ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 30.10.2019
Просмотров: 4036
Скачиваний: 33
XT'
C.A. ОСТРОВЦОВЛ
МИКРОБИОЛОГИЯ.
ПРАКТИЧЕСКИЙ НАВЫК
НА ЗАНЯТИИ
Учебно-методическое пособие
для с1удентов лечебного и педиатрического факультетов
Гродно
ГрПИУ
2 0 1 2
I
.1
2
6
7
-
1
2
6
- - -
5 V
} . U
( 0 H
. S )
0
-
т
Министерство здравоохранения Республики Беларусь
УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ
«ГРОДНЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ
УШШЕРСИТЕТ»
Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
им. С.И. Гельберга
С.А. ОСТРОВЦОВА
МИКРОБИОЛОГИЯ.
ПРАКТИЧЕСКИЙ НАВЫК НА ЗАНЯТИИ
Учебно-методическое пособие
для студентов лечебного и педиатрического факультетов
Гродно
ГрГМУ
2012
Б и б л и о т е
1
са УО ГрГМ У
УДК
5 7 9 .6 1 (0 7 6 )
ББК
5 2 .6 4
я
73
0 - 7 6
0000011 37
Рекомендовано
Центральным
научно-методическим
советом
УО «ГрГМУ» (протокол № 5 от 3 мая 2012 г.).
Автор; доц. каф. микробиологии, вирусологии и иммунологии
им. С.И. Гельберга, канд. биолог, наук С.А. Островцова.
Рецензент; проф. каф. медицинской биологии и общей генетики,
канд. мед. наук В.П. Андреев.
Островцова, С.А.
0-76
Микробиология. Практический навык на занятии ; учебно
методическое
пособие
для
студентов
лечебного
и
педиатрического факультетов / С.А. Островцова. - Гродно :
ГрГМ У, 2 01 2 .- 120 с.
ISBN 978-985-558-056-1
Учебно-методическое пособие создано для оптимизации процесса
изучения практической части предмета микробиология на лабораторных
занятиях. Оно содержит подробное изложение учебного материала,
необходимого для освоения студентами практических навыков, а также
дополнительную информацию о классических и современных методах
микробиологических исследований и их применении в диагностике
инфекционных заболеваний.
Данное
пособие
предназначено
для
студентов
лечебного
и
педиатрического факультеля"
^ П Б 7 - 1 2 6 - . - -
я п ук а ц ы ! « Г р о д зе н с к !
fa
й
тз
р
Б1БЛ1ЯТЭКА
УДК 579
«хех1Э(1аа1нА
ISB N 978-98S-S58-056-1
© Островцова С. А., 2012
© У О «ГрГМУ», 2012
ВВЕДЕНИЕ
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов
Гродненского
государственного
медицинского
университета
лечебного и педиатрического факультетов, но также может быть
использовано и студентами других
факультетов,
изучающих
микробиологию на втором и третьем курсах. Это первое пособие,
которое создано для оптимизации процесса изучения практической
части предмета и освоения практических навыков на лабораторных
занятиях по микробиологии. Материал, представленный в пособии,
полностью соответствует объему информации и уровню освоения
навыков, зафиксированных в действующей учебной профамме.
Теперь для того, чтобы получить максимальный балл по
практическому навыку на занятии, а также на экзамене, студенту не
нужно искать и отбирать нужную информацию в различных
учебниках и практикумах, достаточно прюсто регулярно готовиться к
каждому занятию, используя данное пособие. Тем студентам, кто
хочет не только освоить практические навыки, но и получить
дополнительную информацию о классических и новых методах
микробиологических исследований и их применении в диагностике
инфекционных заболеваний, пособие поможет получить необходимые
знания, которые облегчат освоение теоретического и практического
материала и повысят шанс получать более высокие оценки по
микробиологии. Для оптимизации процесса освоения предмета при
выполнении индиввдуальной практической работы все навыки
изложены таким образом, чтобы активно вовлекать студентов в
процесс обз^ения, когда каждый из них не только слушает
объяснения и демонстрацию метода, предлагаемые преподавателем,
но и выполняет всю практическую работу на занятии самостоятельно,
проявляя все свои знания и креативность.
Данное учебно-методическое пособие построено с учетом
особенностей предмета микробиология. Оно разбито на четыре части,
которые соответствуют разделам предмета; общая микробиология,
иммунология, медицинская бактериология с основами микологии и
протозоологии и вирусология. Разделы делятся на занятия, и в
каждом занятии визуально выделены и подробно изложены
практические навыки, которые необходимо освоить. Далее следует
дополнительный материал по теме занятия. В пособии есть
иллюстрации, таблицы, схемы и фотографии микроорганизмов,
которые облегчают восприятие материала.
О Б Щ А Я М И К Р О Б И О Л О Г И Я
Занятие № 1
МИКРОБИОЛОГИЯ КАК НАУКА
Бактериоскопический метод исследования.
Простые методы окраски
Практические навыки, приобретаемые на занятии
1. Приготовление мазка из культуры, выросшей на плотной
питательной среде (агаровой культуры стафилококка).
2. Приготовление мазка из культуры, выросшей на жидкой
питательной
среде
(бульонной
культуры
кишечной
палочки).
3. Окраска мазка, приготовленного из агаровой культуры
стафилококка, метиленовым синим.
4. Окраска мазка, приготовленного из бульонной культуры
кишечной палочки, водным фуксином.
5. Микроскопия мазков с использованием иммерсионной
системы.
