Файл: Навч.посібник Акушерство, гінекологія та штучне осіменіння с.г. тварин, Харута, 2013.pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 22.02.2019
Просмотров: 9020
Скачиваний: 20
86
Середовище для розрідження сперми плідників повинно
бути ізотонічним – осмотичний тиск сперми і середовища
повинен бути однаковим.
Плазма сперми, яка складається переважно із секрету
придаткових залоз, полегшує еякуляцію, активує спермії,
сприяє їх переміщенню в статевих шляхах самки. Однак під час
зберігання сперміїв поза організмом активація завдає шкоди
через невиправдані витрати енергетичних ресурсів сперміями.
Крім того, під час зберігання в спермі бугая і барана накопи‐
чується молочна кислота, яка згубно діє на статеві клітини.
2.14. СЕРЕДОВИЩА ДЛЯ РОЗРІДЖЕННЯ СПЕРМИ
ПЛІДНИКІВ РІЗНИХ ВИДІВ
Середовище для розрідження сперми має відповідати
таким вимогам:
• збільшувати об’єм еякуляту (дистильована, бідистильо‐
вана або спеціально підготована вода);
• гальмувати обмінні процеси в сперміях з метою подов‐
ження строку їх зберігання (застосування двооксиду вуглецю,
органічних кислот, хелатону);
• забезпечувати спермії речовинами для метаболічних
процесів (цукриноелектроліти, глюкоза, лактоза, глікокол,
гліцин, мед);
• створювати оптимальні умови для виживаності сперміїв
(буферні розчини і мінеральні речовини, лимоннокислий
натрій, солі з багатовалентними аніонами, фосфатний буфер,
трис‐буфер, N‐трисметил‐2‐аміноетан сульфанілова кислота;
• підвищувати стійкість сперміїв до швидкого охолоджен‐
ня або заморожування (жовток курячого яйця, який містить 7 %
лецитину, ліпопротеїди, гліцерин);
• попереджувати розвиток мікроорганізмів (стрептоцид
білий розчинний, пеніцилін, стрептоміцин або комплексний
препарат “Спермосан‐3”);
87
• підвищувати заплідненість самок (гіалуронідаза, проста‐
гландин F
2α,
рилізинг‐гормон, ЛГ).
Середовища для розрідження сперми повинні мати певні
фізико‐хімічні властивості і таку концентрацію компонентів, за
якої підтримуються необхідний осмотичний тиск і певний
рівень кислотності. Підвищена кислотність або лужність
призводять до загибелі статевих клітин, тому до складу
синтетичного середовища можуть входити лише слабкі кислоти
і незначна кількість лугів. Середовища також не повинні містити
солей багатовалентних металів (свинцю, олова), а також різних
отруйних і ароматичних речовин, які згубно діють на спермії.
Рецепт глюкозо‐цитратно‐жовткового середовища подано
у табл. 5.
Таблиця 5
Склад глюкозо‐цитратно‐жовткового середовища для
розбавлення сперми самців сільськогосподарських тварин
Для сперми
Компонент розріджувача
барана бугая кнура жеребця
Вода дистильована, мл
Глюкоза медична, г
Натрію цитрат тризаміщений, г
Жовток курячого яйця, мл
Стрептоцид білий, г
Пеніцилін, тис.од.
Стрептоміцин, тис.од.
100
0,8
2,8
20
0,2
50–75
50–75
100
3
1,4
10–12
0,12
75–100
75–100
500
5,0
0,5
30–40
0,2
500
500
100
7
–
0,8
0,12
200
25
Окрім вказаного середовища, широко застосовують інші
розріджувачі, склад яких залежить від умов зберігання сперми
та виду самця (табл. 6).
