2.2. Бактериологическая диагностика дизентерии:

а) выбрать материал для исследования;

б) учесть результаты первичного посева исследуе­мого материала на среду Эндо. Описать и за­рисовать колонии, выросшие на среде Эндо, и обосновать выбор подозрительных колоний длядальнейшего исследования;

в) учесть результаты пересева подозрительных ко­лоний на среду Ресселя;

г) провести идентификацию чистой культуры:

4 по биохимическим свойствам,

4 по антигенным свойствам в ориентировоч­ной реакции агглютинации на стекле с аг­глютинирующими сыворотками для иденти­фикации шигелл. Сделать вывод и наметить план дополнительных исследований.

3. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препаратами.

Энтеротоксиген- Энтеропатоген- Энтероинвазив- Энтерогеморраги-ные E.coli ные E.coli ные Е.со! ческие E.coli 06, 08, О15, Класс I: 055, 028ас, 029, О157:Н7, О20, О25, 027, Olll, O119, 0124,0136, О126:Н11, О63, О78, О80, О125-О128, О143, О144, О111:Н-085, О115, 0142 0152, О164, О128ас, О139, Класс II: О18, О167 0148, О153, 044,0112, О159, О168 О114

---

полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

• Микробиологическая диагностика дизентерии

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование (схема 13.1.2). Фекалии больного засевают на дифференциально-диагностические сре­ды (агар Эндо, Плоскирева и др.). При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков их выбирают петлей, промывают в изотоническом растворе хло­рида натрия и наносят на поверхность питательной среды, после чего растирают шпателем. На 2-й день лактозоотрицательные (прозрачные бесцветные) колонии пересевают на среду Ресселя или на короткий "пестрый ряд" с лактозой и глюкозой.

Среда Ресселя: питательный агар, 1 % раствор лактозы, 0,1 % раствор глюкозы и индикатор бромтимоловый синий. Среду готовят таким образом, чтобы внизу она была в виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую культуру засевают уко­лом в столбик и на поверхность среды. При ферментации углеводов происходит изменение цвета среды (желтая окраска); разрывы стол­бика свидетельствуют о газообразовании. Изменение цвета во всем объеме среды наблюдается при ферментации лактозы, только столби­ка — при ферментации глюкозы, так как содержание ее в среде в 10 раз меньше, чем лактозы. Вместо среды Ресселя можно использо­вать трехсахарную среду (в ее состав входят глюкоза, лактоза, сахаро­за, мочевина, некоторые соли и индикатор феноловый красный) или другие дифференциально-диагностические среды, позволяющие раз­личать бактерии по способности ферментировать лактозу и глюкозу.

Оставшуюся часть колоний используют для постановки ори­ентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью ди­зентерийных сывороток и смесью сывороток против сальмо­нелл (для исключения брюшного тифа или сальмонеллеза). Окончательное заключение дают на 4-й день по результатам ферментативных тестов (табл. 13.1.2) и реакции агглютинации. Выделенную чистую культуру используют для определения чув­ствительности возбудителя к антимикробным препаратам.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследова­ния. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Группа Ферментация Образо- Декар- 1 1 1 1 вание бокси- глкжозы лакто- ман- дуль- кси- индола лирова- с газооб- зы нита цита лозы ние ор- разова- нитина нием S.dysenteriae — — — — — в — S.flexneri — — + — — в — S.boydii — — + — в в — S.sonnei — [+] + [+] в — +

---

ческих признаков, чувствительности к антимикробным пре­паратам.

Типирование штаммов возбудителей для эпидемиологическо­го анализа проводят методом рестрикционного анализа ДНК.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования: биохими­ческие исследования. Выявление бактериального фермен­та уреазы.

4 Определение уреазной активности в биоптате. Биоптат помещают в бульон, содержащий мочевину и индикатор. В положительных случаях происходит изменение цвета индикатора в результате защелачивания среды при гид­ролизе мочевины с образованием аммиака.

