Файл: tsyrkunov_v_m_i_dr_infektsionnye_bolezni_i_epidemiologiya.pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.11.2019
Просмотров: 13643
Скачиваний: 2
~ 36 ~
Промывные
воды
желудка
(20–50
мл
)
собираются
в
стерильные
банки
после
промывания
желудка
кипяченой
водой
без
добавления
натрия
гидрокарбоната
,
калия
перманганата
и
др
.
Мазок
из
зева
берут
натощак
или
не
ранее
2
ч
после
полоскания
,
питья
либо
еды
под
визуальным
контролем
с
использованием
шпателя
,
как
при
осмотре
зева
,
не
касаясь
тампоном
слизистых
оболочек
рта
,
языка
,
зубов
.
Перед
взятием
слизи
из
носа
необходимо
предварительно
очистить
нос
(
предложить
больному
высморкаться
)
сухим
ватным
фитилем
и
удалить
корки
.
Тампон
вводят
в
каждую
ноздрю
,
плотно
прикасаясь
всеми
сторонами
его
к
стенкам
и
перегородке
носа
.
Полученный
материал
с
тампона
немедленно
высевается
на
соответствующие
плотные
питательные
среды
,
а
также
наносится
на
предметное
стекло
,
обводится
стеклографом
,
подсушивается
и
направляется
в
лабораторию
для
микроскопического
исследования
.
Вирусологический
метод
.
Выделение
вируса
осуществляется
при
заражении
лабораторных
животных
,
культур
тканей
,
куриных
эмбрионов
.
В
дальнейшем
осуществляется
идентификация
выделенного
вируса
.
Суть
вирусологического
исследования
состоит
в
индикации
антигенов
,
нуклеиновых
кислот
,
специфических
компонентов
вирусов
.
Иммунофлюоресцентный
метод
–
универсальный
метод
ускоренной
диагностики
:
с
высокой
специфичностью
и
разрешающей
способностью
.
Морфологические
методы
.
Производится
исследование
материала
(
чаще
биопсийного
)
из
пораженного
участка
(
воспалительного
очага
).
Проводится
обработка
материала
(
фиксация
,
окраска
)
и
верификация
под
микроскопом
.
Метод
используется
при
хронических
процессах
в
печени
(
гепатиты
,
циррозы
),
кишечнике
(
протозойные
и
бактериальные
колиты
),
железах
(
щитовидная
,
слюнные
)
и
является
решающим
для
диагностики
,
степени
и
активности
патологического
процесса
.
Биологический
метод
.
Производится
заражение
патологическим
материалом
,
содержащим
возбудитель
или
токсины
животных
(
мыши
,
морские
свинки
и
др
.)
с
последующим
исследованием
органов
погибших
животных
для
сопоставления
характера
патологического
процесса
с
имевшим
место
у
больных
или
погибших
,
а
также
для
выделения
возбудителя
или
предполагаемого
токсина
.
На
практике
чаще
применяется
биологическая
проба
и
реакция
нейтрализации
токсина
при
ботулизме
для
постановки
диагноза
и
определения
типа
токсина
.
~ 37 ~
Методы
амплификации
нуклеиновых
кислот
(
молекулярно
-
генетические
методы
).
Тесты
,
основанные
на
амплификации
нуклеиновых
кислот
(NA
А
T – nucleic acid analysis tests).
Амплификация
может
быть
проведена
разными
способами
:
полимеразная
цепная
реакция
(
ПЦР
),
лигазная
цепная
реакция
(
ЛЦР
),
методы
SDA (single strand displacement)
и
TMA (transcript-mediated
assay).
Эти
методы
имеют
преимущества
перед
другими
в
связи
с
высокой
чувствительностью
и
специфичностью
.
Чувствительность
и
специфичность
методов
амплификации
нуклеиновых
кислот
(
МАНК
)
составляет
90–95%
и
определяется
видом
тест
-
систем
.
