Файл: immunologia_N3-4_2010_block_210x297.pdf

АКТУАЛЬНОСТЬ

Последние десятилетия отличаются бурным ростом частоты аллергических заболеваний во всем мире, в том числе обусловленных особенностями питания. Поэтому все больше внимания врачи и широкая общественность стали уделять пищевой аллергии. Причины резкого нарастания аллергических болезней связывают с серьезными изменениями экологии и др. Точные статистические данные о заболеваемости и летальности при пищевой аллергии отсутствуют, что можно объяснить трудностями объективной диагностики и установления аллергической природы заболевания, а также большими расхождениями в трактовке клинических реакций на прием пищевых продуктов. Проведение эффективных лечебно-профилактических мероприятий у пациентов с аллергическими заболеваниями должно осуществляться с учетом достоверной информации о том, на какие конкретно аллергены имеет место сенсибилизация у больного [1]. В связи с этим особую актуальность приобретает достоверная специфическая диагностика аллергии с определением причинных аллергенов в каждом конктретном случае. Поэтому, важной научно-практической задачей является разработка методов, позволяющих быстро и достоверно выявлять наличие у пациента сенсибилизации к определенному пищевому аллергену.

Несмотря на то, что все пищевые белки потенциально могут быть причиной развития аллергических реакций, выделяют 8 самых значимых по частоте аллергенов: молоко, яйцо, рыба, ракообразные, пшеница, арахис, грецкий орех, соя [2]. Независимо от того, что пороговая доза соевого белка, необходимая для развития аллергической реакции, более чем в 100 раз превышает пороговые дозы других значимых пищевых аллергенов [3], имеет место достаточно большая распространенность сенсибилизации к данному продукту среди населения, что связано с широким использованием сои в пищевой промышленности (табл.1).

Согласно немногочисленным данным за последние годы, случаи аллергии к сое, в том числе у детей раннего возраста - причина возникновения тяжелых клинических форм аллергии. Следует отметить, что в основе непереносимости могут лежать иммуноаллергические механизмы, которые могут реализовываться специфическими IgE и IgG антителами.

Следует указать, что международными консесусами определено, что диагностика должна базироваться на определении специфических IgE антител [4,5]. Нерешенной проблемой в настоящее время является отсутствие или дороговизна качественных диагностических систем для диагностики аллергии к пищевым продуктам и, в частности, к сое.

Таблица 1

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Оценка возможности использования разработанной ООО «Укрмед Дон» иммуноферментной тест-системы для определения иммуноглобулинов Е к сое в сыворотке крови.

При разработке иммуноферментной тестсистемы ставились следующие задачи: диагностика клинически значимого количественного содержания специфического IgE, а не только выявление положительной сенсибилизации; возможность постоянного контроля эффективности противоаллергических мер, а также ранней диагностики возможных осложнений и/ или рецидивов заболевания; используя малые объемы крови, необходимой для анализа (до 2-3 мл при выполнении 20-30 анализов); высокая специфичность и чувствительность анализа; простота и быстрая выполнимость методики (3-4 часа); безопасность для обследуемого.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследованы сыворотки крови 39 пациентов с непереносимостью продуктов, в состав которых входит соевый белок в возрасте от 4 месяцев до 59 лет. В качестве контрольной группы

обследованы 34 лиц аналогичного возраста без наличия аллергии. Все обследованные проходили анкетирование, с помощью которого выяснялись жалобы и анамнез, в том числе аллергологический. Для детей нормы специфического IgE были подобраны исходя из средних уровней общего IgE у несенсибилизированных лиц соответственного возраста.

Определение уровня антител класса Е к сое

всыворотке крови обследованных проводилось с помощью разработанной первой отечественной тест-системы «СОЯ – IgЕ» ООО «Укрмед Дон», город Донецк. Характеристика иммуноферментной тест-системы представлена

втаблице 2. В набор включена калибровочная кривая, позволяющая определять содержание специфического IgE в МЕ/мл. Концентрация исследуемого показателя на уровне <0,35 МЕ/мл характеризуется как недетектируемая, 0,35-0,7 МЕ/мл – низкая, 0,7-3,5 МЕ/мл – средняя, 3,5- 17,5 МЕ/мл – высокая, 17,5-50,0 МЕ/мл – очень высокая, 50,0-100,0 МЕ/мл – интенсивно высокая, >100,0 МЕ/мл – крайне высокая. Для учета оптической плотности использовался разработанный иммуноферментный анализатор СК-01.

