vitro и пересадки микрокультуры. Оборудование для операционной комнаты:

• 
  ламинарный бокс
  
• 
  лабораторный (химический) стол
  
• 
  холодильник
  
• 
  сухо-жаровой шкаф
  
• 
  шкаф для лабораторной посуды (стерильной)
  
• 
  посуда для введения
  
• 
  автоматическая 1-канальная пипетка
  
• 
  бактерицидные лампы
  
• 
  витамины стерильные
  
• 
  регуляторы роста стерильные
  
• 
  пинцет
  
• 
  скальпель
  
• 
  микроскоп
  
• 
  стеллажи
  

3. Световая (культуральная комната) используется для выращивания растительных тканей в условиях invitro. Оборудование культуральной комнаты:

• 
  стеллажи для штативов с культивируемым материалом
  

• 
  термостат (с высокой точностью поддерживает задаваемые режимы температуры и влажности воздуха)
  
• 
  кондиционер для регуляции температуры (25 ± 2оС) и влажности воздуха (70 %)
  
• 
  бактерицидные лампы
  

4. Моечная комната используется для мытья химической и биологической посуды. Оборудование моечной комнаты:

• 
  мойка с горячей и холодной водой
  
• 
  дистиллятор
  
• 
  сушильные шкафы с режимом работы для сушки посуды - до 100-130 оС, для инструментов - до 170 оС
  
• 
  шкафы для хранения чистой посуды и инструментов
  
• 
  бутыли для воды
  
• 
  лабораторный (химический) стол- ?
  

5. Автоклавная комната предназначена для стерилизацииптательных сред, инструментов и вспомогательных материалов. Оборудование помещения для стерилизации:

• 
  автоклав (с режимом работы: давление 1-2 атмосферы и температура 120 оС)
  
• 
  сушильные шкафы для стерилизации посуды и инструментов сухим жаром,
  
• 
  стеллажи для штативов с питательными средами;
  
• 
  шкафы для хранения стерильных материалов.
  

Данное помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией и иметь канализационный слив для отвода конденсата из автоклава.Необходимый набор посуды, инструментов и материалов в биотехнологической лаборатории: мерные колбы, колбы конические, химические стаканы на 50, 100, 200, 500 и 1 л, мерные цилиндры, чашки Петри, пробирки, бутылки, пипетки, стеклянные палочки, фильтры, ножницы, пинцеты, ножи, препаровальные иглы, шпатели, бумага (оберточная, пергаментная, фильтровальная), фольга алюминиевая, вата, марля.

---

Материалы и оборудование: автоклав, сушильный шкаф, дистиллятор, Порядок выполнения работы:

1. 
   Ознакомиться с устройством биотехнологической лаборатории.
   
2. 
   Под руководством преподавателя освоить принципы работы автоклава, сушильного шкафа, дистиллятора.
   
3. 
   Пройти инструктаж по технике безопасности при работе в биотехнологической лаборатории.
   

Контрольные вопросы:

1. 
   Какие помещения должна включать биотехнологическая лаборатория?
   
2. 
   Какие основные принципы работы в биотехнологической лаборатории?
   
3. 
   Какое оборудование, посуду, инструменты, материалы должна иметь биотехнологическая лаборатория?
   
4. 
   Какие требования техники безопасности необходимо соблюдать для работы в биотехнологической лаборатории?
   

Работа 2. Подготовка биотехнологической лаборатории к работеЦель работы: освоить методы подготовки помещений, материалов, инструментов, оборудования к работе с культурой растительных тканей.Теоретическое обоснование.Все работы с культурой клеток и тканей invitroв биотехнологической лаборатории проводят в стерильных (асептических) условиях в ламинар-боксе, стерильными инструментами, в стерильной посуде, на стерильных питательных средах. Чаще всего для стерилизации помещений (операционной, культуральной комнаты) используют ультрафиолетовое облучение в течение 0,5-2 часов (в зависимости от площади помещения). Работы в облученном помещении начинают через 15-20 минут после отключения бактерицидных ламп, так как под действием ультрафиолетового излучения двухатомный кислород воздуха становится трехатомным озоном – газом, токсичным для человека. За 1 час до начала работы ламинар-бокс облучают бактерицидными ультрафиолетовыми лампами в течении 20 минут. Для достижения максимальной стерильности перед обработкой УФ все поверхности тщательно отмываются моющими средствами, водой и растворами хлорсодержащих веществ, поверхности ламинар-бокса обрабатывают 70 % спиртом.Материалы и оборудование: посуда: химические стаканы (50, 100, 250 мл), штативы с пробирками, чашки Петри; инструменты (пинцеты, скальпели, препаровальные иглы), моющие средства (стиральный порошок).