Приготовление мазка из культуры, выросшей на плотной
питательной среде (агаровой культуры стафилококка) и
культуры, выросшей на жидкой питательной среде
(бульонной культуры кишечной палочки)
1. Обезжирьте предметное стекло, натирая его сухим кусочком
мыла и затем тщательно протирая чистой марлей (мягкой
тканью).
2. Для проверки степени обезжиривания предметного стекла
нанесите на него каплю воды или физиологического
раствора, при этом удерживайте стекло пальцами за края.
Капля, нанесенная на правильно подготовленное стекло,
равномерно растекается и не принимает шаровидную форму.
3. В правую руку возьмите бактериологическую петлю.
4. Проведите стерилизацию петли. Для этого выполняем
следующие действия:
a) вносите петлю в пламя спиртовки - вертикально
(прокаливая до появления красного цвета);
b
) затем переведите ее в горизонтальное положение и
пронесите через пламя, перемещая по мере накаливания
рабочей части;
часть
держателя
петли
с) пронесите
металлическую
несколько раз через пламя.
5. Теперь в левую руку возьмите пробирку с культурой: ее
берут большим и указательным пальцами левой руки.
6. Пробку зажимают мизинцем правой руки, извлекают из
пробирки и оставляют в таком положении.
7. Края пробирки фламбируют, обжигая их в пламени спиртовки,
а затем в пробирку через пламя вводят стерильную петлю.
8. Остудив петлю о внутреннюю стенку пробирки, прикасаются
ею к питательной среде на границе стекла (если петля
недостаточно охлаждена, она вызывает треск и расплавляет
среду).
9. Охлажденной
петлей
прикасаются
к
культуре
микроорганизмов
на
поверхности
среды,
снимая
ею
небольшое количество культуры (либо делают забор
материала из жидкой среды).
10. Затем петлю извлекают, быстро обжигают края пробирки,
закрывают ее пробкой, проведенной через пламя, и ставят
пробирку в штатив.
11. Все описанные действия производят только вблизи пламени
спиртовки.
12. Культуру вносят петлей в каплю физиологического раствора
или воды на стекле и распределяют равномерно круговыми
движениями по площади стекла, делая тонкий мазок в виде
небольшого овала диаметром около 1,0-1,5 см, затем петлю
обжигают._______
-ч.
13. Если культура выращена в жидкой среде, физиологический
раствор на предметное стекло наносить не следует. В этом
случае на середину обезжиренного предметного стекла с
помощью петли помещают каплю культуры и готовят мазок
так же, как описано в п. 12.
14.После приготовления мазка проведите стерилизацию петли,
обжигая в пламени, и поставьте в штатив.
15.Мазок необходимо
полностью высушить
над пламенем
спиртовки при легком подогревании. Во время подсушивания
стекло удерживают за края большим и указательным
пальцами мазком вверх.
16. Высушенный мазок необходимо зафиксировать (в пламени
спиртовки) для того, чтобы убить и закрепить бактерии на
стекле, предотвратив их смывание в процессе окраски.
Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители, а
также не представляют опасности при работе.
17. Предметное
стекло
берут
пинцетом
или
большим
и
указательным пальцами правой руки мазком вверх и
троекратно проводят через наиболее горячую часть пламени
спиртовки. Фиксация этим способом продолжается около 5-6
секунд, а действие пламени - 2 секунды.
Простые методы окраски
Простые методы окраски позволяют определить наличие
бактерий в препарате, их форму, размеры и взаиморасположение
клеток (организация в мазке). Для окраски этими методами
используют,
как
правило,
один
краситель,
позволяющий
отличить частицы от неокрашенного фона.
Алгоритм окраски бактерий с использованием простых
методов
Окраска мазка, приготовленного из агаровой культуры
стафилококка, метиленовым синим и мазка, приготовленного
из бульонной культуры кишечной палочки, водным фуксином
1. Фиксированный
препарат
помещают
мазком
вверх
на
подставку.
2. После охлаждения предметного стекла на всю поверхность
мазка пипеткой наносят 1-2 капли водно-спиртового раствора
метиленового синего (для окраски стафилококка) или фуксина
Пфейффера (для окраски кишечной палочки).
3. Фуксином Пфейффера (водный фуксин) окрашивают 1-2
минуты, метиленовым синим - 3-5 минут.
4. После окраски краситель сливают, промывают препарат водой.
5. Просушивают препарат между листками фильтровальной
бумаги.
6. Микроскопируют
с
использованием
иммерсионного
объектива.
Раствор метиленового синего окрашивает микроорганизмы в
синий цвет.
Водный раствор фуксина окрашивает микроорганизмы в
красный цвет.
Микроскопия мазков с использованием
иммерсионной системы
1. Перед началом работы проверьте исправность микроскопа и
чистоту оптики.
2. Поднимите конденсор (в электрическом микроскопе этот этап
отсутствует),
приподнимите
тубус
микроскопа,
используя
макрометрический винт.
3. Установите объектив малого увеличения (8х).
4. Включите лампу (источник света для микроскопирования).
5. Вращая зеркало, отрегулируйте освещение так, чтобы все поле
зрения бьшо освещено равномерно и ярко.
6. При работе с электрическим микроскопом нужно просто
включить встроенную в основание микроскопа лампу.
1. Наклонный тубус.
2. Тубусодержатель.
3. Окуляр.
4. Конденсор.
5. Объективы.
6. Револьвер объективов.'
7. Рукоятка макрометрического
винта.
8. Рукоятка микрометрического
винта.
9. Предметный столик.
10.Основание микроскопа.
Рис.1.
Устройство светового
микроскопа