88
Таблиця 6
Середовища для короткотривалого зберігання сперми
Сперма
Компонент середовища
бугая
барана
жереб‐
ця
кнура
Скорочена назва син‐
тетичного середовища
ГЦЖ
ГЦЖ
ГФЖ
ЛХЦЖ
ГХЦ
ГХЦС
Вода дистильована, мл
100
100
100
100
1000
1000
Глюкоза, г
3
0,8
3,2
–
60
40
Лактоза, г
‐
‐
‐
11
‐
‐
Натрію цитрат тризамі‐
щений, г
1,4
2,8
‐
0,089
3,56
3,8
Гідрокарбонат
натрію, г
‐
‐
0,008
1,2
0,5
Натрій фосфатнокислий:
‐
‐
‐
‐
‐
12‐водний, г
‐
2,08
‐
‐
‐
‐
безводний, г
‐
0,82
‐
‐
‐
‐
Калій фосфатнокислий
однозаміще‐
ний безводний, г
‐
‐
‐
‐
‐
‐
Сульфат амонію, г
‐
‐
‐
‐
‐
1,8
Трилон Б, г
‐
‐
‐
0,1
3,7
2,6
Жовток курячого
яйця, мл
20
15–20 15–20
1,6
‐
‐
Спермосан 3, тис. од
75 –90
25
25
25–30 250–300 250–300
Температура зберігання
розбавленої сперми, °С
2–4
2–4
2–4
2–4
16–20
16–20
Максимальний термін
зберігання, год
72
24
24
48
72
72
Окрім вищезазначених, на ринку представлені комерційні
синтетичні середовища без вмісту тваринних білків. Антимік‐
робні речовини в них представлені лінкоміцином, спектино‐
міцином, гентаміцином та тирозином (табл. 7).
89
Таблиця 7
Сучасні середовища для розрідження сперми
самців сільськогосподарських тварин
Середовища для розрідження сперми
бугая
барана
кнура
жеребця
Andromed,
Andromed CSS,
Triladyl, Biladyl,
PremixOxyfree,
Bioxcell, Bioxcell
CSS Spectall
OviPro
Andromed
Triladyl
Biladyl
BTS, BTS 2A, BTS TOP,
Gold, Premium,
Stardiluent,
SafeCellPlus, Medium,
PRIMXcell, SUS, Gold
Life, BIOSOLWENS
PLUS, Androhip,
Androstar MaxiGen,
Magapor,
Andromed‐E
EguiPro
INRA
Egcellsire
EgcelIfreeze
2.15. САНІТАРНО‐ГІГІЄНІЧНІ ПРАВИЛА, МЕТОДИКА
І ТЕХНІКА ВИГОТОВЛЕННЯ РОЗРІДЖУВАЧІВ
ТА РОЗРІДЖЕННЯ СПЕРМИ
За розрідження сперми необхідно дотримуватись таких
санітарно‐гігієнічних правил:
• використовувати чистий стерильний посуд;
• готувати синтетичне середовище перед розрідженням
не більш ніж за 3 години до його використання, а сперму
розріджувати впродовж 10 хв після отримання еякуляту (якщо
не вдається провести розрідження сперми за 3 години з часу
приготування середовища, його не використовують, а готують
інше);
• посудини зі спермою та приготовані середовища
необхідно закривати кришками або марлевими серветками;
• температура середовища повинна відповідати темпера‐
турі сперми, яку розріджують (низька, порівняно зі спермою,
90
температура розріджувача викликає холодовий удар, а висока –
викликає загибель сперміїв);
• допускається відхилення в температурі сперми і
середовища ± 1 ºС;
• для синтетичного середовища слід використовувати
лише дистильовану, бідистильовану або спеціально підготовану
воду;
• середовище необхідно доливати порціями, тонкою
цівкою до сперми та ретельно змішувати коливальними рухами
(якщо
доливати
сперму
до
розріджувача,
то
спермії
потрапляють в умови великого розрідження внаслідок чого
можуть загинути);
• усі компоненти середовища мають бути хімічно чистими
та точно відважені.
Для приготування розріджувача в стерильну хімічну колбу
наливають необхідну кількість дистильованої (бідистильованої)
води і добавляють точне наважування компонентів послідовно,
відповідно до рецепту, окрім жовтка, антибіотиків і гліцерину.
Розмішують середовище похитуванням посуду до повного
розчинення стрептоциду. Потім середовище кип’ятять 5–7 хви‐
лин у водяній бані і після охолодження до 30–35 °С вносять у
нього жовток курячого яйця, антибіотики і гліцерин.
Курячі яйця перед отриманням жовтка ретельно миють
водою за допомогою щітки, протирають тампоном змоченим
96°‐им
спиртом
ректифікатом,
шкаралупу
розколюють
стерильним інструментом надвоє, зливають білок у банку, а
жовток в оболонці обережно переносять на стерильний аркуш
фільтрувального паперу. Щоб звільнити жовтковий мішок від
залишків білка, його перекочують на папері. Потім стерильним
скальпелем проколюють оболонку жовтка і зливають його в
стерильну мензурку, а плівка залишається на папері.
Посудину з приготовленим розріджувачем закривають
кришкою і поміщають на водяну баню за температури 30–35 °С