---

Порядок выполнения работы:Простерилизовать инструменты, посуду и питательные среды, необходимые для проведения работ по выращиванию стерильных проростков. В ЛР №3

1. 
   Подготовить помещение к работе – провести тщательную влажную уборку с использованием моющих средств.
   
2. 
   Подготовить посуду и инструменты.
   
3. 
   Посуду замочить в растворе гипохлорита натрия, тщательно отмыть в растворах детергентов (стиральный порошок), промыть 8-10 раз проточной водой, затем дважды дистиллированной.
   
4. 
   Чистую посуду, металлические инструменты (завернутые в фольгу), а также чашки Петри (завернутые в плотную бумагу), поместить в сушильный шкаф на 2 часа при температуре 100-130 ºС.
   
5. 
   Сухую посуду для хранения закрыть фольгой, либо завернуть в бумагу.
   
6. 
   Прокварцевать помещение в течение 1 ч. Соблюдать технику безопасности! Запрещено заходить (находиться) в помещении во время кварцевания! Нельзя смотреть без защитных очков на лампу! После окончания кварцевания (выключения УФ-лампы) 10-15 минут подождать.
   

5.Штативы с пробирками или колбы, заполненные питательной средой, колбы с дистиллированной водой (закрытые фольгой), вату марлю завернуть в целлофановую бумагу и поместить в автоклав, автоклавировать 20 минут при давлении в стерилизационной камере 0,5 атм. 6. Проавтоклавированные материалы перенести в комнату для пересадки тканей и поместить в шкафы или на стеллажи.Контрольные вопросы:

1. 
   Какие существуют способы подготовки химической посуды иинструментов для работы в биотехнологической лаборатории?
   
2. 
   Как подготовить ламинарный бокс к работе?
   
3. 
   В каких условиях проводят все работы с культурой клеток и тканей в биотехнологической лаборатории?
   

Работа 2. Методы стерилизации растительных материалов и оборудования при проведении работ с культурой изолированных клеток и тканей растенийЦель работы: освоить методы стерилизации в биотехнологии, а также правила поддержания асептики при проведении работ с культурой изолированных клеток и тканей растений; подготовить посуду и инструменты к стерилизации.Теоретическое обоснование.

---

Одним из основных условий успешного культивирования изолированных органов, тканей, клеток и протопластов состоит в соблюдении строгой стерильности. В случае нарушения стерильности на питательных средах хорошо развиваются микроорганизмы (грибы, бактерии), нарушающие состав среды и повреждающие ткани и клетки растений. Поэтому все опыты с культурой изолированных тканей (введение в культуру, пересадка на свежую питательную среду) проводят в ламинар-боксах стерильными инструментами. Стерилизуют бокс, инструменты, посуду, растительный материал, питательные среды, ватные пробки и все другие материалы, необходимые для работы.Стерилизация ламинар-бокса. Ламинар-боксы предназначены для культивирования изолированных клеток, тканей и некоторых других работ, требующих стерильности, которая обеспечивается с помощью бактериальных воздушных фильтров. За 1 час до начала работы ламинар-бокс облучают бактерицидными ультрафиолетовыми лампами в течении 20 минут. Перед работой все поверхности ламинарапротирают 70% спиртом. На стол ламинарараскладывают спиртовую горелку, спички, стакан с 96%-ным спиртом и необходимые стерильные инструменты, посуду, материалы. Перед началом работы внутреннее пространство ламинара облучают УФ-лучами в течение 20 минут, после чего включают биофильтры на 10-15 минут.Для работы в ламинар-боксе надевают стерильный халат и шапочку, руки обрабатывают 96% спиртом. Пинцеты, скальпели и препаровальные иглы помещают в химический стакан со спиртом. Перед каждой манипуляцией инструменты обжигают на пламени спиртовки.Стерилизация посуды. Перед стерилизацией посуду (химические стаканы, колбы, цилиндры, бутылки, пробирки и др.) надо вымыть и высушить. Для мытья посуды используют детергенты (мыло, стиральный порошок), и при необходимости раствор дихромата калия в серной кислоте (хромпик).Вымытую посуду ополаскивают проточной, а потом дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу. Чтобы избежать заражения простерилизованных предметов из воздуха, перед стерилизацией их заворачивают в обёрточную бумагу или фольгу (у стаканов, колб достаточно обернуть только горлышко). Затем посуду помещают в сушильный шкаф ипрогревают при температуре +100-130°Св течение 2 ч.Температуру в сушильном шкафу выше 175°С допускать не следует, так как при этом ватные пробирки буреют, а бумага, которой закрывают ватную пробку сверху, становится ломкой.