Другое
их
преимущество
заключается
в
том
,
что
для
тестирования
может
использоваться
любой
вид
клинического
материала
,
в
том
числе
и
моча
.
С
помощью
этих
методов
могут
быть
обнаружены
и
неживые
микроорганизмы
. NATT
является
дорогостоящим
методом
,
однако
благодаря
стоимости
трудозатрат
в
человеко
-
часах
,
эти
технологии
являются
рентабельными
.
Одним
из
наиболее
используемых
методов
NATT
в
настоящее
время
является
ПЦР
.
ПЦР
–
метод
прямого
определения
специфического
участка
последовательности
ДНК
.
Процесс
ПЦР
включает
идентификацию
специфической
последовательности
родительской
ДНК
для
амплификации
(
копирования
)
с
помощью
двух
коротких
праймеров
(
участков
ДНК
),
которые
комплиментарны
концевым
участкам
этой
последовательности
.
Далее
происходит
удлинение
последовательности
ДНК
за
счет
имеющихся
в
реакционной
смеси
в
избытке
дезоксинуклеозидтрифосфатов
,
катализируемое
Tag-
полимеразой
.
В
результате
этого
процесса
образуются
так
называемые
ампликоны
–
копии
обнаруживаемой
последовательности
ДНК
.
Детекция
ампликонов
осуществляется
с
помощью
электрофореза
,
например
в
агарозе
.
ПЦР
-
анализ
в
реальном
времени
параллельно
детекции
ДНК
позволяет
определить
содержание
(
количество
копий
,
титры
)
ДНК
и
РНК
,
провести
генотипирование
возбудителей
,
определить
чувствительность
к
антибиотикам
,
прогнозировать
исход
болезни
.
По
сравнению
с
иммунологическими
тестами
,
ПЦР
-
диагностика
обладает
рядом
преимуществ
:
высокой
специфичностью
,
задаваемой
лишь
нуклеотидной
последовательностью
применяемых
праймеров
;
высокой
чувствительностью
,
позволяющей
выявлять
не
только
острые
,
но
и
латентные
инфекции
(
применение
ПЦР
-
технологии
позволяет
диагностировать
присутствие
даже
единичных
клеток
бактерий
).
В
настоящее
время
созданы
оригинальная
технология
~ 38 ~
биологических
микрочипов
(
биочипов
),
а
также
приборы
для
их
анализа
и
программное
обеспечение
,
позволяющие
в
одной
измерительной
процедуре
проводить
одновременный
многопараметрический
анализ
образца
биологического
материала
.
Основой
биочипов
,
созданных
в
ИМБ
РАН
под
руководством
академика
А
.
Д
.
Мирзабекова
,
является
матрица
полусферических
гидрогелевых
ячеек
(
диаметром
до
100
микрон
и
в
количестве
до
нескольких
тысяч
на
см
2
),
регулярно
расположенных
на
гидрофобной
поверхности
.
В
этих
ячейках
в
качестве
высокоспецифичных
зондов
могут
быть
иммобилизованы
олигонуклеотиды
,
различные
белки
и
другие
молекулы
,
способные
избирательно
взаимодействовать
с
определенными
компонентами
анализируемых
смесей
.
Серологические
методы
.
РА
(
реакция
агглютинации
) –
определение
неизвестных
антител
с
помощью
известных
антигенов
и
установление
вида
возбудителя
с
помощью
известных
антител
.
РПГА
(
реакция
пассивной
гемагглютинации
)
и
РНГА
(
реакция
непрямой
гемагглютинации
) –
более
специфичны
,
так
как
используются
эритроциты
с
адсорбированными
на
их
поверхности
антигенами
или
антителами
.
РТГА
(
реакция
торможения
гемагглютинации
)
основана
на
способности
некоторых
вирусов
агглютинировать
эритроциты
.
РИ
–
реакция
иммунодиффузии
,
основанная
на
различной
способности
антигенов
и
антител
диффундировать
в
геле
.
