Файл: Исторический очерк развития заводской технологии как науки.doc
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 24.10.2023
Просмотров: 196
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Л. С. Казарновский, В. Н. Солонько и Л. А. Шинянский для экстракции пепсина применили ультразвук.
Измельченный материал помещают в сосуд с водным раствором хлористоводородной кислоты (0,5%) при соотношении 1:4. Сосуд опускают в ванну, заполненную трансформаторным маслом, и после 5-минутного воздействия ультразвука (частота 500 кГц, интенсивность 9 Вт/см?) жидкость из сосуда сливают, а остаток снова заливают 0,5% раствором хлористоводородной кислоты при соотношении 1 : 2 и подвергают воздействию ультразвука в течение 3 мин.
Дальнейшая обработка может идти по-разному. В наиболее простом варианте водную вытяжку пепсина выпаривают под вакуумом при температуре не выше 40 °С до консистенции густоватого экстракта, после чего полученную массу смешивают с молочным сахаром. Значительно лучше, если пепсин будет освобожден от сопровождающих его веществ. Для этого к водной вытяжке добавляют 0,1 н. раствор аммиака до слабощелочной реакции, а затем фосфатную взвесь с одновременным добавлением раствора аммиака с целью сохранения слабощелочной реакции. Фосфатная взвесь получается смешением 10% раствора хлорида кальция с равным объемом 5,5% раствора двузамещенного фосфата натрия. После добавления фосфатной взвеси жидкость перемешивают и оставляют на 5-6 ч. При этом пепсин, выделенный из раствора при помощи аммиака, адсорбируется на поверхности тончайшей взвеси фосфата кальция Са3(Р04)2 и вместе с ним выпадает в осадок. Во избежание элюирования, т. е. обратного перехода фермента в раствор, повторно добавляют аммиак, чтобы сохранить необходимую реакцию среды. Отстоявшуюся жидкость сливают с осадка сифонирова-нием, осадок взмучивают с дистиллированной водой, декантируют, после чего переводят на нутч-фильтр и после промывки отсасывают. Осадок обрабатывают 4% раствором щавелевой кислоты. При этом фосфат кальция переходит в нерастворимый окса-лат кальция, а пепсин растворяется. Раствор пепсина фильтруют, осадок промывают водой, промывные воды присоединяют к фильтрату, после чего добавляют такое количество 1 н. раствора аммиака, чтобы жидкость имела рН 2,4-2,6. Далее добавляют пятикратный объем спиртоэфирной смеси (спирта и эфира поровну). Выпадает белый осадок, который собирают на фильтре и здесь же промывают сначала небольшим количеством спиртоэфирной смеси, а затем эфиром. После промывки осадок быстро просыхает в токе теплого воздуха.
Кроме описанного адсорбционного метода, предложенного виднейшим отечественным биохимиком А. Я- Данилевским, очистка пепсина может быть проведена путем диализа, а также высаливанием нейтральными солями щелочных металлов.
После проверки переваривающей активности полученный пепсин разбавляют молочным сахаром до активности 1 : 100. Для этой же цели разрешается применять свекловичный сахар. Готовый препарат представляет собой белый или слегка желтоватый порошок кисловато-сладкого вкуса со слабым своеобразным запахом. Полностью растворим в воде (коллоидно); раствор прозрачен или слегка мутноват, но не выделяет осадка. Реакция 2% раствора слабокислая {по фенолфталеину). Влаги в препарате должно быть не более 1%. Не должно быть патогенной и гнилостной микрофлоры, сапрофитов допускается не более 2000 колоний в 1 г.
Препарат упаковывают в плотно закрывающиеся стеклянные банки или в банки из белой жести со вложенным пергаментным мешком. Сохраняется в сухом помещении при температуре от 2 до 15°С.
По истечении года проверяется его активность. Пепсин в сочетании с гидрохлоридом бетаина (1+4) известен под названием ацидин-пепсина (Acidm-pepsinum). Выпускается в таблетках по 0,5 и 0,25 г. В желудке гидрохлорид бетаина легко гидролизуется. и отделяет хлористоводородную кислоту.
Желудочный сок. Пищеварительные соки животных и человека необходимо рассматривать как естественные растворы ферментов, содержащие меньшее количество примесей, чем искусственно получаемые экстракты. При наличии разработанных методов их можно получать в значительных количествах и применять в качестве лекарственных препаратов. К числу таких препаратов должен быть отнесен натуральный желудочный сок (Succus gastricus naturalis), получаемый по методу И. П. Павлова от здоровых собак. Для этой цели накладывают желудочную фистулу в сочетании с эзофаготомией. Оперированные таким образом собаки сохраняют способность проглатывать куски мяса, но оно вместе со слюной вываливается через выведенный наружу конец пищевода и в желудок не попадает. Вытекающий через фистулу при таком «мнимом» кормлении желудочный сок отличается чистотой. С целью сохранности к полученному соку добавляют салициловую кислоту в количестве 0,03-0,04%.