4 Дыхательный тест на уреазу. После перорального приема мочевины, меченной радиоактивным изотопом ¹⁴С, оп­ределяют присутствие меченой двуокиси углерода ¹⁴СО₂ в выдыхаемом воздухе. Появление ¹⁴СО₂ свидетельствует об активности уреазы (результат гидролиза меченой мо­чевины), что является косвенным признаком присутст­вия в желудке или двенадцатиперстной кишке H.pylori. Тест используют преимущественно для предварительной диагностики и контроля результатов лечения.

Молекулярно-биологические исследования. Ис­следуемый материал, полученный из очага инфекции, исполь­зуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Диагностическое значение имеет обнару­жение антител к поверхностным антигенам возбудителя и уреа-зе. Используют методы: ИФА, РИА и РИГА.

• Микробиологическая диагностика кампилобактериозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, рек­тальные мазки, при генерализованной форме инфекции — кровь, спинномозговая жидкость. При необходимости хране­ния материал помещают в транспортную среду (буферный со­левой раствор с добавлением нейтрального угля и метиленово-го синего или тиогликолевый бульон) при температуре 4 °С, что позволяет микробам сохранять жизнеспособность до 4 сут.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическая диагностика. Производят посев на спе­циальные плотные среды, обогащенные аминокислотами с до­бавлением гемолизированной крови или нейтрального угля (для удаления токсичных метаболитов кислорода) и 3—5 анти­биотиков для подавления роста сопутствующей микрофлоры (обычно используют ванкомицин, полимиксин, триметоприм,

амфотерицин В и др.). Инкубация посевов осуществляется при 42 °С в микроаэрофильных условиях — в атмосфере, содержа­щей не более 5 % С>2 и 10 % СО₂. Рост колоний наблюдается через 48—72 ч. Идентификация чистой культуры осуществля­ется на основании морфологии: мелкие грамотрицательные S-образно или спиралевидно (2—3 завитка) изогнутые микро­организмы, моно- или амфитрихи; используют темнопольный и фазово-контрастный методы исследования для выявления характерной подвижности — штопорообразные движения, куль-туральных, биохимических признаков, чувствительности к антимикробным препаратам. Разработаны также биохимичес­кие (хемоидентификация) и молекулярно-биологические мето­ды идентификации (см. главу 3).

---

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, ис­пользуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Применяют преимущественно для ретро­спективной диагностики — антитела определяют в парных сы­воротках в реакциях РСК, РИГА и др.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Агглютинирующие ОВ-сыворотки против патогенных кишеч­ных палочек: ОВ-коли-сыворотка О26:В6, ОВ-коли-сыворотка О111: В₄, ОВ-коли-сыворотка О55:В5 и др. Получают путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующего серовара и применяют в реакции агглютинации для идентифи­кации патогенных эшерихий.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентифи­кации шигелл. Различают групповые и моновалентные сыво­ротки. Получают путем иммунизации кроликов определенны­ми видами и сероварами S.dysenteriae, S.flexnery, S.sonnei и S.boydi с последующей адсорбцией межгрупповых и других лишних антител.

Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики и лечения.

Дизентерийная вакцина спиртовая, сухая. Содержит шигеллы Флекснера и Зонне. Применяют для лечения хронических форм дизентерии.

Препараты эубиотиков — коли-бактерин, бифидумбактерин, бификол, лактобактерин. Применяют с лечебно-профилакти­ческими целями (см. тему 13.2).

Антибиотики: полусинтетические пенициллины, цефалоспо-рины 2—4-го поколений, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолины, сульфаниламиды, полимиксин и др.