РСК
(
реакция
связывания
комплемента
) –
титрование
антигенов
или
антител
по
степени
фиксации
комплемента
с
комплексом
антиген
-
антитело
.
РН
(
реакция
нейтрализации
) –
способность
антител
нейтрализовать
токсины
и
антигены
вирусов
.
ИФА
(
иммуноферментный
анализ
) –
используются
антитела
,
конъюгированные
с
ферментом
.
РИА
(
радиоиммунный
анализ
) –
используется
радиоактивная
метка
антигенов
или
антител
.
ЛИФА
–
лантанидный
иммунофлюоресцентный
анализ
–
используются
в
качестве
метки
элементы
редкоземельных
металлов
,
РП
–
реакция
преципитации
(
реакция
Асколи
).
Иммуноблоттинг
(
иногда
называемый
вестерн
-
блоттингом
,
от
английского
Western –
западный
) –
это
метод
исследования
белковых
антигенов
.
Белки
разделяют
с
помощью
электрофореза
и
переносят
на
мембрану
.
Затем
мембрану
инкубируют
в
растворе
антител
и
связанные
антитела
выявляют
с
помощью
радиоизотопного
или
ферментного
методов
.
Латекс
-
агглютинация
(
латекс
-
тест
) –
агглютинация
антителами
частиц
латекса
,
на
поверхности
которых
адсорбирован
антиген
или
гаптен
.
Сущность
серологических
методов
исследования
состоит
в
определении
титра
антител
в
сыворотке
крови
больного
в
динамике
~ 39 ~
болезни
по
отношению
к
известному
антигену
,
вводимому
в
серологическую
реакцию
.
В
клинической
практике
чаще
всего
используется
реакция
агглютинации
(
РА
)
Видаля
,
ее
разновидности
,
РНГА
,
РСК
и
более
информативные
современные
методы
(
ИФА
,
РИА
,
ЛИФА
и
др
.).
В
пробирку
собирают
3–5
мл
крови
.
При
таком
сборе
эритроциты
меньше
травмируются
и
сыворотка
крови
реже
бывает
с
явлениями
гемолиза
.
После
отстаивания
и
центрифугирования
крови
сыворотку
с
помощью
пипетки
переносят
в
другую
пробирку
или
эпиндорф
и
хранят
в
холодильнике
при
температуре
+4°
С
до
постановки
реакции
.
Поскольку
иммунный
ответ
при
большинстве
инфекционных
болезней
развивается
с
5–7-
го
дня
,
а
максимальное
нарастание
титра
антител
происходит
лишь
в
периоде
реконвалесценции
,
серологические
методы
менее
пригодны
для
ранней
диагностики
и
используются
главным
образом
в
целях
ретроспективной
расшифровки
этиологии
уже
перенесенного
инфекционного
заболевания
.
Кровь
для
серологических
исследований
берется
и
в
первые
дни
болезни
,
что
в
дальнейшем
дает
возможность
наблюдать
за
нарастанием
титра
антител
в
динамике
заболевания
.
Повторные
серологические
исследования
при
бактериальных
инфекциях
производятся
не
раньше
,
чем
через
5–7
дней
.
При
вирусных
заболеваниях
берутся
«
парные
сыворотки
»
с
интервалом
10–12
дней
и
при
нарастании
титра
антител
в
4
раза
и
более
подтверждается
диагноз
предполагаемого
заболевания
.
Аллергологическая
диагностика
инфекционных
болезней
Аллергологические
методы
основаны
на
реакции
кожи
в
ответ
на
введение
аллергенов
возбудителей
путем
внутрикожного
способа
введения
(
бруцеллин
,
тулярин
,
токсоплазмин
Vi-
тифин
и
др
.).
Ответ
оценивается
спустя
1–2
суток
по
диаметру
папулы
,
гиперемии
и
отека
.
Могут
быть
использованы
титрационные
пробы
(
токсоплазмин
).
Аллерген
сохраняет
антигенные
свойства
,
но
лишен
инфекциозности
.
