ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 30.10.2019
Просмотров: 3968
Скачиваний: 33
для его закрепления).
2. Учёт реакции гемагглютинации (повторение навыка для его
закрепления).
3. Учёт реакции торможения гемагглютинации (повторение
навыка для его закрепления).
4. Постановка
и
учёт
реакции
связывания
комплемента
(повторение навыка для его закрепления).
5. Иммунопрепараты (повторение навыка для его закрепления).
В постмортальной экспресс-диагностике
бешенства
обычно
применяют вирусоскопический метод.
Метод основан на
цитопатическом действии вируса на клетки головного мозга. В
пирамидальных
клетках
обнаруживают
эозинофильные
включения (тельца Бабеша-Негри), локализованные в цитоплазме
в непосредственной близости от ядра. Включения образованы
вирусными
нуклеокапсидами,
которые
скапливаются
в
цитоплазме из-за затрудненного созревания вирионов в нервных
клетках.
Окраску
включений
обычно
производят
с
использованием метода Манну или по Романовскому-Гимзе.
Недостатком метода является то, что получить материал для его
проведения можно только после смерти больного. Прижизненная
диагностика
-
вьщеление
вируса
из
слюны
путем
внутримозгового заражения белых мышей или кроликов. У
животных развиваются параличи, и они погибают. Мозг
погибшего животного исследуется вирусоскопическим методом
на наличие включений.
Занятие № 34
Д Н К -ГЕ Н О М Н Ы Е ВИ РУ СЫ
Вирусологическая диагностика заболеваний, вызываемых
ВПГ,
ветряной оспы, инфекционного мононуклеоза,
аденовирусных инфекций
Практические навыки, приобретаемые на занятии
1. Учёт реакции непрямой гемагглютинации (повторение навыка
для его закрепления).
2. Учёт реакции гемагглютинации (повторение навыка для его
108
закрепления).
3. Учёт реакции торможения гемагглютинации (повторение
навыка для его закрепления).
4. Постановка
и
учёт
реакции
связывания
комплемента
(повторение навыка для его закрепления).
5. Иммунопрепараты (повторение навыка для его закрепления).
В экспресс-диагностике
герпеса
(В П П
и 2) часто
используют вирусоскопический метод: производят окрашивание
патологического материала (содержимое пузьфьков, соскобы с
роговицы, слюна) по Романовскому-Гимзе.
В препаратах
вьивляют гигантские многоядерные клетки с внутриядерными
включениями. Для накопления и выделения вируса используют
культуру клеток либо куриные эмбрионы. В зараженной культуре
клеток
наблюдают
образование
бляшек
и
характерный
цитопатический эффект. На хорион-аллантоисной оболочке
куриных эмбрионов (при нанесении на нее вируссодержащего
материала) - бляшки.
Окончательно
вирус
идентифицируют
в
PH
цитопатического
действия
с
использованием
противогерпетических иммунных сывороток, а также в РИФ. При
серологической диагностике для выявления свежих случаев
заболевания путем подсчета титра антител в сыворотке пациента
важно помнить об использовании метода парных сывороток (в
связи с почти поголовным вирусоносительством ВПГ 1). С
парными сыворотками обычно ставится РСК, РИФ, либо ИФА.
Диагностика
инфекционного мононуклеоза
- заболевания,
которое вызывает ВЭБ, основана на способности вируса
поражать
иммунные
клетки
с
образованием
атипичных
лимфоцитов (рис.38) и генерировать в организме человека
продукцию
большого
количества
разнообразных
неспецифических аутоантител (составляют до 10% всех антител
сыворотки
крови),
которые
называют
гетерофильными
антителами Пауля-Буннеля.
Они относятся к классу М (IgM) и не
обладают специфичностью к ВЭБ. Скриниговым тестом в
диагностике заболевания является агглютинация на стекле, затем
ставится РА для определения титра антител, титр 1:224 является
подтверждением диагноза.
109
Рис.38.
Нормальные лимфоциты (а) и атипичные лимфоциты
(б) - результат ВЭБ-инфекции
Занятие № 35
ВИРУСЫ ГЕПАТИТОВ. ОНКОГЕННЫЕ ВИРУСЫ
Вирусологическая диагностика вирусных гепатитов А, В, С,
D, Е, G и посттрансфузвонного гепатита
Практические навыки, приобретаемые на занятии
1. Учёт реащ ии непрямой гемагглютинации (повторение навыка
для его закрепления).
2. Учёт реакции гемагглютинации (повторение навыка для его
закрепления).
