Стафилококковый бактериофаг (жидкий). Фильтрат фаголи-зата стафилококков. Применяют наружно, внутрикожно, внут­римышечно для лечения при стафилококковых заболеваниях.

Диагностические стафилококковые фаги. Набор типоспеци-фических фагов для фаготипирования стафилококков.

О-стрептолизин сухой. Лиофильно высушенный фильтрат бульонной культуры стрептококка — активного продуцента О-стрептолизина. Применяют для серодиагностики — опреде­ления антител к О-стрептолизину в сыворотках крови больных стрептококковыми инфекциями (чаще ревматизмом).

Антибиотики. Грамположительные бактерии — р-лак-тамные антибиотики, ванкомицин, тетрациклины, аминогли-козиды, макролиды, линкомицины, сульфаниламиды, фторхи-нолоны и др.

Грамотрицательные бактерии — р-лактамы, спектр действия которых сдвинут в сторону грамотрицательных мик­роорганизмов, хлорамфеникол, аминогликозиды, тетрацикли­ны, сульфаниламиды, фторхинолоны и др.

Тема 12.2. АНАЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ - ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ

План

Программа

Биологические свойства возбудителей анаэробных гнойно-воспалительных и раневых инфекций, их патогенность, экология, особенности инфекций и эпи­демиология вызываемых заболеваний.

Микробиологическая диагностика гнойных заболева­ний, вызванных неспорообразующими анаэробами.

Микробиологическая диагностика газовой гангрены.

Микробиологическая диагностика столбняка.

Биохимические и молекулярно-биологические методы диагностики анаэробной инфекции.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

Демонстрация

1. Мазки из чистых культур Clostridium petfringens, С. teta-ni, Bacteroides fragilis. Мазки из раневого отделяемого, содержащие смешанную микрофлору (клостридии, ста­филококки, грамотрицательные бактерии и др.).

171

Методика посева для выделения патогенных анаэробов.

Аппаратура и питательные среды для выращивания анаэробов.

Определение сс-токсина клостридий в раневом отделя­емом с помощью летициназной пробы.

а Задания для выполнения лабораторной работы

Бактериоскопическое исследование: приготовить мазки из гноя, окрасить их по методу Грама и микроскопировать. Сделать предварительное заключение и на­метить ход дальнейшего исследования.

Сделать окончательное заключение о возбудителе или возбудителях раневой инфекции на основании бактериоскопических, бактериологических и других дан­ных, полученных из бактериологической лаборатории.

Методические указания

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной, раневое отде­ляемое, кусочки мышечной ткани, перевязочный материал и др., кровь — при сепсисе. Для обеспечения бескислородных условий взятие материала производят шприцем с хорошо при­тертым поршнем до полного его заполнения и вытеснения воздуха. Затем шприц надевают на иглу, вставленную через резиновую пробку в пробирку со смесью инертных газов (N2 + Н2) и СО₂, и вводят в нее исследуемый материал, кото­рый изучают в микробиологической лаборатории. Используют также различные специальные транспортные среды, в которые помещают материал, взятый у больных.

---

• Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из очага, кровь — при сепсисе.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (см. схему 12.1.1). Из ис­следуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах бактерий позволяет поставить ориентировочный диагноз и наметить план дальней­шего исследования.

Бактериологическое исследование. Посевы производят на элек­тивные обогатительные среды для анаэробов (среда Китта—Та-роцци, тиогликолевый бульон или полужидкий тиогликолевый агар), содержащие специальные добавки (гемин, витамин К и др.), и инкубируют при 37 °С в течение 24—48 ч. После про­смотра выросшей культуры делают мазки, окрашивают их по методу Грама и микроскопируют. Бактериоскопия дает воз­можность установить однородность или неоднородность куль-

172

Признак Бактерии Pep- Pep- Veil- Вас- C.per- C.no- C.se- C.so- C.hi-to- tost- lonel- teroi- frin- vy pti- rdel- stoly-coc- repto- la des gens cum li ticum cus coc­cus Форма и распо- i § ложение бакте- § я g риальных клеток я s sS « и н И я « « а •"* * » п s 2 "^ 2 *" 2 U2 аЙ нЙ §й ой ой 2^ Ээ* S&" sf §у §* * S ? п §2 So Ео Ро а о ео ео S2 к Я S*? 34 ffe; рч ^ч оЧ 5ч Во >£-о .9 о «и и .R<e3 .R^d ,0с9 м сЗ «и и Ox EJ и fc^c Sc fc^c ЪА с Не 2е 2с Подвижность _ — _ + __ + + + + Споры ____ + + + + + Окраска по ме- + + — — + + + + + тоду Грама Ферментация с + — + + с + с — углеводов Свертывание — — + + + х — + + или пептониза-ция молока Образование +_+ +___х х H2S Образование + — — +_____ индола Разжижение же- — — — + + + + + + латина Восстановление + — + ±ххх — — нитратов Гемолиз эритро- + — — ±х + + + + цитов Образование ____ + + + + + токсина

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследова­ния. Анаэробные бактерии вырабатывают специфические ме­таболиты, включая летучие жирные кислоты с короткой цепью, спирты и нелетучие органические кислоты. Для их обнаруже­ния в материале от больного используют ГЖХ (см. главу 11).

