Файл: Учебное пособие для студентов обучающихся по специальности.pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 11.01.2024
Просмотров: 143
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
- 12 - развита, особенно в области крупа и бедра, костный мозг темно- красного цвета, студенистый, почки недоразвиты, на разрезе имеют интенсивно-фиолетовый цвет, жировая ткань около почек серо- красного цвета, студневидная, имеется пупок или струп, который образовался после отпадения пупка. Плоды, полученные из маток убитых животных в последние 1-2 месяца беременности, а также мертворожденных телят можно определить по таким признакам наличие пупка, в котором находится кровь, легкие тонут вводе, мышечная ткань серо-красного цвета, дряблые, водянистые. Во рту плода имеется 1-2, ау мертворожденных 3 пары резцов. Новорожденных животных в возрасте до 14 суток, а также плоды, полученные при убое животных, направляют на техническую утилизацию.
1.3. Анатомическое строение костей и органов Распознавание мяса построению костей является одним из наиболее надежных и легко выполнимых методов, так как у разных видов животных строение костей разное. Результаты исследования будут более достоверными, если куски мяса будут иметь больше костей. Кости очищают от мяса доили после вываривания, а затем определяют их строение. В практической работе ветеринарному врачу наиболее часто приходится отличать конину от говядины, баранину от собачатины, крольчатину от кошатины, которые имеют значительные сходства по форме туши, отложению жира, цвету и структуре мышечной ткани, жира и вызывают затруднения при определении видовой принадлежности мяса. Основные различия в строении некоторых костей домашних и диких животных приводятся в таблицах.
- 13 - Рис. 1. Скелет лошади сбоку
I - резцовая кость 2 - носовая кость 3 - лобная кость
4 - дорзальная челюсть 5 - вентральная челюсть 6 - атлант- эпистрофей; 8 - й шейный позвонок 9 - й шейный позвонок 10 - й грудной позвонок 11 - последний грудной позвонок 12 - й поясничной позвонок 13 - последний поясничный позвонок 14 - крестцовая кость 15
- хвостовые позвонки 16 - лопатка 17 - плечевая кость 18
- грудная кость 19 - кости предплечья (лучевая и локтевая- кости запястья 21 - кости пясти 22 - фаланги пальца 23 - сесамовидные кости 24 - рёберные хрящи 25 - рёбра; 26 - подвздошная кость таза 27 - лонные кости таза
28 - седалищная несть таза 29 - бедренная кость 30 - большеберцовая и малоберцовая кости голени 31 - кости заплюсны; 32 - кости плюсны;33 - фаланги пальца 34 - коленная чашка.
- 14 - Рис. 2. Скелеткоровы сбоку А - шейный отдел Б
- грудной отдел В - поясничный отдел Г - крестцовая кость Д -хвостовой отдел.
1 - резцовая кость 2 - носовая кость 3 - дор- зальная челюсть 4 - лобная кость 5 - вентральная челюсть- атлант 7 - эпистрофей; 8 - лопатка 9 - плечевая кость 10 - кости предплечья 11 - кости запястья
12 - кости пясти 13 - фаланги пальца 14 - грудная кость 15 - рёберная дуга из рёберных хрящей 16 - ребро- подвздошная кость 18 - седалищная кость 19 - бедренная кость 20 - кости голени 21 - кости заплюс- ны; 22 - кости плюсны; 23 - фаланги пальца 24 - коленная чашка.
- 15 - Рис. 3. Скелет овцы А - череп В - шейный отдел С - спинной отдел D - поясничный отдел Е - крестцовая кость Р - хвостовой отдел.
1 - лопатка 2 - плечевая кость 3 - кости предплечья
4 - кости запястья 5 - кости пясти 6 - фаланги пальцев 7- грудная кость 8 - рёбра; 9 - рёберные хрящи 10 - подвздошная кость таза 11 - бедренная кость 12 - седалищная кость таза 13 - кости голени 14 - кости заплюсны, 15 - кости плюсны; 16 - фаланги пальцев.
- 16 - Рис. 4. Скелет свиньи
1 - носовая кость 2 - лобная кость 3 - затылочная кость 4 - атлант 5 - гребень эпистрофея; 6 - й грудной позвонок (его остистый отросток 7 - лопатка 8 - й грудкой позвонок 9 - первый и 10 - й поясничные позвонки- крестцовая кость 12 - хвостовые позвонки 13
- вентральная челюсть 14 - яремный отросток 15 - попе- речнорёберный отросток го шейного позвонка 16 - плечевая кость 17 - кости предплечья 18 - кости запястья 19 - кости пясти 20 - фаланги пальцев 21 - грудная кость 22 - рёбра; 23 - подвздошная кость таза 24 - бедренная кость
25 - седалищная кость 26 - большеберцовая кость 27 - малоберцовая кость 23 - кости заплюсны; 29 - кости плюсны;
30 – фаланги пальцев.
- 17 - Рис. 5. Скелет собаки
1 - хрящевой остов носа 2 - резцовая кость 3 - дор- зальная челюсть 4 - лобная кость 5 - теменная кость 6 - затылочная кость 7 - скуловая кость 8 - вентральная челюсть- височная кость 10 - атлант 11 - эпистрофей; 12 - й шейный позвонок 13 - лопатка 14 - рукоятка грудины- плечевая кость 16 - лучевая кость 17 - локтевая кость 18 - скелет запястья 19 - скелет пясти 20 - скелет пальцев 21 - грудная кость 22 - й грудной позвонок 23
- й грудной позвонок 24 - й поясничный позвонок
25 - й поясничный позвонок 26 - крестцовая кость 27
- рёбра; 28 - подвздошная кость таза 29 - лонная кость таза 30 - седалищная кость таза 32 - бедренная кость 32
- коленная чашка 33 - малоберцовая кость 34 - большеберцовая кость 36, 36, 37 - скелет заплюсны, плюсны и пальцев.
- 18 - Рис. 6. Скелет кролика
1 – носовая кость 2 – резцовая кость 3 кость 20 – кости голени 21 – кости заплюсны; 22 – кости плюсны; 23
– кости пальцев. верхнечелюстная кость 4 - нижнечелюстная кость 5 – лобная кость 6 – шейные позвонки 7 – грудные позвонки 8 – рёбра; 9 – грудная кость 10 – поясничные позвонки 11 – хвостовые позвонки 12 – лопатка
13 – плечевая кость 14 – кости предплечья 15 – кости запястья кости пясти 17 – кости пальцев а – подвздошная кость 18 б – седалищная кость в – лонная кость 19 – бедренная кость.
- 19 - Рис. 7. Скелет кошки
1 – резцовая кость 2 – носовая кость 3 – скуловая кость 4 – мышечный отросток нижней челюсти 5 – теменная кость 6 – сагиттальный гребень атлант 8 – эпистрофей; 9 – шейные позвонки 10 – шестой шейный позвонок 11 – краниальный угол лопатки 12 – предостная ямка 13 – ость лопатки 14 – заостная ямка 15 – грудные позвонки 16 – поясничные позвонки 17 - подвздошная кость 18 – крестцовая кость 19 – хвостовые позвонки седалищная ость 21 - седалищный бугор 22 - кости заплюсны;
23 -кости плюсны; 24 - проксимальная фаланга 25 - средняя фаланга 26 - дистальная фаланга 27 - пяточная кость 28 - седалищная кость 29 - запертое отверстие 30 - бедренная кость 31 - кости голени 32 - пяточная кость
33 - плантарные сесамовидные кости первой фаланги 34 - первая фаланга
35 - вторая фаланга 36 - третья фаланга 37 - кости плюсны; 38 - кости за- плюсны; 39 - малая берцовая кость 40 - большая берцовая кость 41 - латеральный мыщелок большой берцовой кости 42 - сезамовидпая кость 43 - надколенник 44 - бедренная кость 45 - головка бедренной кости 46 - поперечный отросток 47, 48 - ребра 49 - мечевидный отросток 50 - локтевой отросток- медиальный надмыщелок плечевой кости 52 - локтевая кость
53 - добавочная кость запястья 54 - пальмарные сесамовидные кости первой фаланги 55 - проксимальная фаланга 56 - средняя фаланга 57 -дистальная фаланга 58 - первый палец 59 - лучевая кость 60 - локтевая кость 61 - пальмарная сесамовидная кость первой фаланги 62 - первая фаланга 63 - третьи фаланга 64 - вторая фаланга 65 - кости пясти 66 - дистальное меж- костное пространство 67- лучевая кость 68 - латеральный надмыщелок; 69 - плечевая кость 70 - большой бугорок плечевой кости 71 - рукоятка грудной кости 72 - акромион; 73 - барабанный пузырь 74 - угловой отросток нижней челюсти 75 - ямка большой жевательной мышцы нижней челюсти 76 - тело нижней челюсти 77 - подбородочное отверстие.
- 20 -
YI Рис. 8. Атлант коровы (I), овцы (II), козы (III), лошади (IV), свиньи
(V), собаки (VI): 1 - дорсальная дужка 2 - вентральная дужка 3 - крыло атланта 4 – крыловое отверстие 4 1
– крыловая вырезка 5 - межпозвоночное отверстие 6 – межпоперечное отверстие 7 – суставная поверхность для зубовидного отростка 8 – каудальная суставная поверхность.
- 21 - Таблица 1 Отличительные признаки костей лошади и крупного рогатого скота Кости Лошадь Крупный рогатый скот Атлант рис. 1,2,8) Имеются передние и задние крыловые отверстия, а впереди - межпозвоночные отверстия. Горизонтальные края толстые. Задних крыловых отверстий нет, есть задняя кры- ловая вырезка.
Эпистро- фей рис. 1,2,9) Зубовидный отросток стамескообразный, гребень развит хорошо и задний край его раздвоен. Зубовидный отросток полу- цилиндрической формы, гребень развит слабее, чему лошади, не раздвоен, задний край приподнят. Спинные позвонки рис Число позвонков 18 (17-
19). Остистые отростки касаются друг друга, концы их шишкообраз- но утолщены, имеются межпозвоночные вырезки. Число позвонков 10-14. Остистые отростки стоят вертикально на некотором расстоянии друг от друга, верхняя половина слегка оттянута вперед, имеются межпозвоночные отверстия. Поясничные Рис. 1,2,
11) Промежутки между поперечными отростками небольшие. Промежутки между поперечными отростками большие. Отростки плоские, края более заострены, чему лошади. Грудная кость рис, 12) Сжата с боков, имеет 8 суставных поверхностей для реберных хрящей, у которых есть такие же суставные поверхности для соединения с грудной костью. Гребень хорошо развит. Плоская. Гребня нет. Рукоятка кости суставом, соединяется с телом грудной кости и несет парное углубление для первых реберных хрящей. Тело грудной кости имеет по 6 суставных ямок с каждой стороны для реберных хрящей. Состоит из 7 сегментов и 8 мечевидного хряща. Лопатка рис. 1,2,
13) Ость лопатки постепенно переходит в шейку. Ость лопатки образует сильный выступу шейки лопатки
(акромион). Плечевая рис,
14) Три блоковидных отростка и сильно развитый вертлуг. Два блоковидных отростка и шероховатость вместо вертлу- га.
- 22 - Кости Лошадь Крупный рогатый скот Лучевая и локтевая кости рис, 2,
15) Локтевая сопровождает лучевую до середины. В нижней трети лучевая на поперечном разрезе имеет сетчатое строение. Локтевая сопровождает лучевую на всем протяжении. Мозговой конец не имеет сетчатого строения. Кости запястья рис) Состоят из 7-8 костей, из которых 4 расположены в верхнем ряду ив нижнем. Состоят из 6 костей, из которых в верхнем ив нижнем ряду. Крестцовая кость рис. 1,2,
16) Плоская, состоит из 5 сросшихся позвонков, остистые отростки не сросшиеся. Выпуклая, из 5 сросшихся позвонков. Остистые отростки, за исключением го остистого отростка, слились всплошную гряду с утолщенным верхним краем. Кости таза рис,
17) Форма тазовой полости конусовидная. Крылья подвздошной кости расположены горизонтально. Седалищный бугор пластинчатый, малый и имеет два угла. Форма контуров тазовой полости цилиндрическая. Крылья развернуты латерока- удально. Седалищный бугор треугольной формы. Лонное сращение рис) Разрез имеет почти прямолинейную форму. Форма разреза как бы перегнута, сломана. Ребра рис) Ребер 18, имеют почти одинаковую ширину, концы ребер закруглены, в виде тупой зубчатой шероховатости для соединения с реберными хрящами. Реберные хрящи, прилегающие к грудной кости, имеют суставную поверхность в виде валика. Ребер 13, они плоские, книзу более широкие с заостренными передними и задними краями. Стернальные концы, начиная со го, имеют суставные фасетки, а реберные хрящи - соответствующие суставные возвышения. Продолжение таблицы 1
- 23 - Кости Лошадь Крупный рогатый скот Бедренная кость рис. 21). Тело – толстый неис- кривленный цилиндр, имеет большой, малый и третий вертелы. Большой вертел разделен вырезкой на две части. Ямка для круглой связки находится сбоку головки. У основания вертела неглубокая вертлуж- ная впадина. Почти цилиндрическое тело, отростки и выступы более затушеваны. Головка резче отграничена шейкой от тела, ямка для круглой связи находится в центре головки. Большой вертел не раздвоен и у основания имеет глубокую вертлужную ямку. Малый вертел в форме ограниченного тупого бугра лежит на медиальной поверхности высоко, вместо третьего вертела – шероховатость Берцовая кость рис) В проксимальной трети резко трехгранна из-за гребня большеберцовой кости и плоская сзади. Малоберцовая кость сопровождает болъшеберцо- вую до середины, образуя межкостное пространство треугольной формы. На дистальном конце блок поставлен косо. Несколько искривлена в медиальную сторону. Медиальная лодыжка свисает в виде отростка. У латерального края имеется узкая суставная площадка для сочленения с лодыжковой костью. Блок на дистальном конце поставлен прямо. Распил трубчатых костей рис) Внутри сетка из костных перекладин и костного мозга. Сетки из костных перекладин нет, имеется только костный мозг. Продолжение таблицы 1
- 24 - Рис. 9. Епистрофей коровы (I), овцы (II), козы (III), лошади, свиньи (V), собаки (VI):
1 – зубовидный отросток 2 – краниальные суставные отростки межпоперечное отверстие 4 - вентральный гребень 5 – поперечный отросток 6 – каудальные суставные отростки 7 – гребень оси 8 – межпозвоночное отверстие.
- 25 - Рис. 10. Грудные позвонки коровы (I), лошади (I I), свиньи (III), собаки (IV): 1 – поперечные отростки 2 – реберная фасетка на поперечном отростке 3 – краниальная и З - каудальная реберные ямки 4 - головка позвонка 4 - ямка позвонки 5 – тело позвонка 6 – латеральное позвоночное отверстие 7 – краниальные и 7 1
– каудальные суставные отростки 8 – остистые отростки 9 – каудальная позвоночная вырезка.
- 26 - Рис. 11. Поясничные позвонки коровы (I), лошади (П, свиньи (III), собаки (IV): 1 - поперечный отросток 2 - каудальный суставной отросток 2' - краниальный суставной отросток 3 - остистый отросток 4 - головка позвонка 5 - тело позвонка а - суставная поверхность на поперечном отростке го иго поясничных позвонков лошади 6 - вырезка на поперечном отростке (может быть отверстие у свиньи)
- 27 - Рис. 12. Грудная кость коровы (I), овцы (II), козы (III), лошади (IV), свиньи (V), собаки (VI):
1 - рукоятка грудной кости 1
'
- соколок 2 – тело грудной кости
3 – мечевидный отросток 4 – мечевидный хрящ 5 – реберные ямки.
- 28 - Рис. 13. Лопатка коровы (I), лошади (II), свиньи (III), собаки
(IV):
1 – суставной угол с суставной впадиной 2 – надсуставной бугорок 3 – шейка лопатки 4 - акромион; 5 – ость лопатки бугор ости 7 – заостная ямка 8 – предостная ямка
9 – основание лопатки 10 – лопаточный хрящ.
