ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 31.10.2019
Просмотров: 720
Скачиваний: 1
МЛФд. Занятие № 23
МДФд-23А. Основные положения
Классификация микобактерий.
Микобактерии относятся к порядку Actinomycetales, где в рамках семейства
Mycobacteriaceae формируют род Mycobacterium.
Основные группы микобактерий.
Культивируемые на искусственных питательных средах микобактерии делятся на две ос-
новные подгруппы: быстрорастущие (формирующие видимый рост за неделю) и медленно-
растущие (которым для формирования видимого роста нужно времени больше, чем неделя).
По способности образовывать пигмент быстрорастущие микобактерии делятся на нехромо-
генные, лишенные такой способности, и обладающие способностью к пигментообразова-
нию. Медленнорастущие микобактерии также делятся на нехромогенные и хромогенные.
Все они определяются как условно-патогенные, или атипичные, микобактерии. К патоген-
ным микобактериям относится третья подгруппа медленнорастущих микобактерий, в кото-
рую выделены возбудители туберкулеза, а также отдельная (наравне с культивируемыми
микобактериями) группа – некультивируемые микобактерии, включающая в себя единст-
венный вид: M.leprae.
Отличия микобактерий от других прокариот.
Микобактерии – особая группа прокариот, отличающаяся от остальных бактерий своей ки-
слото-, спирто- и щелочеустойчивостью, высоким содержанием липидов в клеточной стен-
ке, очень медленных ростом.
Кислотоустойчивость микобактерий.
Высокое содержание липидов в клеточной стенке обусловливает окрашивание микобакте-
рий по Цилю-Нильсену в красный цвет.
Возбудители туберкулѐза.
Возбудителями туберкулеза у человека являются три вида: M.tuberculosis (основной),
M.bovis и M.africanum.
«Палочка Коха»: морфологические свойства.
«Палочка Коха» (собирательный термин, часто используемый для обозначения возбудителя
туберкулеза) – это палочка, обладающая большим полиморфизмом, особенно – в организме
больных под влиянием лечебных препаратов.
«Палочка Коха»: культуральные свойства.
Палочка Коха имеет сложные питательные потребности. На жидких средах вырастает за не-
делю в виде морщинистой пленки, на плотных – в течение 2-4 недель, формируя R-формы
колоний (похожие на бородавки или цветную капусту) с желтым пигментом. Лучшей сре-
дой для ее выделения считается свернутая среда Левенштейна-Иенсена.
«Палочка Коха»: биохимические свойства.
Единственный тест, используемый для идентификации возбудителей туберкулеза и осно-
ванный на их биохимических свойствах – ниациноваяпроба.
«Палочка Коха»: серологические свойства.
Антигенами палочки Коха являются туберкулопротеин, полисахариды, фосфатиды, корд-
фактор.
«Палочка Коха»: факторы вирулентности.
К факторам вирулентности палочки Коха относятся сульфатиды (серосодержащие глико-
протеиды), корд-фактор (гликолипид, располагающийся на поверхности и в толще клеточ-
ной стенки), липиды и белки.
«Палочка Коха»: характеристика факторов вирулентности.
Сульфатиды снижают активность фагоцитов, ингибируя в них фагосомо-лизосомальное
слияние.Корд-фактор – главный фактор патогенности возбудителей туберкулеза, он пора-
жает мембраны митохондрий, блокируя в них процессы окислительного фосфорилирова-
ния. Липиды туберкулезной палочки оказывают повреждающее действие на ткани макроор-
МДФд. Занятие № 23
- 2 -
ганизма.Токсические липиды палочки Коха состоят из нейтральных жиров, восков, стери-
нов, фосфатидов, жирных кислот, корд-фактора.Белки палочки Коха (составляют основу
туберкулина) вызывают сенсибилизацию организма, но, наряду с этим, оказывают еще и
повреждающее действие на ткани.
«Палочка Коха»: устойчивость во внешней среде.
Возбудители туберкулеза устойчивы во внешней среде. При кипячении погибают через 5
минут. Химическиедезинфектанты по отношению к микобактериям малоэффективны. Ту-
беркулезная палочка способна вырабатывать устойчивость ко многим антибактериальным
средствам.
Туберкулѐз: источник инфекции и механизм (пути) передачи.
Источником инфекции при туберкулезе является больной человек, реже – животное. Ос-
новной механизм передачи аэрозольный (чаще – воздушно-пылевой).