При разработке системы в качестве объекта сравнения использованы сыворотки 12 пациентов, обследованных хемилюминесцентным методом.

Проводимая при помощи программы «MedStat» статистическая обработка полученного материала включала анализ распределения. Использовались непараметрические критерии сравнения (Уилкоксона), расчитывался критерий -квадрат.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Установлено, что разработанная тестсистема характеризуется линейностью калибровочной кривой (рис.1), высокой чувствительностью (0,1 МЕ/мл) и широким диапазоном оптической плотности кривой и исследуемых образцов (оптическая плотность стандарта 100 МЕ/мл достигает 6,000 ед. и выше), что обуславливает продлевание срока ее эксплуатации до 4-5 лет с сохранением экстинции верхней точки не ниже 2 ед.

При обследовании установлено совпадение результатов, полученных на импортной и отечественной системе. При этом, следует отметить более высокую чувствительность отечественной иммуноферментной тест-системы, о чем свидетельствует более высокое (в 3-4 раза) число имупульсов, регистрируемое в случае повышенного содержания специфического IgE.

Следует подчеркнуть, что разработанная тест-система позволяет определять уровень специфических IgE антител практически к любому комплексу имеющихся аллергенов, включая ряд продуктов, более характерных для упо-

требления в Украине (творог, кефир, ряженка, копченое сало и др.).

Таким образом, разработана первая отечественная тест-система для определения уровня иммуноглобулинов класса Е к сое в сыворотке крови. Определен удельный вес лиц с диагностическими уровнями антител класса IgЕ к указанному продукту среди здоровых лиц, а также пациентов с подозрением на непереносимость соевого белка. Проведенное сравнение полученных результатов с данными аналогичного обследования с помощью импортного набора показало совпадение результатов исследова-

ния. Данные о высоком, в сравнении со здоровыми, удельном весе лиц с повышенным содержанием исследуемых антител среди пациентов с подозрением на аллергию к сое подтверждают возможность использования данной тестсистемы для диагностики аллергии к указанному продукту.

ВЫВОДЫ

1.Показана возможность исследования антител Е к пищевому аллергену – сое с помощью первой отечественной тест-системы разработанной ООО «Укрмед Дон».

2.У пациентов с клинически обоснованным подозрением на непереносимость соевого белка частота встречаемости повышенного уровня (53,8+8,0%) специфических антител класса IgЕ достоверно выше, чем в группе здоровых.

класса Е к сое в дальнейшем при обследовании лиц, страдающих непереносимостью вышеуказанного продукта.

УДК: 616.514-036.12:616.151+577.1

ЛИТЕРАТУРА

1.Лусс Л.В. Этиология, патогенез, проблемы диагностики и лечения аллергического ринита / Л.В. Лусс //Русский медицинский журнал. — 2003. — Т.11, №12. — С.718-729.

2.Sicherer S. H. Food allergy / S. H. Sicherer // Lancet. — 2002. —№360. — P.701-710

3.Cordle Christopher T. Soy Protein Allergy: Incidence and Relative Severity / Christopher T. Cordle // J. Nutr. — 2004. —№134. — P.1213S1219S.

4.Osterballe M. Diagnostic evaluation of food-

related allergic diseases / M. Osterballe, C. Bindslev-Jensen // Journal of Allergy and Clinical Immunology. — 2003. — Vol.112, №1. — P.196-201.

5.Maloney J.M. The use of serum-specific IgE measurements for the diagnosis of peanut, tree nut, and seed allergy / J.M.Maloney, M.Rudengren, S.Ahlstedt et al. //J Allergy Clin Immunol. — 2008. — №122. — P.145-51.