- 29 - Рис. 14. Плечевые кости коровы (I), лошади (II), свиньи
(III), собаки (У
1 - шейка 2 – головка плечевой кости 3 – большой латеральный бугорок 4 – межбугорковый желоб 5 – малый медиальный бугорок 6 – дельтовидная шероховатость 7 - гребень плеча 8 - блок плечевой кости 9 – латеральный
(разгибательный) надмыщелок; 10 – локтевая ямка 10
'
– локтевое отверстие.
8
- 30 - Рис. 15. Кости предплечья коровы (I), лошади (II), свиньи
(III), собаки (IV):
1 – лучевая кость 2 – ямка суставной поверхности лучевой кости 3 – локтевой бугор 4 – локтевой отросток 5 – локтевая кость 6 – межкостная щель предплечья 7- шиловидный отросток лучевой кости 7' – шиловидный отросток локтевой кости.
- 31 - Рис. Крестцовая кость коровы (I), овцы (II), козы (III), лошади (IV), свиньи (V), собаки (VI):
1 - крыло крестцовой кости 2 - краниальные суставные отростки 3 - ушковиднвя (суставная) поверхность 4 - дорсальные крестцовые отверстия 5 - боковая часть 6 - средний крестцовый гребень (остистые отростки 7 - междужковые отверстия 8 - суставная поверхность только у лошади)
- 32 - Рис. 17. Кости таза крупного рогатого скота (I), овцы (II, козы (III), лошади, свиньи (V), собаки (VI}: 1 - крыло подвздошной кости 2 – маклоковый бугор 3 – тело подвздошной 4 – крестцовый бугор 5 – большая седалищная вырезка 6 – суставная впадина 7 – седалищная ость 8 - впадинная (краниальная) ветвь лонной кости 9 - шовная (каудальная) ветвь лонной кости 10 – подвздошно-лонное возвышение 11
– впадинная (краниальная) ветвь седалищной кости 12 – пластина седалищной кости 13 – седалищный бугор 14 – седалищная дуга 15 – малая седалищная вырезка 16 – запертое отверстие.
IV Рис. 18. Ребра коровы (I), лошади (II): а - первое ребро б - пятое ребро в - восьмое ребро 1- головка ребра 2 - шейка ребра 3 - бугорок ребра 4 -реберный угол 5 -тело ребра.
- 33 - Рис. 19. Позвоночный конец ребер лошади а - первое ребро б - пятое ребро в - девятое ребро г - е ребро де ребро 1- бугорок ребра 2 - шейка ребра 3 – головка ребра. В практике часто встречаются случаи, когда в мелких кусках мяса отсутствуют целые кости. В этих случаях определение видовой принадлежности мяса необходимо проводить по распилам костей. Ее сущность заключается в следующем из бедренных костей коровы и лошади необходимо выпилить тонкие куски (ломтики) костей, ведя распилы в определенных местах ив одних и тех же направлениях по отношению к продольной оси костей (поперек, вдоль, наискось и при по полученным плоским вырезам, проводится определение видового происхождения мяса (рис. 20). В середине кости лошадей имеется сетка из многочисленных костных пластинок, которая отсутствует у крупного рогатого скота. Костный мозг имеется в середине костей у крупного рогатого скота и у лошадей.
- 34 - Рис. 20. Поперечный распил костей коровы и лошади А - бедренная кость коровы в верхней четверти Б - бедренная кость лошади в верхней четверти В - бедренная кость коровы в нижней четверти Г - бедренная кость лошади в нижней четверти Д - лучевая кость коровы в нижней четверти Е - лучевая кость лошади в нижней четверти Ж - лопатка коровы в нижней четверти 3 - лопатка лошади в нижней четверти.
- 35 - Рис. 21. Бедренные кости коровы (I), лошади (II), свиньи (III), собаки (IV): 1- головка бедренной кости 2 - ямка головки 3 - шейка 4 - малый вертел 5 - большой вертел 6 - вертлужная ямка 7 - межвертлужный гребень 8
- третий вертел 9 - средний вертел 10 - надмыщелковая ямка (шероховатость, бугорок 11 - латеральный и 11 1
- медиальный мыщелки блока 12 - межмыщелковая ямка.
- 36 - Таблица 2 Отличительные признаки костей свиньи, овцы и собаки Кости Свинья Овца Собака Атлант Крылья развиты слабо. Поперечное отверстие распо- логается на каудальном крае крыла рис. 4, 8) Имеются передние крыловые отверстия. Задних крыловых отверстий нет. (рис,
8) Атлант похож на бабочку. Имеются широкие, сильно расходящиеся в стороны крылья. По краниальному краю расположены лишь крыло- вые вырезки (рис.
5, 8)
Эпистр офей С коническим тупым зубовидным отростком, коротким телом. Гребень высокий, узкий в виде спинального отростка рис. 4, 9)
Полуцилиндриче- ский, гребень тонкий и каудальный край приподнят кверху, не раздваивается рис, 9) Зубовидный отросток длинный, цилиндрический, с заостренным концом. Сильно развит гребень, который оттянут вперед в виде клюва рис. 5, Спинные позвонки Число позвонков, остистые отростки длинные, тонкие. Тело позвонка как бы сдавлено спереди назад. В основании поперечных отростков имеются отверстия сверху вниз рис. 4, 10) Число позвонков 13-
14. Остистые отростки позвонка направлены назад, ау остальных
– вертикально. Имеются межпозвоночные отверстия рис. 3). Число позвонков 13. Остистые отростки позвонков округлые и до 10 направлены назад, короткие, шероховатые. У каудальных суставных отростков есть добавочные мускульные) отростки. Краниальные суставные отростки имеют выраженные сосцевидные отростки (рис. 5, 10).
- 37 - Кости Свинья Овца Собака Поясничные позвонки Остистые отростки перпендикулярны к телу и расширены кверху. Число их
5 - 8, поперечные отростки сне- большим наклоном вниз на концах. У их основания на заднем крае имеются маленькие вырезки, переходящие к крестцу в полные поперечные отверстия (рис. 4,
11). Число позвонков 6, остистые отростки перпендикулярны к телу, слегка расширены кверху, пластинчаты, расширяются к крестцу. Поперечные отростки с сапого- образными выступами вперед на концах. Тело позвонка с вентральной стороны имеет ясно выраженный гребень, выгнутый в дорзальном направлении (рис. Число позвонков
7, остистые отростки отклонены вперед, вверху сужены. Под каудальным суставным отростком расположен добавочный отросток. Поперечно- реберные отростки от короткого первого до предпоследнего постепенно удлиняются, направлены вниз и вперед (рис. 5,11). Грудная кость Имеет прямую клинообразную рукоятку, слегка сжатую с боков, с общим углублением для правого и левого ребра, соединяется с телом суставом. Пять сегментов, считая рукоятку, и шестой хрящ рис. 4,12 ) Рукоятка грудной кости слегка изогнута кверху, трехгранная, с остальной частью соединяется суставом, имеет парное углубление для первых двух ребер. Тело плоское, имеет по 6 суставных ямок с каждой стороны для реберных хрящей. Мечевидный хрящ – широкая, тонкая пластинка (сегментов семьи восьмой мечевидный хрящ, рис. 3,12). Рукоятка с притупленной хрящевой верхушкой. Тело цилиндрическое, сжато с боков, имеется узкий мечевидный хрящ. Семь сегментов рис.
5,12) Продолжение таблицы 2
- 38 - Кости Свинья Овца Собака Лопатка Треугольной формы. Ость лопатки в средней трети сильно загнута назад и к шейке сходит на нет, акромион отсутствует рис. 4,13). Ость лопатки сильно развита, становится выше в сторону суставного угла икру- то обрывается. Ость лопатки делите на две части (маленькую предостную и большую заостную). Имеется акромион рис. 3). Ость проходит посередине лопатки и делите на две равные по величине половины – предо- стную и заостную ямку. Ость сильно развита. Акромион имеет крючковид- ный отросток, который доходит до суставной впадины и нависает над шейкой лопатки рис. 5,13). Плечевая кость Сплющена с боковых сторон, латеральный блоковый бугор нависает над медиальными образует почти замкнутое кольцо. Кость как бы перекручена вокруг продольной оси (рис. 4, 15). Два блоковидных отростка и шероховатость вместо вертлуга (рис. Длинная,
S- образно искривлена, латеральный и медиальный бугор слаборазвиты, локтевая и коро- новидные ямки соединены отверстием (рис. 5,15). Кости предплечья Локтевая илу- чевая кости короткие, одинаковые по диаметру, сросшиеся, локтевой отросток большой (рис. Локтевая сопровождает лучевую на всем протяжении ив середине значительно тоньше лучевой (рис. Локтевая и лучевая кости не сросшиеся, соединяются суставом и образуют широкое межкостное пространство рис.
5,16). Продолжение таблицы 2
- 39 - Ребра
14 пар (12-17) узких ребер имеющих суставную поверхность для соединения с реберными хрящами. Бугорок ребра имеет плоскую суставную поверхность. Тело ребра имеет спиралевидный поворот (рис.
13 пар плоских, широких ребер имеющих длинную шейку.
Вентрально ребра более широкие, с острыми передними и задними краями. Ребра имеют суставную поверхность для хрящей (рис.
13 пар дугообразно изогнутых, округлых ребер. Бугорок ребра имеет выпуклую суставную поверхность (рис. Бедренная кость Дистальный отдел тела бедренной кости над блоком
4- гранный, блоковые гребни для коленной чашечки одинаковые (рис. 4,21) Ямка на головке округлой формы. Имеется три вертела рис. 3). Длинная, тонкая, изогнутая дорзаль- но, над каудальной поверхностью мы- щелков находятся 2 сезамовидные косточки и специальные суставные площадки (рис. Кости голени Имеется большеберцовая и малоберцовая кости рис,
22). Малоберцовая кость отсутствует (рис. 3). Имеется большеберцовая и малоберцовая кости рис. 5, 22). Крестцовая кость Состоит из четырех поздно срастающихся позвонков, широкие междуговые отверстия, нет остистых отростков
(4,16). Состоит из 4-5 сросшихся позвонков, остистые отростки слившиеся (рис, 16) Состоит из трех позвонков, остистые отростки короткие, раздельные (рис,
16). Кости таза Тазовая полость цилиндрической формы. Кости таза массивные, крылья подвздошной кости расположены вертикально. Седалищная дуга глубокая рис. 4,17) Форма контуров тазовой полости цилиндрическая. Крылья развернуты лате- рокаудально. Седалищный бугор треугольной формы рис, 17). Тазовая полость конусовидная. Крыло подвздошной кости ложечковидное рис. 5, 17). Продолжение таблицы 2 Продолжение таблицы 2
- 40 - Рис. 22. Кости голени коровы (I), лошади (ΙΙ), свиньи (III), собаки (IV):
1 - большеберцовая кость 2 - малоберцовая кость 3 - латеральный и 3' - медиальный мыщелки большеберцовой кости 4 - межмыщелковое возвышение 5 - гребень большеберцовой кости 6 - мышечный желоб 7 - латеральная лодыжка 8 - лодыжковая кость 9 - дистальный блок.
- 41 - Рис. 23. Язык крупного рогатого скота (I), лошади (II), свиньи (III), собаки (IV)
1 - корень 2 - тело 3 - верхушка 4 – подушка - ямка тела- нитевидные сосочки 7 - грибовидные сосочки 8 - валиковидные сосочки 9 - листовидные сосочки 10 - конусовидные сосочки 11 – миндалины.
- 42 - Таблица 3 Отличительные признаки некоторых органов лошади и крупного рогатого скота Органы Лошадь Крупный рогатый скот Язык рис. Спинка языка покрыта толстым слоем ороговевшего эпителия. Плоский, длинный, конец его имеет форму шпателя, надгортанник листовидный. Шероховатый, часто пигмен- тирован. Кончик языка заострен, в средней трети снабжен опухолеобразным возвышением подушкой языка. Впереди подушки находится ямка.
Надгортанник овальной формы. Легкие рис. Левое легкое состоит из двух, а правое из трех долей. Граница долек едва заметна. На разрезе междолевая ткань выступает не так резко, как у рогатого скота (ясной дольчатости нет. Левое легкое состоит из трех долей, правое из четырех-пяти долей легочные дольки резко заметны, тяжи интерлобуляр- ной соединительной ткани сильно развиты, заметны на разрезе. Селезенка рис. 25). Плоская, треугольная, слегка искривлена в плоскости (в виде серпа. Цвет свежей селезенки синевато-фиолетовый, а полежавшей - темно- красный. Края слегка закруглены. Плоская, в виде вытянутого овала, у волов и откормленных быков селезенка красно-бурая, довольно плотная, с закругленными краями и выпуклой поверхностью, укоров- желто- синеватая, несколько дряблая с более острыми краями. У телят селезенка буро- красного цвета и эластичной консистенции. Печень рис. 26). Разделена ясно натри доли (средняя доля самая маленькая, глубокую вырезку для пищевода, желчного пузыря нет. Неясно разделена натри доли, имеет большой желчный пузырь, едва заметна вырезка желоб пищевода. Почки рис. 27). Гладкие, однососочко- вые. Долек нет. Левая почка бобовидная, а правая пирамидальной формы. Состоят из 16-18 долек, имеют столько же почечных сосочков.
- 43 - Таблица 4 Отличительные признаки некоторых органов свиньи, овцы и собаки Орган Свинья Овца
Собака Язык рис. 23). Длинный, узкий, ярко красного цвета с выраженными краями. Кончик языка немного заостренный. Шершавый, кончик языка не за- острённый, спинка языка сильно утолщена и образует валик (подушка языка. Длинный, широкий, тонкий сот- вислыми краями, на дорзальной поверхности имеется жлоб, который разделяет язык на две равные части. Легкие рис. Краниальная часть правого легкого больше левой и не делится на лопасти. Имеется трахеальный бронх для правой верхушечной части. Легочные дольки заметны слабее, чему овцы. Правая верхушечная часть легкого делится на две части лопасти. Легкие делятся на верхушечную, сердцевидную и диафрагмальную части и имеет мраморный вид.
Лёгкие делятся на части очень глубокими вырезками, которые доходят до главного бронха. Легочные дольки на разрезе слабо заметны. Селезенка рис. 25). Овально вытянутой формы, длинная ссуженными концами, плотная, на поперечном разрезе треугольная. Округло- треугольной формы, короткая, широкая, плоская, мягкой консистенции. Неправильной треугольной формы, вытянутая дорзо- вентрально, плоская. Вентральный конец её расширена дорзальный сужен. Печень рис ). Правая и левая доли вырезками делятся на латеральную и медиальную доли. Средняя доля делится на квадратную и хвостатую доли. Выражена доль- чатость ткани. Плоская, плотная в виде вытянутого овала с острыми краями. Делится натри главные доли. Средняя доля глубокими вырезками делится на 2-3 доли. Почки рис. 27). Гладкие, многосо- сочковые, бобовидной формы, длинные, сплющены дорзо- вентрально. Гладкие, односо- сочковые, бобовидной формы. Гладкие односо- сочковые, бобовидной формы, короткие, толстые- Рис. 24. Легкие А – крупного рогатого скота Б - свиньи В - лошади
1 - трахея 2 – средостенная поверхность 3 - тупой край 4
– реберная поверхность 5 – верхушечная часть 6 – сердечная часть 7 - острый край 8 – диафрагмальная часть 9
– сердечно-диафрагмальная часть. ШУ У Рис. 25. Селезенка 1 – крупного рогатого скота II - лошади III - свиньи IV - овцы V – собаки.
- 45 - Рис. 26. Печень
А - собаки Б - свиньи В - крупного рогатого скота Г - овцы Д - лошади 1 - левая латеральная, 1' - медиальная часть печени 2 - пальцеподобный отросток 3 - вырезка пищевода 4 - желчный проток 4
'
- общий желчный проток- проток желчного пузыря 5 - воротная вена 6 - задняя полая вена 7 - почечное вдавление 8 - хвостатый отросток 9 - правая латеральная и 9' - медиальная часть печени 10 - желчный пузырь (нету лошади 11 - квадратная часть 12 - круглая связка.