Готовый препарат представляет собой прозрачную бесцветную жидкость кислого вкуса со слабым своеобразным запахом. Содержит белки, отчасти в виде нуклеопротеидов
, ферменты - пепсин, химозин и липазу, а также хлористоводородную кислоту в количестве 0,5%; рН 0,8-1,0. Из неорганических веществ, кроме НС1, в натуральном желудочном соке содержатся хлориды (NaCl, KC1, NH40), фосфаты, сульфаты и небольшое количество роданистого водорода. Желудочный сок расфасовывают в склянки по 100-150 мл и сохраняют при температуре от 2 до 10 °С в защищенном от света месте. Срок годности G мес. При замораживании натурального желудочного сока появляется осадок пепсина, который снова растворяется в нем при комнатной температуре.
Применяется также искусственный желудочный сок (Succus gastricus artificialis), представляющий собой водный экстракт слизистой оболочки желудков свиней, подкисленный хлористоводородной кислотой.
Препараты ферментов поджелудочной железы
Панкреатин (Pancreatirmm). Для получения панкреатина свежие или замороженные поджелудочные железы рогатого скота или свиней (предпочтительнее) измельчают в мясорубке, прессуют и отжатый сок осаждают спиртом. Осадок промывают спиртом, эфиром, сушат и растирают в порошок. Проверяют активность трипсина и разбавляют молочным сахаром до получения препарата с определенной активностью-25 ЕД. Выход препарата может быть повышен, если измельченные железы вначале привести к определенной кислотности (рН 4,5), прибавляя буферную смесь, затем массу смешать с песком и подвергнуть прессованию. Протеолитическую активность препарата можно повысить за счет влияния энтерокиназы и иона ++Са(СаСl2).
Препарат представляет собой порошок желтоватого цвета. В воде растворяется неполностью. При действии препарата на белок в слабощелочной среде он под влиянием трипсина расщепляется, теряя присущие ему физические свойства. Так, казеин теряет способность осаждаться при подкислении раствора, а желатин - способность образовывать студень при охлаждении его раствора и вязкость. При действии препарата на крахмальный клейстер он под действием амилазы осаха-ривается, теряет коллоидные свойства и способность давать синее окрашивание с раствором йода. Сохраняется в стеклянных банках в сухом прохладном месте.
В форме порошка или таблеток применяется при ахилии, панкреатитах и расстройствах пищеварения, связанных с нарушением функции печени и поджелудочной железы.
Протеолитин (Proteolytinum). Препарат, предназначенный для глубокого расщепления белка; содержит комплекс ферментов поджелудочной железы. Свежую поджелудочную железу свиней промывают изотоническим раствором хлорида натрия (стерильным) и медленно замораживают при -16-17
СС. Для получения протеолитина используют железу с различным сроком хранения: от 2 ч до 90 сут. Оттаивание производят при комнатной температуре не менее 2 ч. После оттаивания измельчают железу в электромясорубке «Волчок». К измельченной массе прибавляют полуторное количество свежеперегнанной дистиллированной воды (по массе) и 10% толуола, взбалтывают 30 мин, оставляют на 5-6 ч при 0-5°С, фильтруют через мелкопористую сетку из нержавеющей стали, фильтрат разливают в стерильные флаконы по 10 мл и быстро замораживают. Высушивание препарата из замороженного состояния производят методом сублимации при глубоком вакууме до остаточной влажности 5-6%.
Трипсин кристаллический (Trypsinum crystallisatum). Фермент, выделенный из поджелудочной железы в чистом виде. Применяется для облегчения удаления вязких секретов и экссудатов при воспалительных заболеваниях дыхательных путей (ингаляции), тромбофлебитах и остеомиелитах (внутримышечные инъекции), в офтальмологии - при иритах, иридоциклитах и др. (глазные капли).
Химопсин (Chimopsinum). Препарат поджелудочной железы, содержащий, помимо трипсина, фермент а-химотрипсин. Применяется при лечении гнойных ран, пролежней, ожогов II степени (растворы в 0,25% растворе новокаина), в офтальмологии - при кератитах и язвах роговицы (ванночки с раствором и глазные капли).
Абомин (Abominum). Препарат из сычуга телят и ягнят молочного возраста, содержит сумму протеолитических ферментов желудочно-кишечного тракта. Применяется в форме таблеток по 0,2 г при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, сопровождающихся нарушением переваривающей способности и понижением кислотности желудочного сока (гастриты, гастроэнтериты, энтероколиты и др.).
