Файл: Навч.посібник Акушерство, гінекологія та штучне осіменіння с.г. тварин, Харута, 2013.pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 22.02.2019
Просмотров: 9251
Скачиваний: 20
91
для сперми бугая, кнура і жеребця та – 25–30 °С для сперми
барана.
Сучасні синтетичні середовища розріджують у дистильо‐
ваній або бідистильованій воді. Готують середовище у день
отримання сперми (за 25–30 хв до отримання) і використовують
для розрідження сперми не пізніше 3 годин після приготування.
У мірний циліндр наливають необхідний об’єм дистильованої
або бідистильованої води та підігрівають на водяній бані до
температури +30–35 °С впродовж 10–15 хв. Розгерметизовують
пакет з середовищем і висипають його у колбу з дистильованою
або бідистильованою водою обережно помішуючи круговими
рухами або стерильною скляною паличкою. Залишають до
повного розчинення середовища так щоб розчин був прозорим.
Після отримання сперми у плідників проводять її
візуальну та лабораторну оцінку, вимірюють температуру, після
чого розріджують у відповідному співвідношенні. Температура
розріджувача і сперми у момент розрідження повинна бути
однаковою (допускається відхилення в ± 1 °С). Середовище
обережно доливають до сперми невеликими порціями постійно
помішуючи її скляною паличкою. Після розрідження обов’яз‐
ково перевіряють сперму на рухливість.
До розрідження допускається сперма бугая з рухливістю
не менше 8 балів і концентрацією не менше 800 млн сперміїв в
1 мл еякуляту. Таку сперму можна розбавляти в 10–20–50 разів.
Спочатку її розбавляють безпосередньо в спермозбирачі в
пропорції 1:1 – 1:2 і після 5–10‐хвилинної витримки розбавляють
додатково до потрібного об’єму. При цьому синтетичне
середовище підливають по стінці посудини невеликими
порціями з наступним нахилом змішувача в горизонтальне
положення і обертанням його навколо осі після додавання
кожної порції. Після розрідження при використанні всіх
способів зберігання в спермодозі бугая повинно бути не менше
15 млн сперміїв із прямолінійно поступальним рухом, а
рухливість повинна становити 4 і більше балів.
92
Сперму барана розріджують лише густу, з рухливістю не
менше 9 балів. Розріджують її у 2–4 рази (1:1; 1:3) у
спермоприймачі або стерильному флаконі. Після розрідження
концентрація сперміїв з прямолінійно поступальним рухом
у спермодозі повинна становити не менше 80 млн сперміїв в
1 мл.
Сперму жеребця допускають до розрідження з рухливістю
не менше 6 балів і з концентрацією не менше 150 млн сперміїв в
1 мл сперми. Її можна розбавляти в 3–4 рази (1:2; 1:3), але так,
щоб кількість сперміїв у дозі становила 3 млрд і більше.
Сперму кнура розріджують середовищем за рухливості не
менше 8 балів і концентрації не менше 100 млн сперміїв у 1 см
3
.
Розрідження еякуляту проводять у 1–5 разів у стерильній колбі
(табл. 8).
Таблиця 8
Ступені розрідження сперми кнурів‐плідників
Концентрація сперміїв, млн/мл
Рухливість сперміїв,
бали
100
150
200
250
300
10
1:1
1:2
1:3
1:4
1:5
9
1:0,8
1:1,7
1:2,6
1:3,5
1:4,4
8
1:0,6
1:1,4
1:2,2
1:3
1:3,8
7
1:0,4
1:1,1
1:1,8
1:2,5
1:3,2
Перед осіменінням свиноматок можна провести додаткове
розрідження, але так, щоб в 1 мл сперми було не менше
40–50 млн сперміїв, а в дозі – не менше 3 млрд статевих клітин.
Допускається до використання сперма з рухливістю 6 та більше
балів.