Тема 13.2. ВОЗБУДИТЕЛИ БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ И ИЕРСИНИОЗОВ. ДИСБАКТЕРИОЗ

Современная классификация бактерий рода Salmonella. Род

Salmonella включает 2 вида: S.enterica (2307 сероваров) и S.bon-gori (17 сероваров). Вид S.enterica включает 5 подвидов: enterica (I), salamae (И), arizonae (Ilia), diarisonae (Illb), houtenae (IV), indica (V), которые вьщелены на основании молекулярно-гене-тических признаков (гибридизационного анализа ДНК) и фе-нотипически различаются по биохимическим свойствам. Внут­ри подвидов сальмонеллы подразделяются на серовары по О-и Н-антигенам согласно классификации Кауфмана—Уайта. Не­обходимо помнить, что представители разных подвидов могут иметь общие или идентичные антигены. Абсолютное большин­ство сероваров (1367) относятся к подвиду enterica. Согласно ранее существовавшей классификации, сальмонеллы — предста­вители различных сероваров — рассматривались как самостоя­тельные виды и имели собственные видовые названия. В на­стоящее время старые видовые названия используют для обо­значения биоваров (сероваров), например S.enterica подвида enterica серовара typhimurium соответствует S.typhimurium, cepo-вара typhi — S.typhi, серовара paratyphi A — S.paratyphi А и т.д. Природным резервуаром бактерий S.enterica подвида enterica являются теплокровные животные, для остальных — холодно­кровные животные и окружающая среда. Возбудители заболе­ваний человека относятся к подвиду enterica.

---

С эпидемиологической точки зрения сальмонеллы, вызы­вающие заболевания человека, относят к трем основным груп­пам. Первая группа включает 3 биовара: typhi, paratyphi А и С, которые являются возбудителями строгих антропонозов (ин­фицируют только человека и передаются от человека к чело­веку прямо или опосредованно — через пищу, воду). Вторая группа включает серовары, которые адаптировались к опреде­ленному виду животных. Некоторые из этих сероваров пато­генны для человека (dublin, gallinarum, schottmulleri и др.). К третьей группе относятся большинство сероваров, не имею­щих специфических хозяев и способных инфицировать как человека, так и животных. По клинической классификации сальмонеллы подразделяют на возбудителей брюшного тифа (биовар typhi) и паратифов (биовары paratyphi А, С и schottmul­leri) и возбудителей сальмонеллезов, включающих все осталь­ные биовары сальмонелл, патогенных для человека. Большин­ство возбудителей сальмонеллезов относится к третьей группе по эпидемиологической классификации.

План

Программа

Биологические свойства возбудителей брюшного тифа, паратифов и иерсиниозов. Их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний. Дисбактериоз.

Лабораторная диагностика.

Диагностические, профилактические и лечебные препараты.

Демонстрация

Мазки из чистых культур возбудителей кишечных ин­фекций: Salmonella enterica биоваров typhi, paratyphi A, typhimurium, Proteus vulgaris. Окраска по методу Грама.

Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

Задание студентам

Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

Лабораторная диагностика кишечных инфекций.

2.1. Диагностика брюшного тифа и паратифов.

А. Бактериологическая диагностика:

выбрать материал для исследования;

учесть результаты первичного посева исследуемого материала на среду Раппопорт;

учесть результаты пересева бактерий со среды Раппопорт на среду Эндо. Описать и зарисо­вать колонии, выросшие на среде Эндо, и обо­сновать выбор подозрительных колоний для
дальнейшего исследования;

учесть результаты пересева подозрительных ко­лоний со среды Эндо на среду Ресселя;

учесть результаты идентификации выделенной чистой культуры по биохимическим свойствам;

сделать вывод и наметить план дальнейшего исследования.

Б. Серодиагностика. Проанализировать результаты реакции Видаля.

2.2. Бактериологическая диагностика сальмонеллезов:

выбрать материал для исследования;

учесть результаты первичного посева исследуемого материала на висмут-сульфит агар. Опи­сать и зарисовать колонии и обосновать выбор подозрительных колоний для дальнейшего ис­следования;

учесть результаты пересева подозрительных ко­лоний на среду Ресселя;

учесть результаты идентификации выделеннойчистой культуры по биохимическим свойствам;

---

Смотрите также файлы

• ГИПЕРТЕНЗИЯ, Эклампсия.doc

• ДИВ.doc

• ВЗРП.doc

• Внутриутробная задержка развития плода.doc

• Антенатальный 20уход_24Nov[1].doc