Инкрепан (Increpanum). Сухой экстракт, получаемый из поджелудочной железы крупного рогатого скота. Содержит комплекс нуклеиновых кислот и белковое вещество, обладающее активностью фермента рибонуклеазы. Применяется в таблетках по 0,5 г при гипертонической болезни.
Препараты желчи
Желчь медицинская консервированная (Choleconservata medicata) или билиарин (Вikiarinum). Препарат, содержащий натуральную желчь убойного скота. Свежесобранную желчь или смесь свежесобранной желчи с желчью, извлеченной из желчных пузырей после их 3-суточной выдержки в холодильнике (в соотношении 3:1) фильтруют и на каждый литр профильтрованной желчи добавляют смесь стабилизаторов, антисептиков и отдушки в следующих количествах: спирта 96% 200 мл, формалина или лизоформа 2 мл, спиртового раствора фурацилина {1 г фурацилина в 1,5 л 70% спирта) 20 мл, душистой эссенции до 4 мл. Смесь тщательно взбалтывают, после 3-суточной выдержки при комнатной температуре разливают в асептических условиях в стерильные флаконы по 250 мл и пастеризуют при температуре 60-63 °С в течение I
1/*-17з ч. Применяют в виде компрессов как обезболивающее и рассасывающее средство при хронических артритах, спондилоартрозе, тендовагинитах и др.
Препараты ферментов семенников и стекловидного тела
Лидаза (Lydasa). Препарат, содержащий фермент гиалуронидазу. Получается из семенников крупного рогатого скота. Светло-желтая или золотистого цвета пористая масса, легкорастворимая в воде. Специфическим субстратом гиалуронидазы является гиалуроновая кислота, относящаяся к группе мукополисахаридов. Биологическое значение ее заключается в том, что она является «цементирующим», склеивающим веществом соединительной ткани. Гиалуронидаза вызывает распад гиалуроновой кислоты до глюкозамина и глюкуроновой кислоты и тем самым уменьшает ее вязкость, что вызывает увеличение проницаемости тканей и облегчает движение жидкостей в межтканевых пространствах. Выпускается в ампулах, содержащих по 0,1 г стерильного сухого вещества. Перед употреблением содержимое ампулы растворяют в 1 мл 0,5% раствора новокаина. Применяется внутримышечно или под кожу для размягчения рубцов, появления подвижности в суставах, устранения или уменьшения контрактур, рассасывания гематом.
Ронидаза (Ronidasa). Препарат гиалуронидазы. В отличие от лида-зы (специально очищенный препарат для парентерального применения) ронидаза используется для наружного применения. Порошок серовато-желтоватого цвета, выпускаемый во флаконах пенициллинового типа по 5 г. Порошок ронидазы (по 0,5 г и более) наносят на увлажненную изотоническим раствором хлорида натрия стерильную марлевую салфетку, которую накладывают на пораженный участок под вощеную бумагу и мягкую повязку.
Препараты аминокислот
Аминопептид (Aminopeptidum). Раствор аминокислот и низших пептидов, получаемый из казеина, цельной крови крупного рогатого скота, фибринных сгустков или сухого альбумина. Применяется при заболеваниях, сопровождающихся белковой недостаточностью, и необходимости усиленного белкового питания. Вводится внутривенно, подкожно или через зонд в желудок до 1,5-2 л. Выпускается во флаконах по 0,25 и 0,5 л.
Гидролизин Л-103 (Hydrolysinum L-103). Препарат, получаемый при кислотном гидролизе белков крови крупного рогатого скота. В реактор загружают 100 кг сырья (кровь и измельченные сгустки крови), заливают 175 л дистиллированной воды и 28 кг хлористоводородной кислоты с относительной плотностью 1,18-1,19 и проводят гидролиз при температуре 115-120°С в течение 3 ч при перемешивании. Окончание гидролиза определяют по содержанию аминного азота (не менее 40% к общему азоту). Кислый гидролизат фильтруют и для нейтрализации пропускают через специальные емкости, наполненные ионообменной смолой; рН гидролизата после нейтрализации должен быть 6,6- 7,4 (по бромфеноловому синему). Для вытеснения гидролизата из слоя смолы через нее вслед за гидролизатом пропускают дистиллированную воду. Нейтрализованный гидролизат стерилизуют в автоклаве-реакторе под давлением 1,2 атм в течение получаса или под давлением 1 атм в течение часа. К простерилизованному гидролизату добавляют стерильный раствор глюкозы из расчета 20 г вещества на 1 л гидролизата, после чего гидролизат пропускают через фильтр Сальникова со стерилизующими пластинами СФ.