Туберкулѐз: общая характеристика болезни.
Туберкулез – это инфекционное заболевание человека и животных, характеризующееся на-
клонностью к хроническому течению и образованием специфических воспалительных из-
менений (туберкулом). Туберкулезная палочка может поражать любой орган и любую
ткань.
Туберкулѐз: взаимодействия туберкулѐзной палочки с организмом человека.
Входными воротами инфекции служат дыхательные пути (чаще всего), любые слизистые
оболочки и любой поврежденный участок кожи. Из ворот инфекции фагоцитами туберку-
лезные палочки доставляются в региональные лимфатические узлы. При этом у инфициро-
ванного человека формируется так называемый первичный туберкулезный комплекс: гра-
нулема в месте внедрения возбудителя + воспалительный процесс в региональных лимфа-
тических узлах + сенсибилизация организма. При доброкачественном течении гранулема
кальцифицируется и рубцуется, а у человека формируется противотуберкулезный иммуни-
тет (но возбудитель в гранулеме сохраняется). При действии неблагоприятных факторов,
снижающих антиинфекционную резистентность организма человека, происходит гемато-
генная генерализация процесса с образованием множественных очагов, склонных к распаду.
Инфекционная гранулѐма (бугорок) при туберкулѐзе: место образования.
Инфекционная гранулѐма образуется в месте внедрения возбудителя и является следствием
защитной реакции организма, направленной на локализацию возбудителя в месте внедре-
ния.
Инфекционная гранулѐма (бугорок) при туберкулѐзе: состав.
В центре ее находятся гигантские клетки Пирогова-Лангганса с множеством ядер, именно в
этих клетках и находятся туберкулезные палочки. Центр гранулемы окружен эпителиоид-
ными клетками, составляющими главную ее массу. По периферии располагаются лимфоид-
ные клетки.
Инфекционная гранулѐма (бугорок) при туберкулѐзе: возможные исходы.
При неблагоприятном течении процесса инфекционная гранулема может увеличиваться и
подвергаться творожистому (казеозному) распаду.При благоприятном течении процесса
инфекционная гранулема окружается соединительнотканной капсулой, сморщивается и
пропитывается солями кальция (туберкулезная палочка в ней сохраняется).
Цели постановки туберкулиновой пробы.
У детей туберкулиновая проба может иметь диагностическую ценность (а именно, у детей,
не вакцинированных БЦЖ). У взрослых туберкулиновые пробы ставятся с целью определе-
ния инфицированности, отбора контингента для ревакцинации, контроля эффективности
вакцинации, а также для оценки течения туберкулезного процесса.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: общая схема.
Патологическим материал при микробиологической диагностике туберкулеза забирается из
пораженного органа (при туберкулезе легких, наиболее часто встречающейся форме этой
инфекции, берется мокрота). Патологический материал микроскопируется (используется
окраска по Цилю-Нильсену и окраска флуоресцентным красителем аурамином) и, после об-
работки (для избавления от сопутствующей микрофлоры) кислотой и последующей нейтра-
лизацией щелочью используется для выделения чистой культуры и для заражения морской
МДФд. Занятие № 23
- 3 -
свинки. Выделенная чистая культура идентифицируется до вида и тестируется на предмет
чувствительности к лечебным препаратам. Морская свинка в положительном случае забо-
левает и погибает. Наличие в патологическом материале возбудителей туберкулеза можно
выявить и с помощью ПЦР.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: используемые методы.
Таким образом, при микробиологической диагностике туберкулеза используются микро-
скопический, культуральный, биологический, молекулярно-генетический методы.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: микроскопический метод диагностики.
Туберкулез – одна из немногих инфекций, диагноз которой можно поставить, используя
микроскопический метод. Однако, концентрация туберкулезных палочек в патологическом
материале невелика, поэтому прямая микроскопия может дать ложноотрицательный ре-
зультат. Предпочтительней пользоваться методами обогащения (гомогенизацией, флотаци-
ей) – для повышения концентрации в полях зрения туберкулезных палочек. Еще более эф-
фективна флуоресцентная микроскопия с обработкой мазка флуоресцентной краской, чаще
всего – аурамином.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: методы обогащения мазка.