Постановка
внутрикожных
проб
с
аллергеном
производится
на
внутренней
стороне
предплечья
,
вводится
0,1
мл
аллергена
(
бруцеллин
,
тулярин
,
токсоаплазмин
).
Ответ
оценивается
спустя
1–2
сут
. (24–48
ч
)
по
диаметру
папулы
,
зоны
гиперемии
и
отека
.
Примеры
:
при
туляремии
–
внутрикожная
аллергическая
проба
становится
положительной
уже
в
конце
1-
й
недели
болезни
.
Тулярин
вводят
внутрикожно
в
дозе
0,1
мл
,
результат
учитывают
через
24
и
48
ч
.
Положительная
реакция
проявляется
в
появлении
гиперемии
и
инфильтрации
кожи
диаметром
0,5
см
и
более
.
При
бруцеллезе
~ 40 ~
используют
реакцию
Бюрне
,
внутрикожно
вводят
бруцеллин
–
фильтрат
бульонной
культуры
бруцелл
.
Эта
реакция
основана
на
способности
сенсибилизированного
организма
специфически
отвечать
развитием
местного
процесса
на
введение
бруцеллёзного
антигена
в
виде
покраснения
кожи
и
её
отечности
.
Реакцию
учитывают
по
величине
отека
:
при
отеке
диаметром
до
1
см
ее
считают
сомнительной
;
от
1
до
3
см
–
слабоположительной
;
от
3
до
6
см
–
положительной
;
более
6
см
–
резко
положительной
.
При
токсоплазмозе
используется
внутрикожная
проба
с
токсоплазмином
;
она
считается
положительной
,
если
на
месте
введения
0,1
мл
токсоплазмина
появляется
гиперемия
и
инфильтрация
кожи
диаметром
не
менее
10
мм
(
более
20
мм
–
резко
положительная
)
и
через
48
ч
размер
инфильтрата
не
уменьшается
.
Для
суждения
об
активности
процесса
можно
использовать
титрационную
пробу
с
токсоплазмином
,
при
постановке
которой
внутрикожно
вводят
разные
разведения
токсоплазмина
(1:10, 1:100, 1:1000, 1:10 000, 1:100000)
по
0,1
мл
каждого
разведения
.
При
активном
процессе
реакция
наблюдается
на
высокие
разведения
(
до
1:100000
и
выше
),
а
диаметр
инфильтрата
на
более
слабые
разведения
может
быть
равен
или
даже
больше
,
чем
на
более
концентрированные
.
Инструментальная
диагностика
инфекционных
болезней
Инструментальная
диагностика
включает
большой
арсенал
традиционных
и
новых
методов
:
рентгенологические
,
ФГС
,
ректороманоскопия
,
колоноскопия
,
фиброколоноскопия
,
лапароскопия
(
для
уточнения
характера
поражения
печени
при
хронических
поражениях
),
РКТ
(
рентгено
-
компьютерная
томография
для
уточнения
характера
поражения
головного
мозга
,
легких
и
других
органов
),
МРТ
(
магнитно
-
резонансная
томография
) –
используют
для
тех
же
целей
,
что
и
РКТ
,
и
другие
.
Используются
чаще
при
проведении
дифференциальной
диагностики
желтух
,
нейроинфекций
,
опухолей
и
других
патологических
процессов
.
Ректороманоскопия
(
фиброколоноскопия
) –
простой
и
доступный
метод
эндоскопической
диагностики
,
применяется
для
осмотра
прямой
и
дистального
отдела
сигмовидной
кишок
в
целях
выявления
патологии
слизистой
(
воспалительные
процессы
изъязвления
–
щигеллёз
,
сальмонеллез
),
злокачественных
и
доброкачественных
опухолей
,
фистул
,
инородных
тел
.
Через
эндоскопическую
трубку
можно
получать
мазки
и
соскобы
со
слизистой
оболочки
прямой
и
сигмовидной
кишок
для
бактериологического
и
цитологического
исследований
,
производить