93
2.16. СПОСОБИ ЗБЕРІГАННЯ СПЕРМИ
Короткочасне зберігання сперми при температурі льоду,
який розстає (+2 +4 °С). Свіжоотриману сперму бугая або барана
розріджують
глюкозо‐цитратно‐жовтковим
або
молочно‐
жовтковим (молоко – 100 мл, жовток курячих яєць – 20 мл)
середовищем, перевіряють на рухливість і фасують в одноразові
стерильні поліетиленові ампули, поліетиленові пробірки
об’ємом 1 мл або у флакони з‐під антибіотиків. Флакони
заповнюють повністю для попередження збовтування сперми
під час транспортування. Поліетиленові ампули запаюють, а
пробірки і флакони закривають стерильними нетоксичними
пробками і закріплюють їх гумовими кільцями. На кожній
ампулі попередньо пишуть номер плідника і дату одержання
сперми. Для попередження температурного шоку та загибелі
сперміїв охолодження сперми проводять поступово. Для цього
заповнені флакони та ампули залишають при кімнатній
температурі (18–20 °С) на 20–30 хв, після чого їх обгортають
шаром вати товщиною 1–2 см і вкладають у поліетиленові
мішечки, які поміщають у термос із льодом, який розстає, або в
холодильник для поступового охолодження до температури
+2 +4°С.
Зберігання сперми при температурі +5 +20 °С. Для
зберігання сперми при такій температурі в синтетичне
середовище, з метою гальмування обмінних процесів у статевих
клітинах, додають компоненти, які зумовлюють їх анабіоз.
Найефективнішим для зберігання сперми бугая є використання
двоокису
вуглецю
(СО
2
).
При
цьому
використовують
спеціальний розріджувач: води дистильованої – 1000 мл; натрію
двовуглекислого – 21 г; натрію цитрату – 23,6 г; калію хлористо‐
го – 0,4 г; глюкози – 3,0 г; стрептоциду білого – 3,0 г.
94
Посудину із вказаним середовищем підігрівають до 96 °С в
гарячій воді до розчинення стрептоциду, потім охолоджують до
20–22 °С і насичують двооксидом вуглецю доти, поки рН
розріджувача досягне рівня 6,35. Для насичення використовують
балонний СО
2
або газ, який виділяється в результаті додавання
до мармуру 20%‐ого розчину соляної кислоти. Для очищення
вугільної кислоти від токсичних домішок її пропускають крізь
15%‐ий розчин двовуглекислої соди і 3%‐ий розчин перман‐
ганату калію. Очищеним таким чином двоокисом вуглецю
протягом 10 хвилин насичують середовище для розбавлення
сперми. Після цього в розріджувач добавляють жовток курячого
яйця – 11 мл, 1 млн од. пеніциліну і 1 млн од. стрептоміцину.
Підігрівають розріджувач у теплій воді до температури 30–35°С і
розріджують сперму бугая у співвідношенні 1:10–1:40, залежно
від її концентрації.
Розріджену сперму зразу ж фасують у скляні ампули і
запаюють їх, потім поміщають у термос і зберігають при
температурі +18 +20 °С до 5 діб.
Для розрідження і зберігання сперми кнура при темпе‐
ратурі 16–18°С застосовують сучасні синтетичні середовища
(табл. 9).
Розріджену сперму фасують у скляні колби або поліе‐
тиленові флакони і зберігають у стерильному боксі‐термостаті
або в спеціальних термосах для зберігання і транспортування.
Колби закривають не герметично (пергаментним папером), без
закріплення їх гумовими кільцями. Транспортують сперму в
спеціальних
термосах,
побутових
сумках‐холодильниках,
термосах‐ящиках, у яких для теплоізоляції використовують
паралон. Сперму можна транспортувати лише через 30 хвилин
після розрідження. Допускається короткочасне (1–3 год)
поступове зниження температури до 14–15 °С.
95
Таблиця 9
Термін зберігання сперми кнурів залежно від середовища
Середовище
Термін зберігання сперми, діб
Біоконсан
4–6
BTS
3–4
BTS 2A
3–4
BTS TOP
3–4
BTS Gold
6
Premium
3–4
Stardiluent
10
SafeCellPlus
7
M III (Medium)
3–4
PRIMXcell
3–4
BIOSOLWENS PLUS
7–10
Androhip
7
Androstar
7
MaxiGen
7–10
Magapor
7
SUS
7
Gold Life
6
Для розрідження і короткочасного (протягом 48 год)
зберігання сперми жеребця при температурі +2 +5 °С
використовують
середовище
ЛХЦЖ,
INRA
96.
Сперму
розбавляють у співвідношенні 1:3 при температурі 25–30 °С.
Охолоджують розбавлений еякулят поступово.
Довготривале зберігання сперми в глибокозамороженому
стані (кріоконсервація). Довготривале зберігання статевих
клітин можливе лише за умови повного їх анабіозу.
Кріоконсервацію сперми бугаїв проводять у формі відкритих
і облицьованих гранул та пайєт (соломинок).