- 46 - Рис 27. Почки а – бороздчатая многососочковая почка коровы б - схема её строения в – гладкая многососочковая почка свиньи г – схема её строения д – гладкая однососочковая почка собаки е – схема её строения ж – почка лошади 1 – почечная долька 2 – корковая зона 3 – пограничная зона мозговая зона 5 – почечный сосочек 6 – почечные чашечки 7 – стебелёк мочеточника 8 – мочеточник 9 – борозда 10 – мочевой проток почечная лоханка – почечные столбы 13 – почечные пирамиды почечные ходы 15 – дуговые артерии 16 – фиброзная капсула 17 – ворота почки 18 – почечная артерия 19 – почечная вена.
- 47 - Рис. Изолированные позвонки кролика А - атлант и эпистро- фей (вид снизу Б - эпистрофей (вид сбоку В - спинные позвонки (вид сбоку Г - поясничные позвонки (вид сбоку 1 - остистый отросток 2 - поперечный отросток 3 - краниальный суставной отросток 4 - каудальный суставной отросток 5 - соскоподобный отросток 6 - тело позвонка 7 - головка тела позвонка- ямка тела позвонка 9 - суставное реберное углубление- соединение (головки и бугорка 11 - суставное углубление атланта для соединения с отростками черепа 12 - крылья атланта 13 - зубоподобный отросток эпистрофея; 14 - нижний гребень позвонка 15 - добавочный отросток
- 48 - Рис. Грудная кость кролика (вид низу- сегменты грудной кости 2 - рукоятка 3 - последний сегмент с мечеподобным отростком 4 - головка ребра 5 - бугорок 6 - шейка ребра У – хрящевые окончания соответствующих ребер (VIII - недоразвитое.
3
- 49 -
I II III Рис. 30. Лопатка кролика (I), кошки (II), нутрии (III);
1 - суставная впадина 2 - шейка 3 - акромион; 4 - задний акромиальный отросток 5 - ость лопатки 6 - предостная ямка 7 - заостная ямка 8 - лопаточный хрящ.
- 50 - Рис. 31. Скелет правой грудной конечности кролика- лопаточный хрящ подлопаточная ямка
3 – над суставной бугорок ушкоподобная поверхность задний акром и- альн ы й отросток
6 - акром ион- Коракоидный отросток
8- суставной бугор- головка плечевой кости
10 - тело плечевой кости
11- блок лучевой кости
12- головка локтевой костило к те в а яко ст ь ;
14 - лучевая кость- добавочная кость запястьям ед и аль н ы й отросток лучевой кости
17-1 пяточная кость
18 - II пястная кость
19 - кости запястья
21 - V пястная кость
22 - фаланги 11 пальца
23 - фаланги 1 пальца
24 -
2 6 - фаланги пальца- Рис. 32. скелет правой грудной конечности кошки
I - подлопаточная ямка- акромион;
3 - каракоидный отросток- головка плечевой костим алый бугор- большой бугор
6 - тело плечевой кости- надблоковое отверстие- блок плечевой костим ед и аль н ы й отросток локтевой отросток
I1 — тело лучевой кости
12- тело локтевой кости
13- блок лучевой кости- головка лучевой кости
15- кость запястья- добавочная кость запястья
17-1 пястная кость
18- II пястная кость
19- фаланга I пальца
20- III пястная кость
21 - V пястная кость
22 - фаланги II пальца
22- фаланги III пальца
22
- 52 - Рис. Ребра нутрии
(I), кролика (II); кошки
(lII):
1 – головка
2 - шейка
3 – реберный бугорок
4 - тело Рис. 34. Плечевая кость кролика 1 - тело
2 - суставная головка 3 – большой бугор 4 – малый бугор 5 - межбугорковый желоб, 6 – дельтовидная шероховатость 7 – суставной блок 8 – надблоковая ямка 9 – медиальный надмыщелок;
10 – латеральный надмыщелок Рис. 35. Кости предплечья кролика
1 – суставная впадина лучевой кости 2 - локтевая кость 3 – межкостное отверстие – лучевая кость 5 – сустав между лучевой и локтевой костью 6 – полумесячная вырезка 7 – локтевой бугор 8 - соединительнотканное соединение лучевой и локтевой кости 9 – латеральная и медиальная лодыжка.
- 53 - Рис. 36. Крестцовая кость кролика
1 - остистый отросток 2 - крыло 3 - суставная ушковидная поверхность 4 - суставной отросток 5 - суставная головка крестцовой кости 6 — сосцевидный гребень 7 — верхние крестцовые отверстия.
- 54 - Рис. 37. Таз и крестцовая кость кролика (вид снизу
I - крестцовая кость 2 - крыло крестцовой кости 3
– место срастания задних сегментов крестцовой кости место срастания двух половин таза 5 - суставная впадина 6 - запертое отверстие 7 - крыло подвздошной кости
8 -седалищная кость 9 - седалищный бугор 10 - лобковая кость I1 - малая седалищная вырезка 12 - седалищная дуга. Рис. 38. Таз кролика вид сбоку
1 - ягодичный гребень
2 – суставная ушковидная поверхность- бугорок впереди суставной впадины
4 - суставная впадина 5, 5' - седалищная ость гребень 6 - подвздошногребешковое возвышение- запирателыюе отверстие 8 - седалищный бугор сего тремя отростками 9 - седалищная дуга- крестцовый край подвздошной кости 11- подвздошный бугор 12 - верхне-внутренний гребень- нижне-наружньй гребень.
- 55 - Рис. 39. Скелет тазовой конечности кролика
1 - крыло подвздошной кости
2 - ушковидная поверхность- запертое отверстие
4 - седалищный бугор
5 - большой вертел
6 - малый вертел
7 - тело бедренной кости
8 - медиальный мыщелок бедренной кости
9 - сесамовидные кости икроножной мысцы;
10 - латеральный мыще- лок бедренной кости
11- коленная чашка
12 - медиальный мыщелок большеберцовой кости
13 - малоберцовая кость
14 - гребень большеберцовой костите л о большеберцовой кости
16 - медиальная ладыжка;
17 - таранная кость
18 - пяточная кость
19 - цетральная кость зап л юс н ы ;
20 - II заплюсневая кость
21 - IV заплюсневая кость
22 - III заплюсневая кость
23 - IV плюсневая кость
24 - III плюсневая кость
25 - II плюсневая кость
26 - проксимальная сеса- мовидная кость
27 - фаланга II пальца
28 - фаланги IV пальца
2 9 - дистальные сесамо- видные кости.
- 56 - Рис. 40. Скелет тазовой конечности кошки
1 - крыло подвздошной кости
2- ушковидная поверхность
3 – запертое отверстие
4 – седалищный бугор
5 – тазовое сращение
6 – малый вертел бедренной кости
7 – вертлюжная ямка
8 – тело бедренной кости
9 – медиальный мыщелок бедренной кости
10 – медиальный гребень блока бедренной кости
11 - коленная чашка
12 – сесамовидные кости
13 – латеральный мыщелок большеберцовой кости
14 – медиальный мыщелок большеберцовой кости
15 – гребень
16 – тело большеберцовой кости
17 - тело малоберцовой кости
18 – медиальная ладыжка;
19 – пяточная кость
20 - латеральная кость
21 – таранная кость
22 – центральная кость заплюсны;
23 - II заплюсневая кость
24 - III заплюсневая кость
25-1 заплюсневая кость
26-1 плюсневая кость
27 – V плюсневая кость
28 - II плюсневая кость
29 - III плюсневая кость
30 - фаланги II пальца
31 - фаланги IV пальца
- 57 - Рис. 41. Бедренная кость кролика
1 - тело 2 - суставная головка 3 - шейка
4 - малый вертел 5 - большой вертел 6 - третий вертел 7 – медиальный мыще- лок; 8 - латеральный мыщелок; 9 - медиальное надмыщелковое возвышение
10 - латеральное надмыщелковое возвышение- суставной блок (для коленной чашки. Рис. 42. Кости голени кролика
1 – большеберцовая кость
2 – малоберцовая кость
3 – головка малоберцовой кости
4 - латеральный мыщелок;
5 – медиальный мыщелок;
5* - шероховатое утолщение гребня большеберцовой кости
6 - суставная поверхность большеберцовой кости
7 - межмыщелковое возвышение
8 медиальная лодыжка
9 – латеральная лодыжка
10 – суставная поверхность. Рис. 43. Язык кролика
1 - корень языка 2 - тело языка 3 - верхушка языка 4 - подушка языка 5 – язычно-надгортанная складка 6 - листо- подобные сосочки 7 - валикоподобные сосочки 8 - грибоподобные сосочки.
- 58 -
Таблица 5 Отличительные признаки костей нутрии, кролика и кошки Кости Нутрия Кролик Кошка Атлант Тело короткое, тонкое, крылья узкие, довольно длинные хорошо выражена передняя крыловая вырезка, задней вырезки нет. Имеются передняя и задняя крыловые вырезки под крылом атланта, отверстий нет (рис. 28).
Крыловые отверстия расположены сверху на крыле атланта.
Эпистро- фей Тело короткое, зубовидный отросток цилиндрической формы, гребень имеет форму остистого отростка, сильно оттянут назад. Тело длинное, зубовидный отросток имеет цилиндрическую форму. Гребень вытянут вперёд. Тело позвонка снизу имеет гребень. Поперечные отростки слаборазвиты, не раздвоены (рис. Зубовидный отросток цилиндрической формы, длинный, с заостренным концом. Гребень вытянут назад и свисает над зубовидным отростком в виде клюва, а каудально сливается с суставными отростками. Грудные позвонки Остистые отростки сильно отклонены назад. Поперечные отростки хорошо развиты, толстые, овальные. Сосцевидные отростки хорошо развиты, но ниже остистых отростков. Остистые отростки длинные, прямые. Поперечные отростки короткие, толстые, имеют суставные фасетки для головки ребра. Сосцевидные отростки длинные и достигают высоты остистых отростков. Имеются межреберные вырезки (рис. 28). Остистые отростки короткие и немного отклонены назад. Поперечные отростки короткие, направлены впереди вниз. Сосцевидные отростки короткие, заканчиваются остро.
- 59 - Кости Нутрия Кролик Кошка Поясничные позвонки Поперечные отростки сильно развиты и направлены впереди вниз, концы их закруглены. Сосцевидные отростки хорошо развиты, направлены назад, ниже остистых отростков. Остистые отростки имеют форму гребня и направлены вперед. Сосцевидные отростки направлены впереди имеют по концам выступы. Отростки эти очень развиты, высота их доходит до высоты остистых отростков рис. 28). Сосцевидные отростки низкие, заканчиваются острием. Поперечные отростки направлены впереди вниз. Грудная кость Имеет 6 костных сегментов. Первый сегмент очень массивный, вытянутый, последний широкий, массивный. Имеет 6 костных сегментов. Первый сегмент очень вытянут вперёд и сжат с боков. Задний сегмент узкий, длинный и заканчивается круглым мечепо- добным хрящом. Грудная кость трехгран- ноприз-матической формы. Рукоятка грудной кости заканчивается тупо (рис. 29). Имеет 6 костных сегментов. Сегменты грудной кости короткие, округлые. Рукоятка грудной кости заканчивается острием. Лопатка Имеет форму нерав- нобедренного треугольника. Краниальный край выше ее шейки, имеет форму полукруга, оттянутого вперед. От уровня средней трети лопатки ость лопатки образует акромиаль- ный отросток, который на всем протяжении не соприкасается с лопаткой. Над суставной впадиной он образует сустав и заканчивается акромион за суставом лопатки. В нижнем конце акро- мион плоский, раздвоен (рис. 30). Имеет треугольную форму. Длина в 2 раза больше ширины. Ость лопатки увели- чивавется в направлении сустава лопатки и нависает над ним. Ость лопатки разделяется на две части – ветвь, опускающуюся вниз, и ветвь, отогнутую кзади под прямым углом (рис. 30,31). Длина на 1/3 больше ширины. Ость лопатки проходит посередине, и имеет отросток направленный назад. Акромион заканчивается над суставом ив нижнем конце не раздваивается рис. 30,32). Продолжение таблицы 5
- 60 - Кости Нутрия Кролик Кошка Ребра
(рис. Короткие, в верхней части очень загнутые, плоские. Длинные, тонкие, круглые в виде овала. Длинные, тонкие, круглые в виде полукруга. Плечевая кость Короткая, массивная, на дистальном конце повернута по своей оси. Локтевая и короно- видная ямки соединяются отверстиями. Латеральные и медиальные бугры плечевой кости сглажены. Сильно развит гребень большого бугра (вертлуг). Головка более резко отграничена от тела шейкой и находится на одной высоте с большим бугром
(мыщелком). Имеет малый и большой бугор. Тело округлой формы. Нижний конец имеет внешний и внутренний отросток, коронопо- добную и локтевую ямку (рис. 31,
34). Головка нерезко отграничена от тела, на проксимальном конце слегка изогнута. Большой бугор кости выше головки (рис.
32). Лучевая и локтевая кости
Серповидно изогнуты по длине, не сросшиеся. Впрок- симальном конце соединяются суставом, а на дистальном - волокнистым хрящом. Между лучевой и локтевой костью имеется широкое пространство. Локтевая длиннее и больше лучевой, которая тонкая и образно изогнута. Обе кости сросшиеся, сопровождают друг друга на всем протяжении и плотно прилегают друг к другу (рис. 31). Локтевая сопровождает лучевую на всем протяжении и образует межкостное пространство. Кости не сросшиеся, на проксимальном конце соединяются суставом, на дистальном- волокнистым хрящом (рис. Крестцовая кость Состоит из 4 сильно развитых и сросшихся позвонков. Имеет 4 раздельных остистых отростка. Длинная, с 4 высокими остистыми отростками рис. 36,37). Короткая, с 3 низкими шишкообразными остистыми отростками. Продолжение таблицы 5
- 61 - Кости Нутрия Кролик Кошка Кости таза Форма контуров тазовой полости цилиндрическая. Крылья массивные. Кости таза хорошо развиты. Форма контуров тазовой полости цилиндрическая. Крылья узкие, вертикально поставлены. Суставная полость таза имеет ушкопо- добную полость рис -39). Форма контуров тазовой полости цилиндрическая. Крылья тонкие, узкие. Кости таза тонкие, небольшие (рис.
40). Бедренная кость Головка резко ограничена шейкой. Хорошо развит большой вертел, малый вертел в виде хорошо выраженного бугра, третий вертел неразвит, верт- лужная впадина глубокая. Под большим вертелом располагается малый и третий вертелы (рис. 39,41). Имеет только один большой вертел рис.
40). Берцовые кости Латеральный мы- щелок большеберцовой кости образует отросток с хорошо выраженной суставной поверхностью для соединения с малоберцовой костью. Малоберцовая кость сопровождает большеберцовую на всем протяжении ив дистальном конце соединяется с большеберцовым суставом. Малая берцовая кость сопровождает большеберцовую до нижней трети, где и срастается с ней, образуя в проксимальной части неправильное треугольное пространство рис.
39,42). Большая и малая берцовые кости одинаковой длины и сопровождают друг друга на всем протяжении. Концы, соединяясь суставными поверхностями, образуют меж- костное пространство, значительное в проксимальном конце рис. 40). Продолжение таблицы 5
- 62 - Рис. 44. Легкое и сердце кролика А - вид слева Б - вид справа
1 - верхушечная часть соответствующей доли легкого, 2 -сердечная часть легкого 3 - диафрагмальная часть легкого 4 - остатки тимуса с жиром 5 - правый желудочек сердца 6 - левый желудочек сердца 7 - верхушкасердца; 8 – левое ушко 9
- правое ушко 10 - легочная артерия 11 - аорта 12 - левая и правая подключичная артерия 13 – Левая и правая сонная артерия краниальная полая вена 15 - трахея.
