоскирева - колонии бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо;- на среде Эндо - колонии круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные;- на среде Левина - колонии прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.При отсутствии в посевах на дифференциально-диагностических средах характерных для бактерий рода Salmonella колоний дают заключение об отсутствии бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске продукта.При наличии хотя бы на одной дифференциально-диагностической среде характерных для бактерий рода Salmonella колоний проводят их дальнейшее изучение [25].Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных характерных колоний к бактериям рода Salmonella.Не менее трех характерных колоний с каждой дифференциально-диагностической среды (а в случае наличия 1 - 2 типичных колоний - каждую из них) пересевают на скошенную поверхность мясопептонного агара или среды из сухого питательного агара [26]. Часть колоний пересевают штрихом по поверхности и уколом в столбик трехсахарного агара. Посевы инкубируют при температуре 36 +/- 1 °С в течение 24 ч [26].Из отобранных для биохимического подтверждения колоний готовят мазки и окрашивают по Граму (по ГОСТу 10444.1).Бактерии рода Salmonella являются бесспоровыми грамотрицательными палочками с закругленными концами [26].После инкубации посевов, проводят учет результатов ферментации лактозы, глюкозы и сахарозы на трехсахарном агаре:- пожелтение скошенной части среды указывает на ферментацию лактозы или сахарозы или обоих сахаров (пожелтение столбика среды с разрывом агара или пузырьками газа указывает на ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа, пожелтение столбика среды без разрывов или пузырьков газа указывает на ферментацию глюкозы до кислоты без образования газа);