• Микробиологическая диагностика раневой анаэробной кло-стридиальной инфекции — газовая гангрена (схема 12.2.1).

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: раневое отделяемое, отечная жидкость, кусочки мышечной ткани, перевязочный материал, кетгут. Рекомендуется брать материал из разных участ­ков очага поражения, особенно из глубоких слоев. Кровь — при сепсисе.

---

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Проводят путем микро­скопии мазков, приготовленных из отечной жидкости или некротизированной ткани. Наличие в препаратах крупных (1—1,5x3—10 мкм) грамположительных палочек, некоторые из которых (C.perfringens) образуют макрокапсулу (рис. 12.2.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал вно­сят в несколько пробирок со средой Китта—Тароцци, железо -сульфитным агаром (среда Вильсона—Блера) и молоком. Часть пробирок прогревают при 80 "С в течение 30 мин для уничто­жения неспорообразующих бактерий. Посевы инкубируют в обычном термостате при 37 'С. C.perfringens растет в глубине среды. В молоке уже через 3—4 ч посева образуется губкооб-разный сгусток, содержащий пузырьки газа и отделившуюся прозрачную жидкость. Через сутки на среде Китта—Тароцци отмечается помутнение и газообразование, а на железосуль-фитном агаре несколько позднее появляются черные колонии в глубине агарового столбика. Для получения культур других видов клостридий требуются более строгие анаэробные усло­вия. Из всех посевов делают мазки, окрашивают их по методу Грама и микроскопируют. При положительном результате обнаруживаются крупные грамположительные палочки.

Для получения чистой культуры делают пересевы на сахар­ный кровяной агар в чашки Петри и инкубируют в строго анаэробных условиях при 37 °С в течение 3—4 дней. Выросшие колонии пересевают в пробирки со средой Китта—Тароцци. Идентификацию чистой культуры производят на основании признаков, перечисленных в табл. 12.2.1. Идентификация по биохимическим признакам осуществляется традиционными методами или с помощью тест-систем для определения специ­фических бактериальных ферментов или метаболитов.

Реагент Количество реагента, мл пробирка пробирка пробирка пробирка 1234 Исследуемый материал 0,3 0,3 0,3 0,3 Лецитин 0,1 0,1 0,1 -Раствор хлорида натрия 0,1 — 0,2 Сыворотка ати-C.perfringens — 0,1 — — Сыворотка анти-C.novy — — 0,1 — Инкубация при 37 "С в течение 46—60 мин Учет результатов (наличие помутнения)

• Микробиологическая диагностика столбняка (см. схему 12.2.1)

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кусочки ткани вокруг предполагаемых входных ворот инфекции, перевязочный ма­териал, кетгут. Рекомендуется брать материал из разных участ­ков очага поражения, особенно из глубоких слоев. При подо­зрении на столбняк у женщин после родов или аборта — вы­деления из матки, у новорожденных — выделения из пупочной раны.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Материал засевают в среду Китта—Тароцци и инкубируют в анаэробных условиях при 37 "С в течение 3—4 сут, наблюдая придонный рост бактерий. Затем делают посевы на сахарный агар в чашки Петри, в столбик сахарного питательного агара в пробирке. Посевы также инкубируют в анаэробных условиях. На поверхности кровяного агара С.tetan/образует нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза. Для получения чистой культуры подозрительные колонии пересевают в про­бирки со средой Китта—Тароцци и сохраняют их под слоем вазелинового масла или в эксикаторе, заполненном смесью инертных газов. Для определения способности выделенной чистой культуры к образованию столбнячного токсина (токси-генности) используют серологические реакции (преципитации в геле и др.) с антителами к тетаноспазмину. Бактериологичес­кий метод используют в качестве дополнительного метода для подтверждения диагноза, поскольку он не дает своевременного результата.

---

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Токсин в материале может быть обнаружен с помощью серологических реакций in vitro (ИФА и др.). Метод позволяет получить ответ в течение нескольких часов и обеспечивает своевременную диагности­ку заболевания.