- 63 - Рис. 45. Печень кролика
1 – левая наружная часть
2 – левая внутренняя часть 3 - средняя (квадратная) часть редуцирована правая часть 5 – сосцеподобная часть 6 – хвостатная часть 7 – почечное углубление 8 – желчный пузырь 9 - ворота печени. Таблица 6
Отличительные признаки некоторых органов нутрии, кролика и кошки Орган Нутрия Кролик Кошка Язык Плоский, длинный, верхушка языка равномерно закруглена. Короткий, толстый, имеет уздечку, подушку языка. Верхушка языка равномерно закруглена рис. 43) Длинный, широкий, тонкий и имеет желобок на дорзальной поверхности. Легкие Состоят из 7 частей одинакового размера. Бронхи свободны от легочной ткани
(1,0 – 1,5 см. Состоят из 7-8 частей. Легочная ткань покрывает легкие до бифуркации. Правое легкое имеет добавочную, сердечную часть (рис. Состоит из 6 частей разного размера. Левая верхушечная часть раздвоена. Легочная ткань покрывает легкие до бифуркации.
- 64 - Орган Нутрия Кролик Кошка Селезенка Короткая, плоская, широкая. Вытянутая, языкопо- добной формы. Верхний край суженный, передний край загнутый, а задний выпуклый. Длинная, вытянутая, нижний конец её шире верхнего. Печень Состоит из 7 самостоятельных частей. Квадратная часть в виде пластинки и поставлена вертикально между правой и левой частью. Желчный пузырь расположен между квадратной и правой медиальной частью, выходит за пределы печени на диафрагму. Имеет 4 основные части две левые, одну правую и среднею квадратную, которая имеет 2 хорошо развитые отростки хвостатый и соскопо- добный. Желчный пузырь лежит между средней и правой частью. В печени есть вырезки для прохождения вены и пищевода (рис. 45 ). Квадратной части нет, хвостатая часть её имеет соскоподобный отросток треугольной формы. Желчный пузырь лежит в глубокой, широкой вырезке и выходит за пределы правой части. Почки Гладкие, однососчко- вые, овальной формы. Гладкие, однососоч- ковые, бобовидной формы, плоские. Хорошо выражен корковый, пограничный и мозговой слой. Правая почка лежит под ребрами, а левая около поясничного позвонка. Гладкие, одно- сосчковые, бобовидной формы. Продолжение таблицы 6
- 65 -
1 2 3 4 5 6 7 8 9
1.4. троение волоса Несмотря на то, что на сегодняшний день применяются новейшие научные методы определения вида животных на молекулярном уровне, морфологические методы определения вида животных по особенностям анатомических структур, в частности по структуре волос все еще остаются актуальными. Одной из форм деятельности ветеринарного врача может быть работа в качестве судебно-ветеринарного эксперта. В настоящее время встречаются случаи воровства животных, не зарегистрированйо- го убоя животных, браконьерства диких животных, хищений меха и меховых изделий и пр. Исследование волос занимает важное место в работе эксперта-биолога. Возникает необходимость выяснения вопросов по выявлению вида живорюго построению шерстного покрова, мясу, мясопродуктам, костям. Все эти вещественные доказательства, особенно волосы или их фрагменты, могут быть обнаружены на месте происшествия, на орудиях преступления, острых и тупых предметах, а также на огнестрельном оружии, транспортных средствах, одежде подозреваемых и т.д. Развитие и рост волоса (pilus) начинается с утолщения эпителия, затем благодаря усиленному размножению клеток образуется зачаток, который в виде клеточного тяжа, все увеличивающегося в размере, погружается в дерму кожи (рис. 46). На конце клеточного тяжа образуется утолщение, формирующее луковицу (5). Внутрь луковицы врастает мезенхима, образующая сосочек волоса (4). Из средней части эпителиального зачатка образуется выпячивание дающее начало сальной железе. В области луковицы клетки усиленно размножаются и дают начало стержню волоса, который, раздвигая клетки эпителиального тяжа, пробивает себе путь к поверхности кожи. Под давлением молодых клеток, непрерывно образующихся в луковице, стержень продолжает удлиняться. Клетки эпителия, расположенные около внутрикожной части стержня, формируют наружное (8) и внутреннее (7) корневые влагалища. Из окружающей мезенхимы, кроме волосяного сосочка, вокруг корня волоса развивается соединительнотканная сумка волоса (10), а также гладкая мускулатура (12). Сложившийся волос состоит из стержня и корня. Стержень
(14) имеет надкожную часть (шерсть, или волос) и часть, скрытую в коже, входящую в состав корня волоса. На поперечном разрезе стержня видно, что он состоит из мозгового и коркового вещества, а
- 66 - также кутикулы (15). Сердцевина, или мозговое вещество (17), занимает центральное место в стержне. Это сплошной или прерывистый продольный тяж, состоящий из одного или нескольких рядов многоугольных (полигональных) живых, частично ороговевших клеток эпителиального происхождения. В цитоплазме клеток отлагается ке- ратогиалин, который ближе к наружному слою стержня превращается в элеидин, а последний в кератин. Внутри клеток и между ними обнаруживают пузырьки воздуха, поэтому волос обладает небольшой теплопроводностью, защищая тело животного от охлаждения. В сердцевине находится пигмент, придающий цвет волосу. Самые нежные волосы овец — пух, волосы молодых животных и некоторые другие не имеют мозгового вещества. Наоборот, у оленя оно развито очень сильно. Корковое вещество (16) - основная масса стержня, придает ему механическую прочность, растяжимость, гибкость и упругость. Волосы, лишенные этого слоя (северный олень, легко рвутся. В корневой части, около луковицы, стержень состоит из живых клеток с округлыми ядрами и слабыми признаками ороговения. По мере удаления от луковицы клетки становятся удлиненными ибо- лее ороговевшими, причем роговое вещество образуется сразу в виде твердого кератина, обусловливающего механические свойства стержня. В надкожной части сильно вытянутые клетки коркового слоя обычно уже лишены ядерно содержат пигмент. С возрастом в корковом веществе увеличивается количество пузырьков газа, из-за чего волос седеет. Кутикула волоса (15) состоит из плоских, ороговевших, налегающих одна на другую, подобно черепице, или тесно прилегающих друг к другу безъядерных клеток. От конфигурации границ клеток кутикулы зависит разнообразный рисунок волоса, неодинаковый у животных различных пород. Кутикула защищает волос от действия влаги, света, химических веществ и механических повреждений. От ее свойств зависят прядильные качества шерсти. Корень волоса состоит из внутрикожной части стержня, окутывающего его волосяного фолликула, луковицы с волосяным сосочком (17), а также сальных желез (15) и мышцы. Внутри кожи часть стержня вблизи луковицы состоит из живых, малоороговевших клеток. Ближе к поверхности кожи он построен также, как и наружный стержень (рис. Корень с поверхностью кожи образует некоторый угол, поэтому стержень ложится более или менее параллельно поверхности кожи. Если волосяной мешок зигзагообразно изогнут, то выдвигающийся из него наружу стержень имеет большую или меньшую извитость. У тонкорунных овец из полости мешка может выходить несколько стержней, которые склеиваются секретом кожных желез в косички, а последние объединяются в штапель. Рис. 46. Схема расположения волос в коже грубошерстных слева) и тонкорунных овец (в продольном разрезе
1 - эпидермис 2- подэпидермальная зона сосочкового слоя 3
- промежуточная зона сосочкового слоя 4 - ретикулярный слой 5 - луковица и сосочек 6- кровеносный сосуд 7 - секреторные отделы потовых желез 8 - мышца 9 - дольки сальных желез 10 - вторичные фолликулы- переходный волос 12 - пух 13 - ость 14 - первичный фолликул 15 - шерстяные волокна 16 - фолликул. Волосяной фолликул окутывает внутрикожную часть стержня и, подобно коже, состоит из эпителия и соединительной ткани. Из эпителия образуются внутреннее и наружное корневые влагалища, а из соединительной ткани - волосяная сумка. Внутреннее корневое влагалище (7) прилегает к стержню. Оно начинается с луковицы и доходит обычно лишь до места впадения сальных желез. Укоров оно достигает поверхности кожи и является продолжением рогового слоя ее. Данное влагалище слагается из нескольких слоев клеток. Самый внутренний слой - кутикула влагалища, состоящая из одного ряда ороговевших клеток. Следующий слой - гранулосодержащий эпителиальный, представлен 1-2 рядами светлых клеток с небольшим количеством трихогиалина. За этим слоем идет бледный эпителиальный слой, в котором при обычной окраске ядра различить невозможно.
- 68 - Наружное корневое влагалище (8) является прямым продолжением базального слоя эпидермиса кожи и имеется на всем протяжении корня волоса. Количество составляющих его клеток по направлению к луковице постепенно уменьшается. Самые наружные, более высокие клетки влагалища - производящие. Благодаря им образуются остальные клетки наружного влагалища. Волосяная сумка (10) образована соединительной тканью с хорошо выраженными внутренними циркулярными и наружными продольными коллагеновыми и эластическими волокнами. Сумка хорошо развита в толстых волосах. От волосяной сумки к эпидермису кожи направляются под тупым углом пучки гладких мышечных клеток, которые, сокращаясь, поднимают волосы, а также содействуют выведению секрета сальных желез. Луковица волоса (5) слагается из живых, усиленно размножающихся эпителиальных клеток. Они дают материал для образования стержня и внутреннего корневого влагалища. Волосяной сосочек (9) состоит из соединительной ткани с массой кровеносных сосудов и нервов. Первые доставляют необходимые для жизнедеятельности волоса питательные вещества, а нервы обеспечивают связь волоса с организмом. Периодически происходит смена волос. При этом производящие клетки луковицы начинают получать из сосочков меньше питательных веществ, они перестают делиться, часть их орогове- вает и вместе со стержнем отделяется от живых клеток луковицы. Оказавшись свободным, стержень вместе с участком луковицы выдвигается из волосяного мешка наружу и отпадает. Из остатка сосочка и живых клеток луковицы развивается новый волос, помещающийся в том же волосяном мешке. У взрослых млекопитающих различают 3 основных типа. Волосы покровные, или остевые (шерсть, длинные и прямые щетины и иглы - видоизменённые волосы пуховые (подшёрсток) - нередко без сердцевины, обычно волнообразно изогнутые, тонкие, короче покровных осязательные, или вибриссы. Выступающая свободно над поверхностью кожи часть волос называется стержнем, часть, погру- жённая в кожу, - корнем, заканчивающимся расширенной частью - луковицей, в углубление которой входит сосочек, содержащий сосуды и нервы к сосочку прилегают камбиальные клетки луковицы, размножением которых осуществляется рост волос.
- 69 - Различают 3 слоя волос
1) Сердцевина, состоящая из крупных клеток с кератинопо- добным веществом, в этом слое содержатся пузырьки воздуха рис. Рис. 1. Схемы строения волоса схема А - продольный разрез схема Б - поперечный разрез на уровне, отмеченном на схеме А пунктиром 1 - кутикула волоса 2 - корковое вещество 3 - сердцевина волоса 4, 5- роговой и ростковый слой эпидермиса 6 - соединительнотканная основа кожи 7 - наружный слой волосяной сумки 8
- внутренний слой волосяной сумки 9 - стекловидная оболочка 10 - наружное корневое влагалище 11 - внутреннее корневое влагалище
12, 13 - слои внутреннего корневого влагалища 14 - кутикула влагалища- сальная железа 16 - мышца, приподнимающая волос 17 - луковица волоса.
- 70 -
2) Корковое вещество, представленное склеенными ороговевшими веретеновидными клетками, заполненными частично сросшимися нитями (фибриллами) рогового вещества - кератина, ориентированными параллельно оси волос фибриллы в виде плотноупакованных более тонких нитей - филаментов - диаметром А, состоящих, в свою очередь, из протофиламентов - диаметром около 20 А, образованных 2-3 спиралевидно переплет нными нитевидными молекулами белка (рис. Механическая прочность волос определяется главным образом корковым веществом, клетки которого, как и клетки сердцевины, могут содержать пигмент меланин, придающий волосам в зависимости от его количества и степени дисперсности различный цвет — от чёр- ного до светлых тонов.
3) Кутикула - слой черепицеобразно наложенных друг на друга плоских ороговевших клеток, содержащих в основном аморфный кератин. Корневая часть волоса лежит в волосяном мешке, образованном продолжением кожного эпителия и состоящем из внутреннего и наружного корневых влагалищ с окружающей соединительнотканной волосяной сумкой. Внутреннее влагалище, как и волос, формируется за счёт размножения клеток луковицы, сопровождает выдвигающийся входе роста волос и разрушается, не доходя до уровня протоков сальных желёз. Клетки наружного влагалища сами способны к размножению. Связанные с волосом потовые железы открываются выше места впадения сальных желёз (рис. Волос состоит из стержня и корня. Стержень находится над поверхностью кожи, корень лежит в толще кожи, доходя до подкожной жировой клетчатки. Корень волоса заключен в волосяной мешок, образованный эпителием и соединительной тканью. Расширение корня на его конце называется волосяной луковицей, из которой происходит рост волос. Эпителий волосяного мешка вдается снизу в волосяную луковицу и образует волосяной сосочек. Вместе перехода корня волоса в стержень образуется углубление - волосяная воронка, в которую открываются протоки сальных желез. Несколько глубже желез в коже лежит мышца, поднимающая волос. Определение видовой принадлежности волоса проводится на результатах исследования его строения. Вначале волос характеризуют визуально (макроскопически. Органолептически определяют форму волоса (прямой, изогнутый, извилистый, длину (миллиметрах или сантиметрах, окраску (цвет) устанавливают при просмотрена белом и черном фоне. Учитывают одноцветность, равномерность окраски (по стержню.
- 71 - Затем проводят микроскопическое определение вида животного. Исследование кутикулярного слоя лучше проводить в ном растворе аммиака, а коркового и мозгового – после просветвления волоса в ксилоле. Волос кладут не предметное стекло, наносят каплю ксилола или
50%-ный водный раствор глицерина, просматривают под микроскопом при малом и большом увеличении и определяют
- свойства корневого конца (оторванного или с луковицей, при её наличии определяют жизнеспособность волоса
- форму стержня волоса (чашеобразная - у лося, оленя, косули лентовидная у лошади, свиньи, крупного рогатого скота шишковидная с переходом в лентовидную, седловидную форму – у собаки, овцы
- разновидность коркового слоя (изменения по направлению волоса, соотношение к толщине волоса, наличие и характер пигмента его цвет, размер зёрен и их расположение центральное или периферическое- структура и развитие сердцевины (в виде непрерывного или прерывистого тяжа, островками по всей длине или прикорневой части. Большое диагностическое значение имеет соотношение толщины сердцевины к толщине всего волоса. Изучают поперечное строение остевых, направляющих и пуховых волос. Полученные результаты регистрируют и сравнивают их с результатами заведомо известных образцов или с атласом фотографий микроструктуры волос животных и определяют вид животного (рис. 48). У сельскохозяйственных парнокопытных и цельнокопытных животных а) сердцевина кроющего волоса крупного рогатого скота в виде непрерывного тяжа равномерной толщины, у яка в виде мелких, округлых глыбок, склеенных между собой, у верблюда в виде неправильных вытянутых прерывающихся овалов с центрально расположенным пигментом б) у овец в корневом отделе сердцевина в виде широкого тяжа, затем прерывистая, ау верхушки представлена отдельными островками. У коз сердцевина представлена клетками овально неправильно округлой формы различной величины, а на границе с корковым слоем они косо вытянутой овальной формы в) домашние свиньи в щетине чаще не имеют сердцевины, либо она представлена в виде напыления, волос имеет большую ширину, пигментация мелкозернистая. У диких свиней мозговой слой в виде напыления и мелких глыбок с центрально густо расположенными гранулами пигмента различной величины
- 72 - Рис. 48. Кутикула волоса (схема 1 - человека
2 - черно-бурой лисицы 3 - лошади 4 - козы. г) у лошадей сердцевина кроющих волос местами имеет изломанный вид в виде непрерывного тяжа у верхушки и корня в виде отдельных островков. Пигмент группируется вокруг клеток сердцевины, ноне присутствует в самих клетках. Клетки сердцевины кроющего волоса у ослов имеют сильную зернистость и хорошо различимые параллельные мелкие полоски, а в остальном волосы сходны с лошадиными. В семействе собачьих схожи волос овчарки и волка, но рисунок волчьего волос в виде квадратов или прямоугольников, плотно прилегающих друг к другу. Волосы собаки имеют большую межпородную вариабельность. У лис рисунок в виде вытянутых четырехугольников со светлым оттенком по центру, ау шакалов в виде светлых округлых фрагментов. В семействе кошачьих морфологическая картина волоса разнообразная- у кошки лестницеобразное строение сердцевинного слоя, у барса в виде мелких гранул налипающих друг на друга, у рыси рисунок в виде треугольников с просветами. Животные пушного направления, такие как барсуки сурок в кроющем волосе имеют широкий сердцевинный и корковый слои у барсука и суслика лестницеобразное строение сердцевинного слоя, хотя у суслика корковый слой намного тоньше. Мозговой слой волоса песца напоминает еловую шишку, подобная картина у белки, где корковый слой очень узкий, а пигмент расположен в межклеточном веществе. В волосе ондатры рисунок сердцевины в виде выступающих контрастных петель. У норки рисунок с округло-чешуйчатыми структурами, в шахматном порядке. У хорька рисунок сердцевины волоса напоминает строение волоса кошкино гранулы пигмента коркового вещества вытянуты в штрихи и линии, ау кошек это не наблюдается. Волосы кроликов с хорошо развитым сердцевинным слоем, в виде 2-5 рядов квадратов выстроенных рядами.