АКТУАЛЬНОСТЬ

Матриксные металлопротеиназы (MMP) – семейство внеклеточных, цинксодержащих протеиназ. За способность этих ферментов специфически гидролизовать все основные белки матрикса они были названы матриксными металлопротеиназами или матриксинами. MMP синтезируются в виде неактивных проферментов и активируются после отщепления пропептида. Активность MMP в клетке регулируется на разных уровнях, включая транскрипцию, активацию белка и взаимодействие с эндогенными ингибиторами такими как тканевые ингибиторы металлопротеиназ (TIMP). К настоящему времени описано около 30 MMP. Традиционно MMP классифицируются по субстратной специфичности. В нормальных физиологических условиях они играют центральную роль в процессах морфогенеза, ремоделирования и резорбции

тканей. [1]. ММР принимают участие в деструкции матрикса при ряде заболеваний (пародонтиты, хронические язвы роговой оболочки глаза, а также процессы инвазии и метастазирования опухолей) [1,2,3]. Рядом авторов представлены данные о роли матриксинов в различных областях медицины: кардиологии, гинекологии, нефрологии, аллергологии и других [4-7]. При этом, имеют место немногочисленные работы о значении указанных ферментов в развитии и течении крапивницы, в частности, аутоиммунной [8,9]. В настоящее время продолжается изучение действия ММР на различные патологические процессы.

В связи с вышеизложенным, целью работы было сравнение уровней металлопротеиназ -2 и -9 в сыворотке крови у здоровых лиц и пациентов, страдающих крапивницей. Также в работе было проведено сравнение уровня металлопро-

теиназ у пациентов с хронической и аутоиммунной крапивницей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В ходе работы обследовано 20 здоровых лиц, а также 28 пациентов с крапивницей, среди которых 8 человек страдало хронической крапивницей, а у оставшихся двадцати имела место аутоиммунная крапивница. Всем обследованным проводилось определение уровня металлопротеиназ -2 и -9 с помощью наборов для иммуноферментного анализа производства R&D Systems (США). Проводимая при помощи программы «MedStat» статистическая обработка полученного материала включала анализ распределения. Расчитывались среднее значение и его ошибка, использовались параметрические критерии сравнения (Стьюдента).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ:

Сравнение уровня металлопротеиназ у пациентов с крапивницей и здоровых лиц показало, что для пациентов, страдающих аутоиммунной формой заболевания характерно достоверное (р<0,05) повышение как ММР-2, так и ММР-9 (табл.). Так, средние значения указанных цитокинов в сыворотке здоровых лиц составили 224,3+4,7 нг/мл и 62,2+4,0 нг/мл, а у лиц, страдающих аутоиммунной крапивницей – 276,7+15,4 нг/мл и 85,5+6,8 нг/мл соответственной. В то же время, хроническая крапивница сопровождается только достоверным повышением уровня ММР-9. Средние уровни ММР-2 и ММР-9 в данной группе обследованных соста-

вили 244,6+17,6 нг/мл и 89,2+9,7 нг/мл соответственно. При сравнении уровней исследуемых ферментов между пациентами с разными формами крапивницы достоверных различий нами зарегистрированно не было.

Таким образом, установлено, что как хроническая, так и аутоиммунная крапивница сопровождается достоверным повышением концентрации в крови металлопротеиназы-9. Кроме того, для пациентов, страдающих аутоиммунной формой крапивницы также характерно повышение уровня металлопротеиназы-2. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности включения определения матриксных металлопротеиназ -2 и -9 в комплексное обследование лиц с подозрением на хроническую или аутоиммунную крапивницу и, в принципе, согласуется с аналогичными данными, полученными другими исследователями [8,9].

ВЫВОДЫ:

1.Для пациентов с аутоиммунной крапивницей характерно достоверное (р<0,05) повышение концентрации ММР-2 и ММР-9 в сыворотке крови.

2.При хронической крапивнице регистрируется достоверное (р<0,05) повышение содержания ММР-9 в сыворотке.

3.Определение уровней металлопротеиназ может использоваться в комплексной диагностике хронической и аутоиммунной крапивницы.

Таблица