3. Учёт реакции торможения гемагглютинации (повторение
навыка для его закрепления).
4. Постановка
и
учёт
реакции
связывания
комплемента
(повторение навыка для его закрепления).
5. Иммунопрепараты (повторение навыка для его закрепления).
В
настоящее
время
наиболее
доступным
методом
диагностики
гепатита А
является ИФА, который используют для
выявления антител к вирусу в сыворотке больного. Диагностика
гепатита В (особенно ранняя) основана на определении наличия
HBs-антигена вируса в крови, поскольку его содержание в сотни,
а иногда и тысячи раз выше, чем содержание зрелых вирионов.
Обычно применяют реакцию непрямой гемагглютинации, в
которой эритроциты сенсибилизируют (нагружают) антителами к
ПО
вирусу. Серодиагностику проводят, определяя титр антител к
HBs-антигену вируса в РСК, ИФА и др.
Занятие № 36
МЕДЛЕННЫЕ ИНФЕКЦИИ. ЬСЛИНИЧЕС1САЯ
МИ1СРОБИОЛОГИЯ
Методы диагностики дисбактериоза, оппортунистических
инфекций, бактериемии и сепсиса, внутрибольничных
инфекций
Практические навыки, приобретаемые на занятии
1. Студент должен знать алгоритм диагностики дисбактериоза
кишечника: уметь объяснить технику подготовки серийных
(десятикратных)
разведений
испражнений
и
засева
на
специальные
среды
для
культивирования
кишечной
микрофлоры.
Алгоритм подготовки серийных разведений испражнений и
засева на специальные среды для культивирования
кишечной микрофлоры
Диагностика дисбактериоза кишечника включает
подсчет
числа
жизнеспособных
бактерий
-
представителей
нормальной кишечной микрофлоры в единице объема
патологического материала
(т.е. титра различных видов
бактерий - сочленов кишечного микробиоценоза). Для этого
необходимо
приготовить
разведения
патологического
материала
- фекалий в буферном растворе, и произвести высев
разведенного материала на чашки Петри. Для приготовления
разведений используют стерильные пробирки с уже добавленным
в них разбавителем (обычно используют стерильный буферный
раствор или воду). Лучше всего в данном случае подходят
пробирки диаметром 18 мм без ободков, которые закрываются
легко надеваемыми колпачками, с тем, чтобы ими можно бьшо
манипулировать одной рукой (открывать и закрывать мизинцем
той руки, в которой находится бактериологическая петля).
Обычно готовят десятикратные разведения следующим
образом:
111
1. Первое разведение фекалий в десять раз (1:10 или 10'*)
получают, добавляя 0.1 мл фекалий к 0.9 мл буфера в
первой пробирке и тщательно перемешивая содержимое.
2. Следующее разведение (1:100 или 10'^) готовят, перенося
0.1 мл содержимого из первой пробирки во вторую,
содержащую 0.9 мл буфера, перемешивают и затем
отбирают 0.1 мл для следующего разведения (рис.38) и так
до 10'” разведения.
Рис.39. Схема подготовки серийных (десятикратных)
разведений испражнений и их засева на специальные среды для
культивирования кишечной микрофлоры
3. После того, как все необходимые разведения приготовлены,
производят высев из каждой проб1ирки на чашки Петри со
специальными
питательными
средами,
которые
используются для выращивания кишечной микрофлоры.
Для засева стерильной пипеткой отбирают 0.1 мл из
каждого
разведения
и
наносят
на
поверхность
агаризованной питательной среды в чашку Петри и с
помощью стерильного шпателя распределяют материал по
112
поверхности, пока он не впитается в агар. Для засева из
каждого разведения используют отдельную чашку со
средой. Чашки с посевами помещают вверх дном в
термостат и культивируют для получения видимого роста.
4. Для вычисления титра используют только чашки, где
наблюдается рост в виде изолированных колоний. Обычно
для учета берут те чашки, где выросло от 30 до 300 колоний.
5. Титр вычисляют, умножая число вьфосших на чашке
колоний на степень разведения и на 10. Например, если на
чашке, засеянной из 10 "^разведения выросло 70 колоний, то
количество живых клеток в фекалиях (их титр) будет
составлять ТОхЮ'* х10=7.0 х 10®.
Ориентировочно титр можно вычислять просто по
максимальному разведению фекалий, высев из которого
дает видимый рост на чашках с питательной средой.