У представителей копытных дикой фауны сердцевинный слой волоса занимает 2\3 части и проходит сплошным слоем, чаще имеет крупноячеистое строение, свойственное конкретному виду.
У крупного рогатого скота клетки мозгового слоя более плоские, у лошади высокие с промежутками, у коз и овец – вытянутые, расположены почти параллельно друг другу, у свиней мозговое вещество тонкое, с высокой каймой. Полученные результаты помогут точно определить вид животных построению волоса также установить принадлежность волоса конкретного животного и будет иметь решающее значение при спорных и судебных вопросах в области ветеринарно-судебной экспертизы.
- 74 -
2. ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ Липиды Методом газовой хроматографии в экстрактах мышечной ткани различных видов животных onpеделяли углеводороды, циклобутаноны и полиненасыщенные жирные кислоты, обеспечивающие межвидовые различия. Изучали холестерол и его эфиры, жирно- кислотный состав и основные физико-химические характеристики липидов и липопротеинов. Последние методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности фракционировать на липопротеины высокой и низкой плотности. По многим из этих показателей обнаружили определенные видовые различия, однако на основании этого пока невозможно ocyществлять количественную детекцию видовой принадлежности мяса и мясопродуктов Инертные белки.Видовую принадлежность сырого и после термообработки мяса крупного рогатого скота кури кроликов определяли масс-спектрометрическим анализом, выявляя различия в актинах, гемоглобинах, миоглобинах и альбуминах. Результаты анализов по заключению авторов были удовлетворительными, однако проведение таких тестов требовало сложного и дорогостоящего оборудования, что создавало определенные трудности. Методом электронного парамагнитного резонанса идентифицировали видоспецифичные пептиды тяжелых цепей атриал-специфичного миозина кур Он также не нашел широкого распространения. Нуклеиновые кислоты.Ученые дифференцировали образцы мяса кур, свинины, говядины, баранины и козлятины в мясопродуктах, которые нагревали 30 мин при 80, 100 и 120° С методом анализа ДНК. Идентификацыю осуществляли с помощью хромосомоспе- цифичных ДНК-фрагментов, меченных биотином, и их последующей гибридизацией с образцами ДНК, сорбированными на нейлоновой мембране. Авторы считают, что данный метод пригоден для определения термически обработанных мяса птиц, свинины и говядины при использовании для анализа мг и более ДНК. С помощью этой методики идентифицировали мясо индейки мясе курицы и других мясопродуктах. В опытах применяли микросателлиты
ДНК-маркеры, конъюгированныес с щелочной фосфотазой. Их ги- бридизировали с ДНК крупного рогатого скота, овцы, козы, свиньи, лошади, оленя, курици и индейки. При этом возможно дифференцировать мясо нативное и после термообработки даже у животных близких видов. Чувствительность метода позволяет определять
- 75 - примеси одного вида мяса в другом в количестве 1-5%. С помощью нерадиоактивной слот-блот гибридизации, используя видоспецифичные олигонуклеотидные пробы, ученые успешно идентифицировали мясо кролика, овцы, свиньи, козы и крупного рогатого скота в сырых и коммерчески готовых консервированных продуктах (включая корм для домашних животных. Нижний предел чувствительности метода позволяет определять наличие примесей от 2,5 %. при поиске различий между отдельными видами рыб (тунец, сельдь, сардины лосось, осетр) после тепловой обработки использовали амплифицированные полимеразной цепной реакцией короткие фрагменты ДНК гена мито- хондриального цитохрома b (123-358 жований). Авторы обнаружили различия как между отдельными видами рыб, таки между икрой трех типов осетровых. С помощью обширного арсенала методов работы с ДНК установили, что у различных животных гены основного миофиб- риллярного белка актина содержат в кодирующем регионе множество гомологичных последовательностей, но обладают сущесущественной вариабельностью в числе и размера интронов. В конечном итоге
«фингерпринт» позволяет выявлять видовые, породные и даже индивидуальные различия в мышцах, в том числе после термообработки при
120 ° Стечение ч. Для определения видовой принадлежности мяса без костей, фарша и мясных продуктов ветеринарная служба России применяет качественное и количественное определение гликогена, реакцию преципитации и полимеразную цепную реакцию. Реакция на гликоген.В созревшем мясе различных животных содержится гликогена в говядине - 0,2-0,3 % (примерно столько же в баранине и свинине) конине — около 1 %, мясе собаки - около 2 %, кошки - около 0,5 %. Реакция преципитации (РП) в агаровом геле.При использовании РП-видовую принадлежность мяса. Для этого необходимо иметь набор соответствующих преципитирующих и нормальных сывороток разных видов животных (коровы, лошади, свиньи, овцы, козы, собаки, кошки и др. Полимеразная цепная реакция. В ВГНКИ и ЦНИИЭ разработана тест-система «БИГ» для определения белков животных. Чувствительность метода составляет 10 копий ДНК, специфичность - 100 %.
Сиквенс-методы.Известен метод рестрикционного анализа ДНК крупного рогатого скота, буйвола, овцы и козы. Применение различных рестриктаз приводит к гидролизу ДНК на фрагменты, в разной степени пригодные для видовой идентификации. Исследователи идентифицировали тяжелые цепи атриал-специфичного миозина курицы прямым секвенированием белка. Они выявили четыре пептида с отличающимися последовательностями аминокислот. Эта группа методов перспективная, но дорогая, поэтому находится в основном на вооружении криминалистических лабораторий. Физические методы.Для определения видовой принадлежности мяса мышечные экстракты из сырых и прошедших тепловую обработку тканей различных видов животных впрыскивали в электрическом разряде с масс-спектрометрией. Метод признали потенциально пригодным, но дорогостоящими нуждающимся в серьезной доработке. При применении методов термолюминесценции и электронного парамагнитного резонанса выявили специфические спектры для различных видов рыб и ракообразных. Перспективность дальнейшего развития и использования этой группы методов остается пока проблематичной. Хроматографические методы.Для дифференцированного определения орто- и мета-тирозина, которые можно рассматривать как специфические видовые аминокислотные маркеры, ученые использовали методы высокоэффективной жидкостной и газовой хроматографии . Их же применяли для расшифровки жирнокислотного состава липидов. При изучении изоферментов протеинкиназы С человека и крысы с помощью комбинированной хроматографии на целлюлозе и фенилсе-фарозе установили наличие тканеспецифичности и отсутствие видоспецифичности. По- видимому, методы хроматографии с использованием традиционных кати- оно- и анионообменников неперспективны. Псевдоаффинную и аффинную хроматографии при наличии строгоспецифичных сорбентов можно применять для получения качественной и полуколичественной информации. Однако методы высокоэффективной жидкостной и газовой хроматографии нельзя сбрасывать со счетов. Электрофоретические методы.Используя метод вертикального электрофореза в полиакриламидном геле, изучали различия в скелетных мышцах 120 видов животных. Между близкородственными видами они оказались незначительными. При определении видовой специфичности экспрессии изоферментов цитохром-С- оксидазы у овцы, собаки, крысы, крупного рогатого скота, кролика, человека и радужной форели двумя разделительными системами электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и последующим блотом на мембрану установили органную и видовую специфичность различных изоферментов цитохром-С- оксидазы. Применив автоматизированный метод капиллярного
- 77 - электрофореза для дифференциации видов мяса разных животных, ученые пришли к выводу о высокой точности и пригодности этой усовершенствованной модификации электрофореза. В 1981 г. была предпринята попытка разделения белков в экстрактах сырых скелетных мышц многочисленных видов сельскохозяйственных, диких животных и рыб методом изоэлектрофокусирования. При этом использовали широкий набор амфолитов с рН 3,5-9,5 и завершающей денситометрией. Данный методический прием во всевозможных модификациях апробировали многие исследователи на сарко- плазматических белках самых разных видов животных, птиц, рыб, моллюсков и ракообразных, как нативных, таки подвергнутых разным режимам термообработки .
Иммуноэлектрофоретический анализ - последовательное сочетание электрофореза на пластинках геля с последующей иммуно- диффузией уже при выключенном электрическом токе. Одной из многочисленных его модификаций является встречный электрофорез. В этом случае иммунопреципитация происходит в электрическом поле, если антитела и антигены мигрируют диаметрально противоположных направлениях. К сожалению, эти тесты позволяют определить только качественные характеристики и имеют весьма ограниченные возможности при количественной видовой идентификации мяса и мясопродуктов.
Энзимологические методы. В 1978 и 1980 гг. появились сообщения о различиях ферментного спектра неспецифической эстеразы в скелетной мускулатуре косули и красного оленя. У разных видов животных выявили специфику изоферментного состава мышечных глю- козо-6-фосфатдегид-рогеназы, фосфоглюкомутазы и аденилаткиназы, обнаружили различия в изоферментном составе креатинкиназы мышц отдельных видов животных и птицы. Аналогичное заключение сделали и после изучения активности аргининкиназы. В 1989 г. был создан ряд гибридомных клеточных линий, способных синтезировать моноклоны антител,специфичных к различным водорастворимым мышечным белкам курицы и индейки. Антитела, синтезируемые тремя из полученных линий, не давали перекрестных реакций с мышечными экстрактами из свинины, говядины, баранины, конины и крольчатины. Только одна клеточная линия секретировала моноклональные антитела, способные дифференцировать мясо курицы и индейки. Авторы после применения специальных аналитических процедур точно идентифицировали двасарко плазматических фермента гликолитического пути, которые можно отнести к специфическим антигенам куриной мышцы, - пируваткиназу и 3-фосфо глицераткиназу. При сравнительном изучении каталитической активности трансглута- миназы актомиозинов различных видов рыб ученые выстроили ряд для разных видов с убывающей активностью от 2,41 до 0,10Е/г сырого веса. Известны различия в величинах ферментативных активностей у жвачных и моногастричных животных. Некоторые ферменты, проявляющие высокую каталитическую активность у жвачных, совершенно отсутствуют у моногастричных и наоборот. Однако эти различия относятся к ферментам, локализующиеся не в мышечной ткани, поэтому их в будущем можно использовать при видовой идентификации таких продуктов, как печень и почки. При изучении видовой специфичности экспрессии изоферментов цитохром-С-оксидазы и протеинкиназы Су овцы, собаки, крысы, крупного рогатого скота кролика, человека и радужной форели авторы установили у этих ферментов наличие тканеспецифичности и отсутствие видоспецифичности. Аналогичный вывод сделали и относительно изоферментного спектра лактатдегидрогеназы. Тем не менее, вся эта информация не может быть положена в основу разработки количественных методов видовой идентификации мяса и мясопродуктов.
Иммуноферментные методы.Различные варианты ИФА по чувствительности, точности и воспроизводимости не уступают радио- иммунным методам анализа, а по стоимости и безвредности значительно предпочтительнее их. Английские ученые первые применили метод твердофазного ИФА для определения присутствия сои в мясных продуктах. В сырых мясных продуктах сою выявляют точно и надежно, в то время как в термообработанных количественный анализ затруднен. Описан твердофазный ИФА с аффинно-очищенными полик- лональными антителами и конъюгатом протеина А золотистого стафилококка с пероксидазой хрена для детекции необработанных говядины, баранины, свинины, конины, мяса козы, осла, кенгуру, буйвола и верблюда. Все эти виды мяса надежно определяли при их наличии в смесях в количестве 1 % по сырой массе. Особое внимание уделено определению примесей мышечных тканей филогенетически близкородственных видов. Применение ИФА со специальными модификациями для каждого конкретного случая позволило детектировать 0,1 % примесей мяса осла в конине, 0,1 % мяса коз в баранине и 1 % мяса буйвола в говядине. Для выделения стабильных видоспецифичных ионов при конструировании тест-ИФА использовали автоклавирование в течение 30 мин. Для этого они выделили антигены из мышечной ткани свиньи после ее нагревания при
- 79 -
100 ° Св течение 15 мин, затем неочищенным экстрактом иммунизировали мышей для получения моноклональных антител. В результате отобрали один гибридомный клон, продуцирующий антитела, которые реагировали с аналогично обработанным мясом крупного рогатого скота, свиньи, овцы, лошади и оленя, ноне взаимодействовали с сырыми термообработанным мясом курицы, индейки и утки. Эта неожиданная находка позволила авторам сконструировать тест-систему ИФА для высокочувствительной детекции наличия мяса указанных видов животных в смесях на основе мяса перечисленных видов птиц Многие авторы единодушно считают, что ИФА-перспек- тивный метод, однако для избавления от перекрестных реакций антител необходимо использовать антигены, тщательно очищенные от видонеспецифических компанентов. В качестве арбитражного метода рекомендуется применять полимеразную цепную реакцию.
1 2 3 4 5 6 7 8 9
2.1. Физико-химические методы Видовую принадлежность мяса животных можно определить по температуре плавления и коэффициенту рефракции (преломления) жира. Данные константы жира зависят от соотношения в жире предельных (насыщенных) и непредельных (ненасыщенных) жирных кислот. Кроме того, ставят реакцию на гликоген, реакцию преципитации и определяют йодное число.
2.1.1. Температура плавления жира Капилляр диаметром 1,4-1,5 мм наполняют расплавленным жиром, кладут его вхолодную воду или холодильник до остывания, а затем прикрепляют резиновым кольцом к химическому термометру рис. Столбик жира должен быть на одном уровне со столбиком ртути. Термометр с капилляром помещают в широкую пробирку так, чтобы термометр не касался стенки пробирки. Пробирку устанавливают в стакане с водой, уровень которой должен быть выше верхнего конца капилляра. Воду в стакане медленно нагревают и наблюдают за показаниями термометра и состоянием жира в капилляре (на темном фоне. В тот момент, когда жир станет совершенно прозрачным, отмечают температуру его плавления. Знание температуры плавления жира легко позволяет отличить баранину от мяса собаки,
- 80 - говядину - от конины (жир собаки лошадей тает в руках. При определении точки плавления жира следует обратить внимание на место, откуда был получен жир для анализа и качество корма, которым питалось перед убоем животное. Исследования показали, что у одного итого же животного почечный жир тверже, нежели подкожный и сальника, а жир свиней, откармливаемых, например, картофелем, мягче, нежели свиней откармливаемых хлебом и т.д. Отношения точек плавления различных жиров друг к другу приведены в табл. 5. Рис. 49 . Прибор для определения температуры плавления жира
1 - электрическая плитка
2 - штатив
3 - стакан с водой
4 - пробирка широкая
5 - пробка
6 - термометр
7 - капилляр с жиром.