---

Еще более строгой стерилизации можно добиться под давлением в автоклаве, так каквлажный жар эффективнее убивает микроорганизмы и их споры, чем сухой. Автоклавированию подвергают стаканы с крышками, чашки Петри, пипетки, колбы с дистиллированной водой. Посуду заворачивают в фольгу или оберточную бумагу и автоклавируют при 2 атм. В течение 25- 30 минут. Верхнюю часть градуированных пипеток закрывают ватной прокладкой, пипетки заворачивают в бумагу по 10 штук. Стерилизация инструментов. Металлические инструменты (скальпели, пинцеты, иглы) автоклавировать нельзя, так как под действием пара образуется ржавчина. Поэтому их стерилизуют сухим горячим жаром в сушильном шкафу в течение 2 ч при 170°С.Непосредственно перед работой и в процессе работы инструменты (пинцеты, скальпели, препарировальные иглы) ещё раз стерилизуют в ламинар-боксе, помещая их в стакан с 96%-ным этиловым спиртом. Перед каждой манипуляцией инструменты обжигают на пламени спиртовки. Очень тонкие инструменты (иглы, кусочки лезвий) могут терять свои свойства при обжигании, поэтому их стерилизуют, погружая в спирт.Стерилизация материалов. Вату, марлю, ватные пробки, бумажные матрасики, фильтровальную бумагу, халаты, косынки стерилизуют в автоклаве под давлением 2 атм в течение 25-30 мин, предварительно завернув в целлофановую бумагу, либо помещают в биксы.Стерилизация питательных сред. Разлитые в пробирки или стеклянные колбы питательные среды закрывают ватными пробками или фольгой, завёртывают горлышко пищевой пленкой и автоклавируют при 120°С и давлении 1 атм в течение 20 мин. Холодная стерилизация.Если в состав питательной среды входят вещества, разрушающиеся при высокой температуре, то их подвергают холодной стерилизации, пропуская через бактериальные фильтры. Органические жидкости,витамины, фитогормоныпропускают через мелкопористые бактериальные фильтры (с диаметром пор 0,45 мкм).Биотехнологическую лабораторию необходимо содержать в чистоте. Следует регулярно проводить гигиеническую уборку помещений лаборатории. Обеспечить полную стерильность лаборатории очень трудно и это не всегда необходимо, но значительно снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях в лабораторных помещениях возможно. Это достигается путём применения на практике методов дезинфекции, то есть уничтожения возбудителей инфекционных болезней на объектах внешней среды.

---

Смотрите также файлы

• Практических заданий по дисциплине правовые основы оперативнорозыскной деятельности.docx

• 15. Какие показатели характеризуют стоимость и доходность акций предприятия.docx

• Урок русского языка в 6 классе по теме Девятнадцатое февраля Классная работа Весна.pptx

• 10. Оценка риска и эффективности инвестиционных проектов в логистике.docx

• Челябинский филиал федеральное государственное автономное образовательное учреждение.pdf