Для приготовления каждого из разведений нужно
использовать
отдельную
стерильную
пипетку
или
специальный наконечник, если разведения выполняют с
использованием автоматической пипетки. Пренебрежение
этой предосторожностью может привести к получению
ошибочного
результата,
приблизительно
в
100
раз
превышающего
истинное
количество
бактерий
в
соответствующем
разведении.
Причина ошибки - в
оседании части бактериальных клеток на стенках пипетки, в
результате чего не все они удаляются из пипетки при
каждом разведении. Часть остается на стенках и попадает в
последующие разведения.
В И РУ С О Л О ГИ Я
Перечень практических навыков по вирусологии
1. Учёт реакции непрямой гемагглютинации.
2. Учёт реакции гемагглютинации.
3. Учёт реакции торможения гемагглютинации.
4. Алгоритм
диагностики
дисбактериоза
кишечника:
техника
подготовки
серийных
(десятикратных)
разведений испражнений и засева на специальные среды
для культивирования кишечной микрофлоры.
113
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная:
1. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология,
иммунология: Учебник / Л.Б. Борисов [и др.] - М.: Медицина,
2 0 0 2 .-7 3 6 с.
2. Борисов, Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по
микробиологии / Под ред. Л.Б. Борисова, 1994. - 256 с.
3. Воробьев, А.А. Микробиология: Учебник / А.А. Воробьев [и
д р .]- М ., 1 9 9 8 .-3 3 6 с.
4. Воробьев, А.А. Атлас по медицинской микробиологии,
вирусологии и иммунологии: учебное пособие для студентов
медицинских вузов/А.А.
Воробьев, А.С.
Быков - М.:
Медицинское информационное агентство, 2003. - 236 с.
5. Жмакин, А.И. Общая микробиология: учебное пособие/ А.И.
Жмакин, В.М. Шейбак, С.А. Островцова. - Гродно: ГрГМУ,
2 0 0 9 -1 6 0 с.
6. Коротяев, А.И. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология/А.И. Коротяев, С.А. Бабичев - М.: Специальная
литература, 1998. - 592 с.
7. Поздеев, O.K. Медицинская микробиология /под ред. В.И.
Покровского, М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2001. - 1183 с.
8. Павлович, С.А. Медицинская микробиология. Практикум/С.А.
Павлович, К.Д. Пяткин. 1993. - 200 с.
9. Покровский, В.И. Инфекционные болезни и эпидемиология/
В.И. Покровский [и др.] - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 832 с.
Дополнительная:
1. Воробьев, А.А. Медицинская и санитарная микробиология:
учебное пособие для студентов высших медицинских учебных
заведений/А.А. Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков -
М.: Издательский центр «Академия», 2003. - 464 с.
2. Новиков, Д.К. Медицинская иммунология Учебник / Д.А.
Новиков - Мн., Выш. Шк., 2005. - 301 с.
3. Павлович,
С.А.
Микробиология
с
вирусологией
и
иммунологией: учебное пособие / С.А. Павлович. - Мн.: Выш.
шк., 2005. - 799 с.
4. Ройт, А. Иммунология. / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. Пер.
с англ. - М.: Мир, 2000. - 592 с.
114
С О Д Е Р Ж А Н И Е
I. МИКРОБИОЛОГИЯ КАК Н А У К А .................................................................4
Приготовление мазка из культуры, выросшей на плотной питательной
среде (агаровой культуры стафилококка).......................................................... 4
Приготовление мазка из культуры, выросшей на жидкой питательной
среде (бульонной культуры кишечной палочки)............................................ 4
Окраска мазка, приготовленного из агаровой культуры стафилококка,
Окраска мазка, приготовленного из бульонной культуры кишечной
Микроскопия мазков с использованием иммерсионной системы.....7
II. МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ
III. МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ
КЛЕТКИ (ПРОДОЛЖЕНИЕ). ОСОБЕННОСТИ МОРФОЛОГИИ
АКТИНОМИЦЕТОВ, СПИРОХЕТ, РИККЕТСИЙ, ХЛАМ ИДИЙ,
МИКОПЛАЗМ . ОКРАСКА ПО ЦИЛЮ -НИЛЬСЕНУ..................................13
Окраска мазка по Ц илю -Н ильсену................................................................ 13
Идентификация по мазку дрожжей и дрожжеподобны х грибков.....16
IV. ФИЗИОЛОГИЯ ПРОКАРИОТ. ОКРАСКА ПО Н ЕЙ СС ЕРУ ....... Г.... 16
Идентификация по мазку коринебактерий.................................................17
V . ФИЗИОЛОГИЯ ПРОКАРИОТ (ПРОДОЛЖ ЕНИЕ). БАКТЕРИОФАГИ.
КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ М ЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. ФАГОТИПИРОВАНИЕ
Засев патологического материала на пластинчатый М ПА петлей с
целью получения отдельных (изолированных) колоний............................. 18
Пересев бактфиальной культуры со скошенного МПА на среду Г иса......25
115
VI. ГЕНЕТИКА БАКТЕРИЙ. ИЗУЧЕНИЕ БАКТЕРИЙ В Ж ИВОМ
О бнаружение бактерий в препарате «раздавленная капля».................33
VII. ЭКОЛОГИЯ М ИКРООРГАНИЗМОВ. ИЗУЧЕНИЕ МИКРОФЛОРЫ
VIII. ОСНОВЫ УЧЕНИЯ ОБ ИНФЕКЦИИ. БИОЛОГИЧЕСКИЙ
Определение вирулентности бактериальной культуры по косвенным
признакам (наличие гемолитической активности, наличие лецитиназной
активности, наличие плазмокоагулазной активности).................................. 36
IX..МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ХИМИОТЕРАПИИ
БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ К А НТИБИОТИКАМ .................... 39
М етод дисков для определения устойчивости бактериальной культуры
М етод серийных разведений для определения устойчивости
бактериальной культуры к антибиотикам (алгоритм проведения,
X. ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО ОБЩЕЙ МИКРОБИОЛОГИИ..................42
Перечень практических навыков по общ ей микробиологии............... 42
XI. ИММУНОЛОГИЯ КАК НАУКА. ЕСТЕСТВЕННЫЙ ИММУНИТЕТ.
ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ Ф А ГО Ц И Т О В ......... 43
Определение титра лизоцима в слюне (алгоритм проведения и оценка
Вычисление фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса в готовых
препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе........................................44
XII. ИМ М УННАЯ СИСТЕМ А ОРГАНИЗМ А ЧЕЛОВЕКА.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ СИСТЕМЫ КОМ ПЛЕМ ЕНТА...........47
О пределение активности системы комплемента (алгоритм проведения
XIII. КЛЕТОЧНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ. АНТИГЕНЫ.
ПЛАСТИНЧАТАЯ РЕАКЦИЯ АГГЛЮ ТИ НАЦИ И..................................... 47
116
Постановка и учет пластинчатой реакции агглютинации (РА)
X IV . ГУМОРАЛЬНЫ Й ИММУННЫЙ ОТВЕТ. ИММУНОГЛОБУЛИНЫ.
ОБЪЕМНАЯ РЕАКЦИЯ А ГГЛ Ю ТИ Н А Ц И И .................................................49
Постановка и учет объемной реакции агглютинации для
X V ..АЛЛЕРГИЯ (ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ). РЕАКЦИЯ
XVI. ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ.
ОСОБЕННОСТИ ТРАНСПЛАНТАЦИОННОГО И
ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ИММУНИТЕТА. РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ
КОМПЛЕМЕНТА. ОЦЕНКА ИММУННОГО С ТА ТУ С А ..........................55
Постановка и учёт реакции связывания комплемента...........................55
Расшифровка показателей им м уноф ам м ы ................................................59
XVII. ИММУНОПРОФИЛАКТИКА И ИММУНОТЕРАПИЯ
ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ. ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ
ИММУНИТЕТА. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ С
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТКИ. ПОСТАНОВКА ПРЯМОЙ И
НЕПРЯМОЙ Р И Ф ...................................................................................................... 60
Учёт реакции иммунофенотипирования лимфоцитов...........................60
XVIII. ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО ИМ М УНОЛОГИИ................................64
Перечень практических навыков по иммунологии.................................64
XIX..СТАФИЛОКОККИ. СТРЕПТОКОККИ. НЕЙ ССЕРИ И .................... 66
Выявление в мазке из уретрального гноя гонококка или в мазке и з
X X . КИШ ЕЧНАЯ ПАЛОЧКА. ШИГЕЛЛЫ. САЛЬМ ОНЕЛЛЫ .............. 68
Дифференциация лактозопозитивных и лактозонегативных
колоний на дифференциально-диагностических средах (Э ндо,
X X I. УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫ Е ЭНТЕРОБАКТЕРИИ.
ПСЕВДОМ ОНАДЫ . КАМ ПИЛ ОБ АКТЕРЫ. ГЕЛИКОБАКТЕР............. 70
Засев скошенного агара по Щ укевичу......................................................... 71
117