- 81 - Таблица 5 Некоторые физико-химические показатели различных видов топленых жиров Вид жира Температура плавления, С Плотность, г/см
3 при температуре) Коэффициент рефракции при температуре) Йодное число Бараний
49-54 0,932-0,961 С)
1,4566-1,4383 С)
31- 46 Барсучий
8-9 0,903 (С) 1,4562-1,4564 С)
92-102 Верблюжий
36-48
-
1,447
- Говяжий
48-50 0,937-,953 С)
1,451-1,458 (С)
32-47 Гусиный
-
-
1,451 (С)
59-71 Заячий
-
-
1,454 (С)
- Китовый
-
0,922-0,923 С)
1,456-1,458 С)
94-145 Козий
46-48
-
-
- Конский
28-32 0,916-,920 С)
1,459-1,466 С)
74-84 Коровьего молока
-
0,918-0,925 С)
1,452-1,457
(40° С)
24-40 Кроличий
22-25
-
1,462 (С)
70 Куриный
-
-
1,451 (С)
58-80 Лосиный
46-48
-
-
62-66 Медвежий
30-36
-
1,454 (С)
- Нутриевый -
-
1,458- 1,461 (С)
60-74 Олений
48-52
-
-
- Свиной
37-45 0,931-0,938 С)
1,4536 С)
46-66 Собачий
23-27 1,451 (С)
56-67 Сурковый
9-10 0,901 (С) 1,467-1,468 (С)
-
- 82 -
2.1.2. Коэффициента преломления жира Коэффициент преломления жира устанавливают при помощи различных рефрактометров - универсального, ИРФ, РПЛ-3 и др.
Светопреломляющие свойства (рефракция) жира зависят от количества содержащихся в нем триглицеридов, предельных и непредельных кислот. Коэффициент преломления жира находят при температуре, близкой к температуре его плавления. Вначале рефрактометр устанавливают по дистиллированной воде (n= 1?333). Исследования проводят при 20° С. Если температура плавления выше 20° Сто коэффициент преломления пересчитывают по формуле
N20° = n + (Т - 20°) 0,00035, где N20° - коэффициент преломления при 20° С n – коэффициент преломления при исследуемой температуре Т - 20° - разность температур постоянная величина. На нижнюю призму рефрактометра наносят каплю исследуемого жира. Осветителем направляют пучок света в осветительную призму и ведут наблюдение через окуляр. Деление шкалы, через которое проходит граница светотени, является коэффициентом преломления исследуемого жира (табл. 7).
2.1.3. Качественная реакция на гликоген Сущность этой реакции состоит в том, что сложные полисахариды являются индикаторами на йод ив присутствии его дают цветную реакцию (гликоген окрашивается в красный цвет, крахмал – в синий. В мясе количество гликогена к концу первых суток хранения уменьшается в 2-3 раза по сравнению с наличием его в первый час после убоя животного. В парном мясе крупного рогатого скота гликогена содержится 0,6-0,7%, а в созревшем – 0,2-0,3 %; примерно такое же количество гликогена в мясе овец и свиней. В парном конском мясе гликогена более 2%, а в созревшем – около 1%; в парном мясе собаки –
4%, в парном мясе кошки – 1%. Качественная реакция обнаруживает гликоген (по общепринятой постановке реакции) при наличии его в мясе около 1%. Поэтому этой реакцией ветсанэксперты могут пользоваться для отличия говядины от конины и баранины от мяса собаки и других видов животных. Ход определения Навеску мяса (15 г) измельчают ножницами на 40-60 кусочков и переносят в колбу, куда приливают 60 мм дистиллированной воды. (Пробу мяса можно взять больше или меньше указанного веса, но отношение мяса к воде должно быть 1 : 4.) Содержимое колбы кипятят 30 минут, считая с момента закипания. Бульон пропускают через бумажный фильтр и охлаждают. Затем в пробирку наливают 3-5 мл фильтрата и добавляют 5-10 капель люголевского раствора (2 части йода, 4 части йодистого калия и 100 частей воды. При положительной реакции бульон окрашивается в вишнево- красный цвет, при отрицательной – в желтый, при сомнительной – в оранжевый. Мясо собаки, лошади, верблюда, медведя и кошки в большинстве случаев дает положительную реакцию на гликоген (экстракт из мяса кошки может окрашиваться также в оранжевый цвет. Мясо овцы, козы, крупного рогатого скота, кролика и свиньи на гликоген дает отрицательную реакцию. Показания этой реакции абсолютного значения для распознавания мяса животных различных видов не имеют. Так, например, мясо молодых животных всех видов дает положительную реакцию на гликоген, мясо же старых и больных животных, а также взятое из области головы и шеи, как правило, дает на гликоген отрицательную реакцию.
2.1.4. Реакция преципитации Сущность метода. Реакция преципитации основана на выпадении осадка под воздействием гипериммунной преципитирующей сыворотки на соответствующий антиген. Это наиболее точный метод в определении мяса животного того или другого вида. С помощью реакции преципитации можно распознать видовую принадлежность мяса, если оно подверглось посолу или тепловой обработке. Для постановки реакции необходимо иметь набор соответствующих гипериммун- ных преципитирующих сывороток против белков различных видов животных. Необходимо также иметь запас нормальных сывороток крови животных различных видов (коровы, лошади, свиньи, овцы, козы, собаки. При длительном хранении под сыворотки подслаивают хлороформ и разливают их в склянки с притертыми пробками. Предварительно устанавливают титр гипериммунных преципитирующих сывороток против белков животных и определяют их специфичность. Проверка титра сыворотки. Титр сыворотки проверяют следующим образом из нормальной сыворотки крови определенного животного делают последовательные разведения 1 : 100, 1 : 1000,1 : 5000, 1 :
10 000 и далее (в зависимости от титра, указанного на этикетке ампулы. Разведения производят в малых пробирках (удобнее с суживающимся нижним концом. К 0,9 мл нормальной сыворотки в указанных разведе- ниях подслаивают пастеровской пипеткой по 0,1 мл гипериммунной
- 84 - преципитирующей сыворотки против глобулинов определённого вида животных. Подслаивать можно одной пипеткой, начиная с минимального разведения. Специфичность гипериммунной преципитирующей сыворотки против белков животных определяют также, нос сыворотками различных животных. Преципитирующая сыворотка считается годной, если она имеет титр 1:10 000, те. осаждает белок сыворотки животного того видана который она изготовлена, в разведении 1:10 000 в течение 10 минут и не дает осадков с сыворотками животных других видов в разведениях 1:10000 в течение 1 часа. Приготовление экстракта из исследуемого мяса. Пробу исследуемого мяса освобождают от жира и соединительно-тканых волокон, мелко измельчают и помещают в пробирку туда же приливают физиологический раствор, так чтобы он покрывал мясо слоем вне- сколько миллиметров. Пробирку не встряхивают. Сырое мясо экстрагируют в течение 3 часов, вареное или засушенное - до суток. После этого экстракт отсасывают и пропускают через стерильный бумажный фильтр или центрифугируют до полной прозрачности. Концентрация белка в экстракте должна равняться приблизительно 1:1000. Это определяют следующим образом стеклянный капилляр длиной около 10 см опускают в экстракт, и последний в силу капиллярности поднимается по трубке (не до конца. Затем тот же капилляр вносят наклонно в концентрированную азотную кислоту, налитую на часовое стекло. Азотная кислота, также как и экстракт, входит в капилляр. На месте соприкосновения жидкостей в капилляре образуется осадок белка в виде белого кольца. Если осадок получается густой и массивный, то экстракт нужно развести физиологическим раствором и пробу повторить еще раз. Так поступают до тех пор, пока белое кольцо свернувшегося белка не будет едва заметным. Полное отсутствие осадка при постановке капиллярной пробы указывает, что концентрация белка в экстракте менее чем 1: 1000. С таким экстрактом реакцию ставить можно, так как титр преципитирующих сывороток выше чем 1:1000. Ход определения Готовят несколько (4-7) рядов мелких пробирок, потри пробирки в ряду. Впервые пробирки каждого ряда наливают по 0,9 мл экстракта из исследуемого мяса, во вторые - по 0,9 мл физиологического раствора ив третьи - такой же объем нормальных сывороток различных животных. Сыворотки берут в разведении 1:1000. Вовсе три пробирки первого ряда подслаивают различными пастеровскими пипетками по 0,1 мл гипериммунной сыворотки кролика против бело- ков коровы, в пробирки второго ряда - по 0,1 мл гипериммунной сыворотки кролика, преципитирующей белок лошади, в пробирки третьего ряда - по 0,1 мл гипериммунной сыворотки кролика против белков свиньи, в пробирки других рядов - по такому же количеству овечьей, козьей и собачьей сывороток. Реакцию читают на темном фоне. Положительной реакцией считается появление на месте соприкосновения жидкостей в течение первых минут после добавления гипериммунной преци- питирующей сыворотки мутно-белого кольца. Реакция будет специфической, если мутно-белое кольцо появится в течение часа после добавления к экстракту преципитирующей сыворотки. Осадок, который образуется спустя час, считается неспецифическим. Положительная реакция впервой и третьей пробирках одного ряда показывает, что исследуемое мясо принадлежит животному, которому соответствует специфичность сыворотки. Во всех остальных рядах в первых пробирках реакция должна быть отрицательной, а в третьих пробирках - положительной. Во вторых пробирках всех рядов контрольная проба с физиологическим раствором) реакция должна быть отрицательной. Например, если исследуемая вытяжка оказалась приготовленной из мяса лошади, то результат реакции во всех пробирках должен быть следующим (табл. 6):
Таблица 6 Содержание пробирок
Преципитирующие сыворотки крупного рогатого скота лошади свиньи овцы козы собаки Исследуемая вытяжка- Физиологический раствор
-
-
-
-
-
- Нормальные сыворотки Йодное число По значению этого показателя судят о преобладании в жире предельных или непредельных жирных кислот. Чем больше в жире содержится ненасыщенных кислот, тем выше его йодное число. Тугоплавкие жиры имеют низкое йодное число, легкоплавкие - высокое.
- 86 - Жиры животных разных видов значительно отличаются один от другого по значению йодного числа. Если, например, бараний жир имеет повышенное йодное число, можно предположить, что к нему добавлен легкоплавкий жир, содержащий ненасыщенные жирные кислоты (конский или собачий. Низкое йодное число, например, свиного жира, свидетельствует о добавлении к нему жира, содержащего насыщенные жирные кислоты (бараний, козий, говяжий. Для исследования предварительно готовят растворы в 500 мл
90°-ного этилового спирта растворяют 25 г кристаллического йода в таком же количестве спирта и такой же концентрации растворяют 30 г двухлористой ртути (сулемы. Растворы хранят в темных склянках и смешивают в равных количествах лишь за 1-3 суток до применения. Для анализа в коническую колбу вносят 0,6 г жира (при исследовании жидких жиров навеску следует уменьшить, добавляют 15 мл хлороформа и осторожно взбалтывают. Приливают 25 мл раствора Гюбля, закрывают притертой пробкой, смоченной раствором йодистого калия чтобы не улетучивался йод, снова осторожно взбалтывают и ставят в темное место при комнатной температуре нач. В течение этого времени колбу периодически встряхивают и наблюдают за состоянием содержимого. Если обнаружится помутнение (жир растворился не полностью, то добавляют еще 5-10 мл хлороформа. Если произойдет значительное ослабление окраски, то приливают точно отмеренное количество раствора Гюбля. По истечении вышеуказанного времени в колбу вносят 15 мл 20%-ного раствора йодистого калия и 100 мл дистиллированной воды. Содержимое титруют при постоянном взбалтывании н. раствором гипосульфита натрия до светло-желтого окрашивания. После этого добавляют 1 мл 1%-ного раствора крахмала и продолжают титрование до исчезновения окраски. Параллельно ставят контрольный опыт, в котором использую г те же реактивы, в том же количестве, но без жира. Йодное число определяют по формуле
Х=[(a-ai)Kх0,1269х100]/Н, где а - количество 0,1 н. раствора гипосульфита натрия, пошедшее на титрование контрольной пробы (без жира, мл ai - количество 0,1 н. раствора гипосульфита натрия, пошедшее на титрование раствора с навеской жира, мл К - поправка для пересчета на точный 0,1 н. раствор гипосульфита натрия
- 87 -
0,1269 - количество йода, эквивалентное 1 млн. раствора гипосульфита натрия, г Н - масса навески жира, г. Определение йодного числа протоплазматического жира, извлеченного из мышечной ткани. Этот метод может быть использован для определения видовой принадлежности мяса в случае отсутствия жировых отложений. Мышцы пропускают через мясорубку, отвешивают 250-300 г фарша в несколько бюкс и помещают в сушильный шкаф нач для удаления влаги. Высушенный фарш переносят в патрон из фильтровальной бумаги. Патрон помещают в экстракционный аппарат Соксле- таи экстрагируют эфиром в течение нескольких часов. Затем эфир с извлеченным внутритканевым жиром переливают в предварительно взвешенную колбу и осторожно выпаривают в водяной бане. После удаления эфира колбу подсушивают и взвешивают вновь. По разности между массой колбы с жиром и пустой определяют массу измельченного эфиром жира. В дальнейшем определение йодного числа проводят также, как указано выше.
2.2. Иммуноферментный анализ Наиболее перспективными при определении видовой принадлежности мяса и мясопродуктов являются методы иммунологические и ДНК-диагностики.
Иммуноферментный анализ (ИФА) или иммуноферментный метод (ИФМ) применяется в двух вариантах гистохимическом и твёр- дофазном (приложение 1,2,8, 12-20). Гистохимический вариант ИФА или иммунопероксидазный тест аналогичен РИФ стем отличием, что для постановки реакции используют антитела, меченные не флуорохромом, а ферментом, и результаты учитывают не под люминесцентным микроскопом, а под световым. Прямой гистохимический ИФА. Мазки-отпечатки материала или покровные стёкла с материалом фиксируют охлаждённым до минус
10
о
С ацетоном 10 мин, высушивают на воздухе и наносят на них 0,2–
0,3 мл иммунопероксидазного конъюгата (антитела, меченные ферментом пероксидазой) в разведении, указанном на ампуле. Инкубируют во влажной камере 1–2 ч при 37 0 С, затем 15 мин промывают физиологическим раствором, споласкивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Затем наносят субстрат и после 10 мин инкубации промывают по предыдущей схеме. Субстратом служит диаминобензи- динтетрахлорид (3,3 – ДАБ ˙4 НС, 25 мг которого растворяют в 100
- 88 - мл 0,05 М трис-буфера, имеющего рН 7,5. Непосредственно перед постановкой реакции к 25 мл этого раствора добавляют 3 мл 0,5 ной НО и используют как субстрат. Результаты учитывают при просмотре препаратов под малым увеличением светового микроскопа. Диаминобензидинтетрахлорид под действием пероксидазы разлагается до цветного продукта, который из голубого быстро становится коричневым. Контрольные препараты окрашивания не дают. Непрямой гистохимический ИФА. Для выявления видоспецифч- ного антигена используют антивидовые иммунопероксидазные конъюгаты в разведении, указанном на ампуле. Преимущество непрямого метода по сравнению с прямым, заключается в универсальности меченых антивидовых глобулинов ив большей чувствительности метода. Для выявления вида животного на фиксированные в охлаждён- ном ацетоне мазки-отпечатки наносят 0,2–0,3 мл специфической сыворотки, инкубируют 1–2 ч во влажной, камере при 37° С, промывают физраствором 5 мини высушивают на воздухе. Наносят 0,2-0,3 мл ан- тивидового иммунопероксидазного конъюгата, инкубируют при 37 Сч, промывают и высушивают, как в прямом методе, наносят несколько капель субстрата, инкубируют 5–10 мини вновь промывают, высушивают на воздухе и микроскопируют. Если в препарате имеется антиген, то он образует со специфической сывороткой комплекс антиген-антитело, к которому присоединяются антитела антивидовой сыворотки, меченные ферментом. Образуется сложный комплекс антиген-антитело-антивидовое антитело- фермент. Он выявляется нанесённым субстратом, который разлагается ферментом и образует жёлто-коричневый продукт реакции, обнаруживаемый под микроскопом, как ив прямом методе.