Биопроба. Проводят для обнаружения столбнячного токсина в исследуемом материале. С этой целью материал растирают в стерильной ступке с песком, заливают изотоническим раство­ром хлорида натрия для экстрагирования токсина и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат вводят внутримышечно бе­лым мышам. Животным контрольной группы вводят смесь фильтрата с антитоксической сывороткой. Через 1—2 сут у мышей появляется ригидность мышц хвоста и задних конеч­ностей. В результате резкого сокращения хвостовых мышц хвост поднимается в виде дуги. Затем подопытные животные погибают. У животных в контрольной группе признаки инток-

сикации отсутствуют вследствие нейтрализации токсина анти­сывороткой. В настоящее время биопроба практически не при­меняется.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Антитоксические противогангренозные сыворотки — монова­лентные (антиперфрингенс, антиэдематиенс — антинови, анти-септикум и др.) и поливалентная. Сыворотки получают путем иммунизации лошадей соответствующими анатоксинами, с по­следующей очисткой и концентрацией методом ферментатив­ного гидролиза (диаферм-3). Препараты выпускаются в жид­ком и сухом виде. Применяют для экстренной пассивной про­филактики и специфической иммунотерапии газовой гангрены.

Адсорбированный столбнячный анатоксин. Получен путем обезвреживания формалином столбнячного токсина с после­дующей его очисткой, концентрацией и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Входит в состав ассоциированной коклюш-но-дифтерийно-столбнячной вакцины и других препаратов. Применяют для активной иммунизации против столбняка.

Противостолбнячная сыворотка. Получена из крови лошадей, гипериммунизированных столбнячным анатоксином. Очищена и концентрирована методом диаферм-3. Активность измеряет­ся в международных единицах. Применяют для экстренной пассивной профилактики и лечения столбняка.

Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный. Получен из гамма-глобулиновой фракции крови доноров, ревакциниро-ванных очищенным адсорбированным столбнячным анатокси­ном. Применяют для экстренной пассивной профилактики и лечения столбняка.

Антибиотики. Грамположительные бактерии — р-лактамные антибиотики, ванкомицин, тетрациклины, макро-лиды, линкомицины, метронидазол.

Грамотрицательные бактерии — р-лактамы, спектр действия которых сдвинут в сторону грамотрицательных мик­роорганизмов, хлорамфеникол, тетрациклины, сульфанилами­ды, метронидазол.

---

Аминогликозиды и фторхинолоны, как правило, не активны по отношению к анаэробным микробам.

Глава 13

ВОЗБУДИТЕЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Возбудители кишечных инфекций представлены большим числом микроорганизмов, принадлежащих к неродственным группам (табл. 13.1).

Микроорганизмы Заболевания СЕМЕЙСТВО Enterobacteriaceae РОД Escherichia E.coli Эшерихиоз РОД Shigella Шигеллез (бактериальная ди-S.dysenteriae зентерия) S.flexneri S.boydi S.sonnei РОД Salmonella S.enterica подвид enterica биовар typhi Брюшной тиф биовар paratyphi А Паратиф А биовар paratyphi С Паратиф С биовар schottmulleri Паратиф В биовар typhimurium Сальмонеллезы биовар enteritidis и др. РОД Edwardsiella E.tarda Гастроэнтероколит РОД Yersinia Y.enterocolitica Кишечный иерсиниоз СЕМЕЙСТВО Spirillaceae РОД Campylobacter Кампилобактериоз C.jejuni C.laridis РОД Helicobacter Геликобактериоз H.pylori СЕМЕЙСТВО Vibrionaceae РОД Vibrio V.cholerae 01 биовар asiatici Холера биовар el-tor » V.cholerae 0 139 » V.cholerae не Ol (O4.O6 и др.) Гастроэнтериты V.parahaemolyticus V.mimicus V.fluvialis V.furnissii V.hollisae и др. РОД Aeromonas A.hydrophila » A.sobria A.cavia

Микроорганизмы Заболевания РОД Plesiomonas P.shigeloides Гастроэнтерит СЕМЕЙСТВО ВасШасеае РОД Bacillus B.cereus Пищевая интоксикация B.licheniformis B.subtilis РОД Clostridium C.difflcile Псевдомембранозный колит C.perfringens группа А Пищевая интоксикация группа С Некротизирующий энтерит C.botulinum Ботулизм СЕМЕЙСТВО Micrococcaceae РОД Staphylococcm S.aureus Пищевая интоксикация S.cohnii S.xylosus

генность, экология, особенности инфекции и эпиде­миология вызываемых заболеваний.

Микробиологическая диагностика.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

а Демонстрация

Мазки из чистых культур возбудителей кишечных ин­фекций: Escherichia coli, Shigella sonnei, Campylobacter jejuni. Окраска по методу Грама.

Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

а Задание студентам

Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

Бактериологическая диагностика кишечных инфек­ций.

2.1. Бактериологическая диагностика эшерихиозов:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посева исследуе­мого материала на среду Эндо. Описать и за­рисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего исследования;

в) провести серологическую идентификацию чис­той культуры, полученной из подозрительных колоний, в ориентировочной реакции агглюти­нации на стекле с агглютинирующими ОВ-коли-сыворотками (серотипирование). Сделать вывод и наметить план дальнейшего анализа.

---

Смотрите также файлы

• ГИПЕРТЕНЗИЯ, Эклампсия.doc

• ДИВ.doc

• ВЗРП.doc

• Внутриутробная задержка развития плода.doc

• Антенатальный 20уход_24Nov[1].doc