Метод гомогенизации заключается в том, что суточная доза мокроты разбавляется равным
объемом раствора едкого натра, энергично встряхивается, нейтрализуется кислотой, цен-
трифугируется и осадок используется для приготовления мазка. При осуществлении мето-
дафлотации гомогенизированная мокрота прогревается на водяной бане, после чего к ней
добавляют ксилол, встряхивают и отстаивают при комнатной температуре– мазок делается
из формируемого в результате отстаивания пенообразного слоя. Во всех случаях при мик-
роскопической диагностике туберкулеза готовят так называемый «толстый мазок»: мокроту
наносят на предметное стекло в несколько слоев, каждый раз дожидаясь, пока предыдущий
слой подсохнет.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза:подготовка материала для обнаружения микобак-
терий культуральным или биологическим методом.
При использовании в диагностике туберкулеза культурального, а также биологического ме-
тодов диагностики, патологический материал, взятый из нестерильных биотопов организма,
предварительно (т.е. перед засевом на питательную среду или перед введением лаборатор-
ному животному) обрабатывают кислотой, затем нейтрализуют щелочью и тщательно про-
мывают водой.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: культуральный метод.
При культуральном методе диагностики туберкулеза патологический материал засевается
на среду Левенштейна-Йенсена и культивируется на протяжении от 2 до 12 недель. Вырос-
шая культура идентифицируется до вида и определяется еѐ чувствительность к туберкуло-
статическим препаратам.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: биологический метод.
При биологическом методе диагностики туберкулеза патологический материала вводится
морской свинке или подкожно в паховую область или внутрибрюшинно. В положительном
случае у животного сначала развиваетсяразвивается лимфаденит, а затем – положительная
реакция на туберкулин. Погибает морская свинка через 1-2 месяца после начала экспери-
мента. Биологический метод в настоящее время менее информативен, поскольку изониази-
дустойчивые штаммы туберкулезной палочки снижают свою вирулентность для морской
свинки.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: ускоренный метод выделения туберкулѐзной па-
лочки.
Существует ускоренный метод выделения туберкулезной палочки (метод Прайса), осущест-
вляемый следующим образом. Готовятся «толстые мазки» из патологического материала на
узких предметных стеклах. Мазки обрабатываются серной кислотой, нейтрализуются ще-
лочным раствором, промываются водой. Затем помещают во флаконы с гемолизированной
цитратной кровью в разведении. Через несколько дней культивирования (обычно каждый
два дня по одному стеклу) мазки достают, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопи-
руют. Этот метод позволяет не только выявить в мокроте микобактерии, но и определить их
вирулентность: вирулентные располагаются в виде «лисьих хвостов» (вследствие наличия в
них корд-фактора), невирулентные микобактерии располагаются беспорядочно.
МДФд. Занятие № 23
- 4 -
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: дифференциация M. tuberculosis отM. bovis.
Для отличия M.tuberculosis (человеческого типа возбудителя туберкулеза) от M.bovis (бычь-
его типа возбудителя туберкулеза) используют ниациновую пробу и биопробу. Нациновая
проба осуществляется следующим образом: к культуре микобактерий добавляются
растворыKCN и хлорамина, появляющаяся через несколько минут ярко-желтая окраска
свидетельствует о том, что культура принадлежит к M.tuberculosis, если цвет не меняется –
культура принадлежит M.bovis. Для дифференциации с помощью биопробы культурой за-
ражают одновременно морскую свинку и кролика. Морская свинка заболеет в любом случае
– она служит индикатором наличия в патологическом материале туберкулезной палочки
любого вида, а кролик заболеет лишь в случае заражения его M.bovis.
Микробиологическая диагностика туберкулѐза: выявление L-форм туберкулѐзной палочки.
Во-первых, существуют специальные флюоресцирующие диагностические сыворотки про-
тив специфических антигенов L-форм палочки Коха (т.е. их можно выявить с помощью
РИФ). Во-вторых, проводят засев патологического материала в специальную полужидкую
среду. В третьих, используют многократные пассажи на морских свинках.
Условно-патогенные микобактерии: классификация.
Условно-патогенные («атипичные») микобактерииклассифицируются на четыре группы.
Первые три группы включают в себя медленнорастущие виды, в свою очередь классифици-
руемые в зависимости от их способности образовывать пигмент. В первую группу входят
фотохомогенные микобактерии, которые образуют пигменты только при культивировании
на свету. Во вторую группу входят скотохромогенные микобактерии, образующие пигмен-
ты и на свету и в темноте. В третью группу входят нехромогенные, т.е. не образующие пиг-
мента, микобактерии. В четвертую группу входят быстрорастущие микобактерии (вне зави-
симости от их способности к пигментации).