Твёрдофазный иммуноферментный анализ. Метод твёрдофазно- го ИФА основан на применении антител и антигенов, фиксированных на нерастворимых носителях. Широкое использование в ИФА получили полистироловые микропанели. Применение их позволяет за короткое время исследовать большое число образцов сывороток на наличие антител и другого материала на наличие специфического антигена.
Твёрдофазный ИФА успешно используется как для обнаружения специфического антигена, таки специфических антител. В твёрдофаз- ном ИФА используют как пероксидазные, таки щёлочно-фосфатазные конъюгаты. Для идентификации антигена с помощью данного метода в различных биологических жидкостях наиболее часто используют метод двойных антител, или сандвич (рис. 50,51 ). Лунки микропанелей сенсибилизируют гамма-глобулином, выделенным из специфической к исследуемому антигену сыворотки. При этом подбирают оптимальную концентрацию гамма-глобулина, при которой уровень оптической плотности позитивных образцов враз превышает уровень оптической плотности негативных образцов. Чаще всего используют концентрацию 10–30 мкг/мл.
Твёрдофазный ИФА для обнаружения антигена ставят по схеме в лунки микропанелей вносят по 0,2 мл гамма-глобулина в нужной концентрации в натрий-карбонатном буфере (рН 9,6); микропанели инкубируют 1 ч при 37 Си оставляют на ночь при 4 С утром микропанели промывают 3 раза помин калий- фосфатным буфером (рН 7,4), содержащим 0,05 % твина в лунки вносят по 0,2 мл раствора исследуемого антигена и инкубируют при 37 Сч в контрольные лунки вносят заведомо известные положительный и отрицательный антигены микропанели промывают в лунки вносят по 0,2 мл иммуноферментного конъюгата и инкубируют при 37 Сч микропанели промывают в лунки вносят по 0,2 мл раствора субстрата ортофенилендиа- мина (ОФД) или 5-аминосалициловой кислоты для пероксидазы и р- нитро-фенилфосфата для щелочной фосфатазы, инкубируют в темноте при комнатной температуре 5–30 мин реакцию останавливают добавлением 0,05 млн. Н для пероксидазы и М NaOH для щелочной фосфатазы реакцию учитывают визуально по разнице в окраске опытных и контрольных образцов или колориметрически при длине волны для пероксидазы нм, а для щелочной фосфатазы 405 нм. При использовании субстрата ОФД положительные образцы имеют оранжево-коричневую окраску, а при применении 5- аминосалициловой кислоты опытные образцы окрашиваются в интен- сивно-коричневый цвет, в то время как отрицательный контроль либо совсем не окрашен, либо окрашен в слабо-жёлтый цвет. При использовании щелочной фосфатазы образцы окрашены в жёлтый цвет. За положительный результат принимают превышение оптической плотности опытных образцов над контрольными враз. Определение антител непрямым методом твердофазного ИФА показано на рис. 50-51. Задание Ознакомиться с набором для определения видового происхождения мяса.
- 90 - Рис. 50. Схема определения антигена методом двойных антител (сандвич) –
1 2 3 4 5 6 7 8 9
в твердофазном ИФА: Рис. Схема определения антител непрямым методом твердофазного - ИФА:
1 – адсорбция в лунках специфических антител
2 - внесение исследуемого раствора, который соединяется с антителами добавление ферментомеченных специфических антител
4 – внесение субстрата и появление цветного продукта ферментативной реакции Е – субстрат.
1 - адсорбция антигена в лунках
2 - внесение исследуемого раствора
3 - внесение ферментомеченого ан- тивидового глобулина, фиксирующегося на антителах
4 – внесение субстрата и появление цветного продукта ферментативной реакции Е – субстрат.
- 91 - Материалы и оборудование. На стол выставляются испытуемая сыворотка, диагностический набор, физраствор, мерные пипетки на 1–2 мл, резиновая груша, приборы (приложение 1,2,8,12-20). Для идентификации мяса и мясных продуктов Смирнов А.М и др. в 2005 г испытали тест-системы серии ORBIT, PRIME, SOFT, PROFIT США. Производство этих наборов сертифицировано по международному стандарту ИСО-9001 (приложение 27). Тест-системы серий
ORBIT, PRIME, SOFT, PROFIT позволяют определять видовую принадлежность мяса и мясопродуктов иммунологическим методом. Принцип реакции основан на диффузии диагностических антител и испытуемого антигена из пропитанных дисков в гель. При их взаимодействии образуется полоса преципитации между противоположными дисками (метод иммунодиффузии по Оухтерлони). Постановка реакции иммунодиффузии занимает 10-20 мин. При этом в чашку с гелем, на котором подписаны зоны, пинцетом вносили соответствующие диски. Так, диск А (уже пропитанный специфичными антителами) помещали в зону А диски Pk, P, ВО (пропитанные соответствующими антигенами) - соответственно в зоны
Pk, P, ВО, и диски S (пропитанные мясным соком исследуемых образцов- в зону S. Далее чашку инкубировали в термостате при 37° Св течение суток. Результаты учитывали и оценивали визуально или с помощью флуоресцентной лампы по линии преципитации между противоположными дисками. Полученные данные подтвердили высокую специфичность и чувствительность (до 5 %) тест-систем ORBIT, PRIME,
SOFT, PROFIT (таблица 7). Таблица 7 Индикация образцов мяса методом иммунодиффузии Образец Специфические антигены Говядина Свинина Баранина Курица Говядина
+
- Свинина
-
+ Баранина
+ Мясо курицы
-
+ Говядина 50%, курица 50%
+ Говядина 80%, курица 20%
+ Говядина 95%, курица 5%
+ Говяжья печень
+
- Шницель
+
+
Биштекс
+
- Примечание «+» - положительная реакция преципитации «-» - отрицательная реакция.
- 92 -
2.3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) Цель работы – ознакомить студентов с генноинженерным методом индикации видоспецифичной ДНК животных посредством полимеразной цепной реакции. В 1985 году R.Saiki и др. впервые описали метод ферментативной амплификации ДНК in vitro. Метод получил название полимеразной цепной реакции (ПЦР; от англ. Polymerase Chain Reaction, PCR). Благодаря высокой чувствительности, специфичности, воспроизводимости и простоте ПЦР нашла широкое применение при решении задач биотехнологии, генетики, эволюции, биологии развития, судебной медицины, диагностики вирусных и генетических заболеваний. Суть метода состоит в увеличении числа копия строго определенных фрагментов молекулы ДНК в пробирке на миллионы и миллиарды раз зач в результате работы фермента тер- мостабильной ДНК-полимеразы (Taq–ДНК-полимеразы). ДНК- полимераза выдерживает многократный нагрев до 90-100 С, что даёт возможность проводить реакцию в автоматическом приборе – амплификато- ре, который способен поддерживать температуру в течение заданного времени (приложение 1). Границы амплифицируемого участка (амплификона) определяют два олиогонуклеотидных праймера (затравки. Праймеры – это отрезки одноцепочечной ДНК из 20-30 нуклеотидов. Они комплементар- ны противоположным цепям ДНК в участках, ограничивающих выбранную область ДНК, то-есть амплификон, и ориентированы 3
΄
- концами навстречу друг другу ив сторону амплифицируемой последовательности (рис. 52-53).
ПЦР основана на амплификации ДНК с помощью ДНК- полимеразы, осуществляющей синтез взаимно комплементарных цепей ДНК, начиная с двух праймеров. Праймеры комплементарны противоположным цепям ДНК в участках, ограничивающих выбранную область ДНК, и ориентированы концами навстречу друг другу ив сторону той последовательности, которую необходимо амплифицировать (рис. 52,
53). При синтезе ДНК праймеры физически встраиваются в цепь ново- синтезирующихся молекул ДНК. Из рис. 53 видно, что каждая из вновь синтезированных с помощью одного из праймеров молекул ДНК может служить матрицей для синтеза комплементарной ДНК с помощью другого праймера. Для этого надо лишь денатурировать (цепи ДНК расходятся) образовавшиеся в результате первой стадии реакции (цикл 1 на рис. 53) двухцепочной молекулы ДНК, дать возможность праймерам комплементарно присоединиться к ДНК и осуществить с помощью
ДНК-полимеразы элонгацию (синтез ДНК-достройки праймера). Схема цикла амплификации (рис. 52).
- 93 - Рис. 52. Схема ПЦР. Исходная ДНК показана сплошной линией, синтезированная ДНК — пунктирной. Количество молекул ДНК, ограниченных с обеих сторон праймерами (появляются нам цикле, возрастает экспоненциально. Количество длинных неограниченных молекул ДНК, синтезирующихся только с исходной ДНК, возрастает арифметически (однако- пия за цикл, образование таких молекул показано до го цикла.
- 94 - Рис. 53. Схема первого цикла ПЦР. Через два цикла будет 4 копии исходной молекулы ДНК-мишени, а через п циклов - 2" копий.
- 95 - Основными компонентами ПЦР являются а) фермент Taq-ДНК-полимераза; б) пара олигонуклеотидных праймеров; в) четыре типа дезоксинуклеозидтрифосфатов; г) копируемая ДНК д) ионы Mg
+2
I этап – денатурация ДНК При температуре 90-100 С происходит плавление ДНК, при этом двойная цепь ДНК разъединяется на две одиночные цепи.
II этап – отжиг праймеров. При температуре 55-65 С происходит гибридизация праймеров с одиночными цепями ДНК-матрицы.
Праймеры комплементарно соединяются с концом уникального участка цепи ДНК-матрицы и тем самым ограничивают амплификон.
III этап – элонгация или полимеризация ДНК Синтез ДНК с помощью ДНК-полимеразы (достройка праймера) и составляют суть каждого цикла ПЦР. Далее этот стандартный цикл ПЦР - плавление, отжиг, синтез- воспроизводится многократно, ив идеале количество ампли- фиконов растет в геометрической прогрессии. Продолжительность реакции определяется числом циклов, необходимых для синтеза ДНК амплификонов в количестве, достаточном для дальнейшего исследования или индикации. Индикация может быть произведена известными способами электрофорезом с окрашиванием бромистым этидием, гибридизацией с изотопно или неизотопно меченными генными зондами, непосредственным колориметрическим, флуорометрическим, радиоизотопным определением при использовании в системе ПЦР меченых предшественников синтеза нуклеиновых кислот. Вспомогательными компонентами являются буферный раствори минеральное масло. ПЦР стала технологична с началом использования термофильных ДНК-полимераз, выдерживающих многократный нагрев до 90 С что дало возможность проведения реакции в автоматическом режиме - амплификаторе (amplification - умножение, усиление) - приборе, обеспечивающем поддержку в реакционной смеси заданной температуры в течение заданного времени (приложение 1). Taq-ДНК-полимераза синтезирует цепь ДНК до 1000 пар оснований в 1 мин. Кроме того, возможности ПЦР в идентификации ДНК- и РНК еще больше возросли с выделением новой полимеразы (из термофильного микроорганизма
Thermus thermophilus), обладающей как полимеразной, таки обратно- транскриптазной активностью.
- 96 -
Праймеры для ПЦР имеют длину 20-30 нуклеотидов. Праймер должен быть комплементарен выбранному месту в матрице. Особенно жесткие требования предъявляются к комплементарности концевой части праймера, в то время как в средней и концевой части допустимы нуклеотидные замены. Чем больше нуклеотидов в праймере, тем специфичнее ПЦР; короткие праймеры часто ошибаются. Поскольку праймеры каждый раз встраиваются в ампли- фицируемые фрагменты ДНК-матрицы (амлификоны), то они в реакционной смеси ПЦР присутствуют в избытке. Как правило, праймеры для ПЦР-детекции создают на консервативных участках их ДНК, которые редко подвергаются генетическим перестройкам. Поиски таких участков осуществляют при помощи специальных компьютерных программ.
ПЦР предусматривает инкубацию исследуемых образцов при трех температурах, соответствующих трем этапам цикла амплификации- денатурации, отжигу и достройке цепей ДНК. Время инкубации и температура варьируют в зависимости от длины амплифицируемой последовательности, длины праймеров и содержания в них ГЦ-пар. Обычно время одного цикла находится в пределах 5-10 мин. Де з о кси ну кл е о з и д три фосфаты дАТФ, дТТФ, дГТФ и дЦТФ в реакционной смеси содержатся в эквивалентных концентрациях, так как избыток какого-либо из них увеличивает ложное спаривание нуклеотидов в ПЦР. Магний необходим для функционирования фермента Taq-
ДНК-полимеразы. Буфер должен обеспечивать оптимальные условия для работы фермента. Наиболее распространен трйс-НС1-буфер, который удерживает рН вовремя ПЦР между 6,8 и 7,8, содержит желатин или бычий сывороточный альбумин и неионные детергенты для стабилизации фермента. Минеральное масло наслаивается на поверхность реакционной смеси для предотвращения испарения в процессе ПЦР. Технология индентификации ДНК заключается в следующем из исследуемого материала выделяется ДНК-матрица; в пробирке смешивают ДНК, праймеры, дезоксирибонуклео- зидтрифосфаты, буфер и ДНК-полимеразу. Типичный состав и концентрации компонентов смеси ПЦР в объеме 100 мкл а) ПЦР-буфер х 10 (десятикратный) - 10 мкл
- 97 - б) раствор четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов вводе, рН 7,0
(10мМ) мкл в) праймер 1 (5нМ. в 200 мкл) – 1 - 5 мкл г) праймер 2 (5 нМ в 200 мкл) – 1 - 5 мкл д) Taq-ДНК-полимераза 5 ед/мкл - мкл e) MgCl (25 мМ); ж) амплифицируемая ДНК-матрица - не более 1 мкг на пробирку з) дистиллированная вода - до конечного объема 100 мкл. На первом этапе пробирка с инкубационной смесью нагревается до температуры денатурации ДНК (90 -100 С, при этом две цепи ДНК расходятся. Затем проба инкубируется при температуре гибридизации праймеров с ДНК-матрицей (55 - 65 Си на последнем этапе ДНК-полимераза осуществляет комплементарное достраивание нитей ДНК-матрицы с помощью дезоксирибонуклео- зидтрифосфатов (72 СВ результате проведенного цикла происходит удвоение искомого генетического материала. В следующем цикле синтез осуществляется с 4 копий, далее сит. д. до 20 - 30 циклов. В результате получают миллионы копий специфического участка ДНК вируса, бактерий, клеток крови, мышц и т.д. Индикацию амплифи- цированного генетического материала проводят одним из вышеуказанных методов. В ПЦР любая из вновь синтезированных цепей ДНК служит матрицей для синтеза молекул ДНК, соответствующих по длине и последовательности участку ДНК, выбранному для амплификации. Праймеры ориентированы таким образом, что синтез с помощью полимеразы протекает только между ними, удваивая количество копий заданного участка ДНК (такие молекулы появляются уже после второго цикла, см. рис.
