ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 08.09.2021
Просмотров: 7143
Скачиваний: 267
жительный инкубационный период, а также способность к персистенции, что является причиной развития хронической инфекции. Обязательной мерой профилактики заражения вирусным гепатитом при переливании крови является контроль доноров крови на носительство вирусов гепатита. Заболевания, протекающие с поражением печени — гепатитом — в качестве одного из проявлений генерализованной инфекции, способны вызывать также другие вирусы. Наиболее часто гепатит возникает при инфекциях, вызванных вирусом желтой лихорадки, герпесвирусами (CMV, HSV-l, HSV-2, EBV). Гепатит также может развиваться при тяжелых формах кори, паротита, краснухи, вирусных системных лихорадок. Лабораторная диагностика этих инфекций описана в соответствующих главах.
Тема 20.1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА КИШЕЧНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ И ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ
А План
а Программа
Биологические свойства возбудителей кишечных вирусных инфекций и вирусных гепатитов, их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.
Микробиологическая диагностика.
Диагностические, профилактические и лечебные препараты.
а Демонстрация
Реакция преципитации в агаре (встречная диффузия в геле по Оухтерлони) для обнаружения HBs-антигена в сыворотке крови больного вирусным гепатитом В.
Диагностические, профилактические и лечебные препараты.
а Задание студентам
Указать материал для исследования,
Учесть результаты выявления специфических HBs-антигенов в сыворотке крови больного с помощью РИГА.
Учесть результаты выявления специфических HBs-антигенов в сыворотке крови донора с помощью иммуноферментного метода.
Учесть результаты выявления анти-НВз-антител в сыворотке крови больного с помощью РИГА. Оценить нарастание титра анти-НВз-антител в динамике заболевания.
Учесть результаты выявления в сыворотке больного IgM против вируса гепатита А.
6. Дать краткую характеристику демонстрируемым диагностическим, профилактическим и лечебным препаратам.
а Методические указания
• Микробиологическая диагностика кишечных вирусных инфекций
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Вирусоскопическое исследование. Является одним из ведущих методов диагностики кишечных вирусных инфекций. Зрелые вирионы в испражнениях можно обнаружить с помощью метода электронной микроскопии.
Вирусологическое исследование. Применяют исключительно с целью диагностики эпидемий и вспышек кишечных вирусных инфекций. Для выделения реовирусов и ротавирусов из испражнений используют различные типы клеточных культур (HeLa, первичные культуры клеток почек обезьян и др.). Индикацию осуществляют по ЦПД, которое развивается в течение 3 нед и характеризуется появлением внутрицитоплазматичес-ких включений и неспецифической дегенерацией клеток. Ведущим методом идентификации и типирования является анализ фрагментов вирусной РНК методом электрофореза. Выделение чистой культуры вирусов ECHO — см. главу 9. Кишечные коронавирусы, калицивирусы, астровирусы и аденовирусы не удается культивировать in vitro.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вирусов в испражнениях можно определить с помощью метода ИЭМ (антигены цельных вирионов) и чувствительных серологических реакций (латекс-агглютинации, ИФА, РИФ и др.).
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные НК в испражнениях можно обнаружить с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика. Серодиагностика при кишечных вирусных инфекциях малоинформативна и применяется преимущественно с целью ретроспективной диагностики и для оценки эпидемиологической ситуации. Для определения противовирусных антител в крови пациента применяют различные серологические реакции (РИГА, ИФА, РИА и др.). Ретроспективную диагностику осуществляют методом парных сывороток. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза. Выявление (методом ИФА) специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM) свидетельствует об активной инфекции.
• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита А
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, испражнения.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Вирусоскопическое исследование. Зрелые вирионы в испражнениях можно обнаружить с помощью метода электронной микроскопии.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в испражнениях можно определить с помощью метода ИЭМ (антигены цельных вирионов) и чувствительных серологических реакций ИФА, РИА и др. В типичных случаях вирус гепатита А удается обнаружить в фекалиях за 10—14 дней до появления клинических признаков заболевания. Вирус продолжает выделяться с испражнениями в течение 2—3 нед после начала желтухи.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные нуклеиновые кислоты в крови пациента на ранних сроках болезни обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики вирусного гепатита А. Для определения противовирусных антител в крови пациента применяют различные серологические реакции (РИГА, ИФА, РИА и др.). Серодиагностику осуществляют методом парных сывороток (диагностическое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза) или на основании выявления (методом ИФА) специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об активной инфекции. Последние присутствуют в сыворотке крови с первых дней заболевания и исчезают не ранее чем через 3—4 мес.
Для выявления IgM против вируса гепатита А используют различные варианты ИФА. Противовирусные IgM можно выявить следующим способом: на первом этапе на стенках лунок пластиковых планшетов адсорбируют антитела против человеческих IgM, на втором этапе в лунки вносят испытуемую сыворотку в различных разведениях. Фиксированные анти-IgM-антитела связывают все IgM сыворотки, в том числе и противовирусные антитела. Далее вносят стандартный антиген вируса гепатита А и меченые антитела против этого антигена. После инкубации и тщательного промывания буферным раствором с детергентами в лунки добавляют субстрат и хромоген. В положительном случае через несколько минут наблюдается появление окраски.
• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита В
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, биоптат печени.
|
Период болезни HBs HBc HBe Аг at at at at Инкубационный период + — — + — Продромальный период + — ± (IgM) + — Острый период + — + (IgM) + — Реконвалесценция: ранняя — — + — ± поздняя — + + (IgG) — + Хроническая активная форма + ± + (IgG) + ± Хроническая бессимптомная + — — — ± форма (носительство) |
чально на поверхности твердой фазы (полимера) адсорбируют ати-HBs-антитела из стандартной сыворотки. Обычно используют лунки микротитрационных панелей. На втором этапе в отмытые лунки вносят исследуемую сыворотку крови больного. При наличии ДДу-антигена он связывается фиксированными на твердой фазе антителами. На третьем этапе добавляют анти-ЯЯ5-антитела, несущие ферментную метку. В качестве метки используют фермент пероксидазу. Для выявления связанных антигеном меченых антител в отмытые лунки добавляют субстрат — пероксид водорода и хролюген — ортофенилендиамин, который окисляется в присутствии кислорода, вьщеляющегося при разложении пероксида водорода под воздействием фермента с образованием продуктов желто-коричневого цвета. Степень окраски отражает интенсивность связывания меченых антител, которая пропорциональна количеству HBs-антигена в исследуемой сыворотке.
Реакции РИГА, ИФА, РИА и другие могут быть использованы и для выявления Д#е-антигена в исследуемой сыворотке.
В биоптатах печени при активной форме инфекции можно выявить наличие НВс-антигена, ассоциированного с гепатоци-тами, методом ИФ.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные ДНК в крови пациента обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика. На разных стадиях заболевания и при разных формах инфекции (острой, хронической, вирусоноситель-стве) в крови присутствуют антитела к разным антигенам вируса гепатита В (HBs, HBc, НВё), что используют с целью диагностики (см. табл. 20.1.1). Для определения антител применяют различные серологические реакции: РИГА, ИФА, РИА и др. (см. выше).
Так, для выявления анти-Я5е-антител в исследуемой сыворотке необходим соответствующий эритроцитный диагности-кум — эритроциты, нагруженные стандартным Я#е-антигеном. Реакцию, как правило, ставят с парными сыворотками. В тесте ИФА на поверхности твердой фазы адсорбируют стандартный НВе-антиген, на втором этапе вносят исследуемую сыворотку в десятикратных разведениях, инкубируют, отмывают и добавляют меченую антиглобулиновую сыворотку.
Выявление антител к Ш?с-антигену свидетельствует об активной инфекции и является одним из методов контроля крови доноров. Определение анти-Я#с IgM является ведущим методом дифференциальной диагностики острого и хронического активного вирусного гепатита В.
• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита С МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. 316
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Экспресс-методы диагностики. Молекулярно-биологи-ческие исследования. Вирусную РНК в крови пациента обнаруживают с помощью ПЦР или методом ДНК-зондов.
Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики хронического вирусного гепатита С и контроля крови доноров. Противовирусные антитела в крови пациентов определяют с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА, РИА и др.) с рекомбинантным вирусным антигеном. Необходимо иметь в виду, что в остром периоде заболевания антитела в крови присутствуют в низком титре и часто в комплексе с антигеном, поэтому их выявление не всегда удается.
• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита D
МАТЕРИАЛ ДЛЯ
ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие дельта-антигена в крови можно определить с помощью чувствительных серологических реакций ИФА, РИА и др.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусную НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики вирусного гепатита D и контроля крови доноров. Антитела к дельта-антигену в крови пациентов определяют с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА, РИА и др.).
• Микробиологическая
диагностика вирусного гепатита G
МАТЕРИАЛ
ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования:
Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса гепатита G в крови можно определить с помощью чувствительных серологических реакций ИФА, РИА и др.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусную НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики вирусного гепатита G и контроля крови доноров. Антитела к антигенам вируса гепатита G в крови пациентов определяют с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА, РИА и др.).
• Микробиологическая диагностика вирусного гепатита Е
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, испражнения, желчь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Вирусоскопическое исследование. Зрелые вирионы в испражнениях и желчи можно обнаружить с помощью метода электронной микроскопии.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в испражнениях можно определить с помощью метода ИЭМ (антигены цельных вирионов).
Молекулярно-биологические исследования. Вирусную НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики вирусного гепатита Е. Противовирусные антитела в крови пациентов определяют с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА, РИА и др.). Серодиагностику осуществляют методом парных сывороток (диагностическое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза) или на основании выявления (методом ИФА) специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об активной инфекции.
• Микробиологическая
диагностика желтой лихорадки
МАТЕРИАЛ
ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.
МЕТОДЫ
ДИАГНОСТИКИ:
Экспресс-методы диагностики. Молекулярно-биологические исследования. Вирусные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале можно обнаружить с помощью ПЦР.
Серодиагностика. Является ведущим методом диагностики желтой лихорадки. Противовирусные антитела в крови пациентов определяют с помощью чувствительных серологических реакций (РСК, РТГА, ИФА, РИА и др.). Серодиагностику осуществляют методом парных сывороток (диагностическое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза) или на основании выявления (методом ИФА) специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об активной инфекции.
• Диагностические, профилактические и лечебные препараты
Стандартный Я&-антиген. Применяют для серодиагностики вирусного гепатита В.
Иммуноглобулин нормальный человеческий. Получают из крови человека (донорской, плацентарной) путем фракционирования. Применяют для профилактики вирусного гепатита А при контакте (создание пассивного иммунитета).
Вакцина субъединичная против гепатита В. Получена генно-инженерным путем, содержит HBs-антиген вируса гепатита В. Применяют для создания активного иммунитета с целью профилактики вирусного гепатита В. Вводят парентерально контингентам риска.
Иммуноглобулин человеческий анти-Я1?К Получают путем фракционирования из крови доноров с высоким титром антител к вирусу гепатита В. Применяют для профилактики вирусного гепатита В при контакте (создание пассивного иммунитета).
Вакцина живая ослабленная против желтой лихорадки. Содержит авирулентный штамм вируса желтой лихорадки. Применяют для профилактики желтой лихорадки (создание активного иммунитета). Вводят контингентам риска.
Противовирусные препараты: интерферон человеческий лейкоцитарный; интерферон рекомбинантный. Применяют для лечения вирусного гепатита С.
Глава 21
ВИРУСЫ, ПОРАЖАЮЩИЕ КОЖУ, СЛИЗИСТЫЕ ОБОЛОЧКИ, ЖЕЛЕЗИСТЫЕ И ЛИМФОИДНЫЕ ТКАНИ