Условно-патогенные микобактерии: роль в патологии человека.
Условно-патогенные микобактерии в ослабленном организме вызывают туберкулезоподоб-
ные поражения. У детей они чаще вызывают лимфаденит, а также кожные поражения и ле-
гочную инфекцию.
Общая характеристика возбудителя лепры.
По своим морфологическим свойствам возбудитель лепры схож с туберкулезной палочкой.
M.leprae – облигатный внутриклеточный паразит. В мазках палочка лепры располагается в
виде параллельных групп («пачек сигар») или шаровидными скоплениями.
Лепра: общая характеристика болезни.
Лепра (проказа) – хроническое заболевание людей, характеризующееся образованием гра-
нулем двух возможных типов, лепроматозного или туберкулоидного. Развитие заболевания
также происходит медленно, в течение многих лет.
Лепра: пути заражения.
Заражение лепрой происходит при длительном и тесном контакте с больным.
Лепра: взаимодействие возбудителя с организмом человека.
Палочки лепры гематогенным и лимфогенным путями, а также по нервным окончаниям
разносятся по организму, не вызывая в воротах инфекции видимых изменений.
Лепра: микробиологическая диагностика.
Для микробиологической диагностики лепры используют соскобы с пораженных участков.
Из них готовят мазок, который окрашивают по Цилю-Нильсену, в котором обнаруживают
микобактерии с преимущественно внутриклеточной локализацией. Аллергическая проба с
лепромином положительна при более легкой, туберкулоидной, форме заболевания и отри-
цательна при более тяжелой, лепроматозной, в связи с чем используется с прогностической
целью.
Систематическое положение актиномицетов.
Актиномицеты относятся к порядку Actinomycetales, включающему с себя семейства
Actinomycetaceae и Streptomycetaceae.
МДФд. Занятие № 23
- 5 -
Общая характеристика патогенных актиномицетов.
Патогенные актиномицеты представляют собой слабо ветвящиеся палочки с колбовидными
утолщениями на концах; в пораженных тканях и в гное они беспорядочно переплетаются,
образуя друзы (зерна, могут кальцифицироваться).
Распространение патогенных актиномицетов.
В природе актиномицеты обитают в почве. Являются нормальным обитателями полости рта
человека, реже встречаются в кишечнике.
Этиология актиномикоза.
Актиномикоз вызывают виды рода Actinomyces (одноименного семейства): в подавляющем
большинстве случаев –A.israelii.
Взаимодействие актиномицетов с организмом человека.
Внедрение актиномицетов во внутреннюю среду человеческого организма возможно или из
внешней среды (экзогенная инфекция) или из мест их обитания, как представителей нор-
мальной микрофлоры (эндогенная инфекция). Заболевание развивается лишь на фоне им-
мунодефицитного состояния. Первичный очаг формируют актиномикомы, включающие в
себя друзы. В дальнейшем возможна генерализация инфекции.
Общая характеристика актиномикоза.
Для актиномикоза характерно хроническое гнойное воспаление с образованием гранулем и
свищей.
Микробиологическая диагностика актиномикоза.
Микробиологическая диагностика актиномикоза проводится с помощью микроскопическо-
го метода. Для подтверждения диагноза можно использовать культуральный, серологиче-
ский и аллергический методы диагностики. Культуру выделяют на сложных средах, иден-
тифицируют с помощью РИФ и по биохимическим признакам. Специфические антитела
выявляют в сыворотке крови наиболее часто с помощью РСК с актинолизатом в качестве
антигена. Актинолизат используют и в качестве аллергена для выявления у пациента спе-
цифической сенсибилизации.
Нокардии: классификация.
Нокардии – близкие актиномицетам бактерии рода Nocardia. Типовой вид – N. asteroides.
Нокардии: свойства.
Ветвящиеся кислотоустойчивые бактерии, широко распространѐнные в почве.
Нокардии: роль в патологии человека.
Вызывают нокардиоз и мицетому, обычно – у больных с ослабленным иммунитетом.
Нокардии: микробиологическая диагностика.
Применяется бактериоскопический (в окрашенных по Граму, Цилю-Нильсену мазках выяв-
ляют палочки и тонкие нити) и культуральный методы.
МДФд-23Б. Лекционный курс