52,53). Оптимальное расстояние между праймерами (длина амплифици- руемого участка) составляет 200 - 500 пар нуклеотидов. Практически удается амплифицировать фрагменты ДНК длиной до 3 - 4 тыс, хотя можно достичь и большего (до 10 тыс. пар нуклеотидов. Следовательно, теоретически за 20 циклов ПЦР можно получить амплификацию заданного участка ДНК в 2 20
, те. примерно в миллион раз. В тоже время длинные неограниченные копии ДНК могут синтезироваться только с исходных, родительских цепей ДНК, и за 20 циклов ПЦР может образоваться лишь 20 таких копий каждой из родительских цепей, это очень мало по сравнению с количеством основного продукта. Кинетика ПЦР имеет экспоненциальный характер только на начальном этапе (20 - 25 циклов, после чего начинается выход на плато (после 40 - 45 циклов) в силу истощений дезоксинуклеозидтрифос- фатов, праймеров и нарастающего температурного повреждения Taq-
- 98 -
ДНК-полимеразы, конкуренции за фермент амплификонов, когда их число начнет превышать число молекул Taq-ДНК-полимеразы. При содержании в ПЦР-пробирке около 10 молекул ДНК-матриц, как правило, достаточно 35 циклов. Продолжительность реакции зависит от числа циклов, необходимых для синтеза ДНК амплификонов в количестве, оптимальном для дальнейшего исследования или индикации. Определение принадлежности накопленных амплификонов ДНК какому-либо белку производится рядом способов электрофорезом с окрашиванием бромистым этидием; колориметрическим или флуорометрическим методом при использовании в ПЦР меченных предшественников синтеза нуклеиновых кислот ив частности, методом ДНК-зонда. В качестве исходной матрицы для ПЦР может быть использована ДНК (или кДНК, полученная с помощью предварительной обратной транскрипции РНК, выделенная как из свежеполученных клеток и тканей, таки из замороженных, высушенных или фиксированных препаратов, имеющих частично деградированные нуклеиновые кислоты, те. объекты, ранее недоступные для анализа. Такс помощью ПЦР была амплифициро- вана, клонирована и секвенирована ДНК египетской мумии, продемонстрирована возможность анализа специфических участков ДНК при наличии одного волоса, клетки, сперматозоида в целях идентификации личности и пола хозяина. Подготовка пробы материала (выделение ДНК и РНК) должна проводиться в условиях, исключающих перекрестное загрязнение исследуемых проб выделяемыми нуклеиновыми кислотами. Для исключения лож- ноположительного результата необходимо обязательное использование чистых перчаток, одноразовых пробирок и наконечников к автоматическим пипеткам, предварительной ультрафиолетовой обработки помещения и рабочих поверхностей столов и приборов. Замечательным свойством ПЦР является возможность не только амплифицировать нужную ДНК, но и вносить в нее при этом необходимые изменения. Эта возможность обусловлена тем, что, с одной стороны, праймеры физически входят в состав ДНК-продукта, ас другой - последовательность праймера, особенно вблизи его конца, может отличаться от последовательности ДНК-мишени. Праймер, содержащий на 5'- конце некомплементарный довесок длиной до 45 нуклеотидов, эффективно работает в ПЦР. Это обстоятельство открывает необъятные возможности для молекулярной биологии и генной инженерии. Для идентификации мяса и мясных продуктов Смирнов
А.М и др. в 2005 г испытали тест-системы серии SureFood (производство Германия) и ORBIT, PRIME, SOFT, PROFIT (США.
- 99 - Исследование выполняли в три стадии
1. Изоляция и очистка ДНК исследуемой пробы
2. ПЦР-амплификация фрагмента ДНК с помощью специфического биотинилированного праймера;
3. Детекция ПЦР-ампликонов в лунках ИФА-планшета с помощью специфических гибридизационных зондов.
3.1. Связывание биотинилированных продуктов ПЦР в лунках планшета с иммобилизованным стрептавидином.
3.2. Денатурирование связанных продуктов ПЦР и удаление несвязанных нитей ДНК.
3.3. Гибридизация связанных продуктов с помощью специфических меченых зондов.
3.4. Детекция гибридизационных зондов с помощью им- муносорбции антител с последующей цветной реакцией.
3.5. Измерение оптической плотности в лунках планшета при 450 нм с помощью фотометра или визуально. Благодаря короткому размеру продукта ПЦР (размер ампликона составляет 125 пар оснований) видоспецифичную ДНК можно определять не только в продовольственном сырье, но ив образцах, подвергнувшихся глубокой переработке, например в готовых пищевых продуктах, мясокостной муке, комбикормах.
Смирнов А.М и др. установили, что с помощью набора Sure-
Food® можно ускоренно и эффективно идентифицировать видоспе- цифичную ДНК крупного рогатого скота, свиньи, козы, овцы, оленя, курицы, индейки, гуся, утки, индоутки, лошади в составе продовольственного сырья, кормов и готовой пищевой продукции посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР), ДНК-гибридизации и детектирования гибридных молекул на основе иммуноферментного анализа (ИФА). На основании проведенных испытаний разработаны и утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН методические рекомендации. Достоинства ПЦР: быстрота анализа. Все процедуры ПЦР занимают 1—2 рабочих дня при параллельной обработке 10-12 образцов надежность анализа. Под этим подразумевается защищенность от ложноположительных и ложноотрицательных результатов. При аккуратной работе с образцами и реактивами, при использовании всех контролей, надежного оборудования и жестко
- 100 - стандартизированных реактивов методы диагностик вирусных инфекций, основанные на ПЦР, являются высоконадежными чувствительность анализа. Этот параметр характеризуется наименьшей концентрацией клеток или вирусных частиц в пробе, дающей положительный результат анализа, и определяется сочетанием следующих трех факторов эффективного выделения нуклеиновой кислоты возбудителя, чувствительности собственно, но ПЦР и чувствительности выбранного метода индикации. ПЦР позволяет достичь предельно возможной чувствительности от нескольких копий до одного возбудителя в пробе специфичность анализа. Под этим подразумевается выявление возбудителей конкретного вида (группы видов, рода) на фоне других вирусов и клеток организма-хозяина.С этой точки зрения возможности ПЦР-диагностикумов идеальны. Специфичность метода равна 100 %; для ПЦР-анализа пригоден любой материал, в том числе и гистологические препараты количество исследуемого материала, как правило, составляет несколько десятков микролитров; метод позволяет определить число копий возбудителя в пробе и тем самым контролировать виремию или бактериемию в процессе лечения исследуемый материал может быть дезинфицирован химической или термической обработкой в момент его забора, и, следовательно, исключается возможность инфицирования персонала в процессе проведения ПЦР; простота исполнения и возможность полной автоматизации. Задания
1 . Ознакомиться с набором ПЦР и аппаратом- амплификатором.
2. Определить видовое происхождение мяса в исследуемом материале с помощью ПЦР. Материальное обеспечение диагностикум для ПЦР, включающий все необходимые реактивы и материалы амплификатор приложение, микроцентрифуга типа Эппендорф 10-12 тыс. мин камера для электрофореза в гелях и источник напряжения до 100 В мА Вт трансиллюминатор ультрафиолетовый встряхиватель пробирок типа Эплендорф («Вортекс»); настольный микротермостат приложение 2) для пробирок типа Эппендорф; штатив для пробирок типа Эппендорф; автоматические пипетки на 1-10, 5-40, 40-200 и
- 101 -
200-1000 мкл одноразовые наконечники к автоматическим пипеткам пробирки типа Эппендорф на 1,5, 0,5 и 0,2 мл рН-метр; аналитические весы спектрофотометр или спектрофлуориметр; фотоаппарат лабораторный вакуумный насос. Примерный план занятия
1. Контрольные вопросы.
2. Объяснения преподавателя методики постановки ПЦР.
3. Демонстрация а)набора для ПЦР; б)амплификатора; в)положительных результатов ПЦР.
4. Самостоятельная работа студентов а) постановка ПЦР; б) учет результатов ПЦР.
5. Подведение итогов занятия. На отобранные для исследования продукты составляется акт отбора проб продовольственного сырья и пищевых продуктов приложение, а после проведенных исследований выписывается за- ключение-предписание об использовании продовольственного сырья и пищевых продуктов (приложение 4). Полученные результаты записываются в журнал учета бланков актов отбора проб и заключений об использовании продовольственного сырья и пищевых продуктов по результатам экспертизы (исследования) Приложение 5. Если мясо признается непригодным в пищу, то оформляется заключение ветеринарного специалиста подразделения госветнадзора о браковке непригодных в пищу мяса и субпродуктов (приложение 6 -
7) или предписание об уничтожении забракованной продукции животного происхождения (приложение 8). Перед утилизацией недоброкачественная продукция денатурируется сухой хлорной известью или раствором метиленовой синьки, после чего по предписанию подвергается утилизации. Недоброкачественная продукция утилизируется путем переработки на мясокостную муку в цехе технических фабрикатов или в биотермической яме. При этом руководствуются следующими законодательными актами Федеральный Закон № 29 О качестве и безопасности пищевых продуктов, «Ветеринарно-санитарными правилами сбора, утилизации и уничтожения биологических отходов от г. № 13-7-2/469, постановлением Правительства Российской Федерации Об утверждении Положения о проведении экспертизы некачественных и опасных продовольственного сырья и пищевых продуктов, их использовании или уничтожении от г.
№1263, приказом Департамента ветеринарии Минсельхозпрода Российской Федерации от 25.12.97 г, № 36 Об экспертизе некачественной продукции животного происхождения и порядке её использования или уничтожения, от 10 июля 1996 г №13-7-2/681» Инструкция о порядке браковки, направления на техническую утилизацию и уничтожение непригодных в пищу мяса, мясных продуктов на мясоперерабатывающих предприятиях (приложение 9-11). Результаты исследования Показатель Проба 1 Проба 2 Конфигурация туши отложение жира Цвет и структура мышечной ткани, жира, запах мяса Анатомическое строение костей и органов Строение волоса Температура плавления жира Коэффициент преломления жира Качественная реакция на гликоген Реакция преципитации Определение йодного числа
Иммуноферментный анализ Полимеразная цепная реакция Заключение
Дата Подпись преподавателя Лабораторные задания
1. Как определяют видовое происхождение мяса по органолептическими сенсорным показателям Опишите внешний вид мяса, цвет, структуру мышечной ткани, жира, запах мяса в полученном комплекте.
2. Как устанавливают видовое происхождение мяса по анатомическому строению костей и органов. Установите видовое происхождение мяса по анатомическому строению костей, органов животных в полученном комплекте и опишите их внешний вид.
3. Определите видовое происхождение мяса по костям плечевого пояса (лопатка.
4. Определите видовое происхождение мяса по костям тазового пояса.
5. Определите видовое происхождение мяса по костям плечевого пояса (лопатка.
6. Определите видовое происхождение мяса по костям первого звена конечностей (плечевая и бедренная кости.
7. Определите видовое происхождение мяса по костям второго звена конечностей (предплечье и голень.
8. Определите видовое происхождение мяса построению языка.
9. Определите видовое происхождение мяса построению легких.
10. Определите видовое происхождение мяса построению печени.
11. Определите видовое происхождение мяса построению почки.
12. Определите видовое происхождение мяса построению селезенки. Определите содержание гликогена в мясе
14. Определите видовое происхождение мяса по температуре плавления и коэффициенту преломления жира
15. Оформите акт отбора проб продовольственного сырья и пищевых продуктов (приложение 21).
16. По результатам исследования дайте заключение о видовой принадлежности мяса. Оформить его в виде заключения-предписания об использовании или браковке продовольственного сырья и пищевых продуктов (приложение 22-25).
17. Выпишите предписание об уничтожении забракованной продукции животного происхождения (приложение 26). Домашние задания
1. Следственные органы направили в лабораторию ветеринарно- санитарной экспертизы кусочки мяса животного, отобранные у гражданина А, который подозревается в браконьерстве. Какие исследования необходимо провести для того, чтоб определить видовую принадлежность мяса
2. Органами милиции на рынке задержан гражданин Б, торгующий незаклейменным мясом. Какие исследования должен провести эксперт, чтобы определить крольчатина это или кошатина
3. Для судебной экспертизы представлены внутренние органы
- 104 - животных. Необходимо определить, от какого животного они получены лошади или крупного рогатого скота
4. Для экспертизы представлена тушка животного. Необходимо установить, какому виду животного она принадлежит кролику или нутрии
5. Для экспертизы представлены а) задняя часть полутуши с крестцовой костью и проксимальным эпифизом бедренной кости б) отруб с дистальным концом лопатки и плечевой костью. Назовите отличительные признаки говядины и конины.
6. Для экспертизы представлены а) отруб мяса со средней частью лопатки б) отруб поясничной части туши. Определите баранина это или собачатина?
7. Для экспертизы представлен языки ливер от животных. Установите, чьи это органы собаки или овцы
8. Для экспертизы представлена туша животного. Определите, баранина это или собачатина?
9. Для экспертизы представлен языки ливер от животных. Определите, чьи это органы нутрии или зайца
10. Для экспертизы представлен языки ливер от животных. Определите, чьи это органы кошки или кролика
11. Для экспертизы представлена туша животного. Установите, какому виду животных она принадлежит кошке или кролику
12. Для экспертизы представлена тушка животных. Установите, какому виду животных она принадлежит кошке или нутрии
13. Для экспертизы представлен языки ливер от животных. Определите, чьи это органы нутрии или кролика
14. Для экспертизы представлен жир животного. Установите его происхождение.
15. Для экспертизы представлена кровь животного. Установите её происхождение.
16. Как готовят компоненты и ставят реакцию преципитации
17. По каким показателям жира можно судить о видовом происхождении мяса
18. Как определяют йодное число жира
19. Как готовят компоненты и ставят иммуноферментную реакцию. Расскажите ход постановки полимеразной реакции.
- 105 - Вопросы самостоятельной работы студентов по теме коллоквиума Определение видового происхождения мяса
1. Схема лимфообращения, строение лимфатических узлов у разных видов животных.
2. Топография поверхностных лимфатических узлов крупного рогатого скота.
3. Топография поверхностных лимфатических узлов лошади.
4. Топография поверхностных лимфатических узлов свиньи.
5. Схема лимфообразования, строения, особенности топографии лимфатических узлов у овцы.
6. Схема лимфообразования, строения, топография лимфатических узлов и образований, их особенности у птиц.
7. Лимфатические узлы головы крупного рогатого скота.
8. Лимфатические узлы головы лошади.
9. Лимфатические узлы головы свиньи.
10. Лимфатические узлы ливера крупного рогатого скота.
11. Лимфатические узлы ливера лошади.
12. Лимфатические узлы ливера свиньи.
13. Топография лимфатических узлов туши крупного рогатого скота.
14. Топография лимфатических узлов туши лошади.
15. Топография лимфатических узлов свиньи.
16. Топография расположения внутренних лимфоузлов крупного рогатого скота.
17. Топография расположения внутренних лимфоузлов свиньи.
18. Топография расположения внутренних лимфоузлов лошади.
19. Отличительные признаки языка, печени, селезенки, легких, почек лошади от крупного рогатого скота.
20. Отличительные признаки языка, печени, селезенки, легких, почек кролика, нутрии от кошки.
21. Отличительные признаки языка, печени, селезенки, легких, почек свиньи, овцы от собаки.
22. Отличительные признаки позвонков крупного рогатого скота от лошади.
- 106 -
23. Отличительные признаки позвонков свиньи, овцы от собаки.
24. Отличительные признаки позвонков нутрии, кролика от кошки.
25. Отличительные признаки грудной кости лошади от крупного рогатого скота.
26. Отличительные признаки грудной кости свиньи, овцы от собаки. Отличительные признаки грудной кости кролика от кошки.
28. Отличительные признаки лопатки лошади от крупного рогатого скота.
29. Отличительные признаки лопатки свиньи, овцы от собаки.
30. Отличительные признаки лопатки нутрии, кролика от кошки.
31. Отличительные признаки ребер лошади от крупного рогатого скота.
32. Отличительные признаки ребер свиньи, овцы от собаки.
33. Отличительные признаки ребер нутрии, кролика от кошки.
34. Отличительные признаки плечевой, лучевой и локтевой кости крупного рогатого скота от лошади.
35. Отличительные признаки плечевой, лучевой и локтевой кости свиньи, овцы от собаки.
36. Отличительные признаки плечевой и локтевой кости нутрии, кролика от кошки.
37. Отличительные признаки костей таза и бедренной костило- шади от крупного рогатого скота.
38. Отличительные признаки костей таза и бедренной кости свиньи, овцы от собаки.
39. Отличительные признаки костей таза и бедренной кости нутрии, кролика от кошки.
40. Отличительные признаки большеберцовой и берцовой костей лошади от крупного рогатого скота.
41. Отличительные признаки большеберцовой и берцовой костей свиньи, овцы от собаки.
42. Отличительные признаки большеберцовой и берцовой костей нутрии, кролика от кошки.
- 107 - Тесты для контроля конечного уровня знаний студентов по ветеринарно-
1 2 3 4 5 6 7 8 9