Файл: tarchevskiy_i_a_signal_nye_sistemy_kletok_rasteniy.doc

ВУЗ: Не указан

Категория: Не указан

Дисциплина: Не указана

Добавлен: 01.12.2019

Просмотров: 3443

Скачиваний: 3

ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.



(3-1,3-Глюканаза-» мРНК


Рис. 54. Схема элиситориндуцируемого образования клетками растений белков прямого антипатогенного действия

ДФ - дефенсины; К - кутикула; КС - клеточные стенки; ПК - про-теинкиназы; Пр - протеиназы; РИБ - рибосомоинактивирующие бел­ки; ФРТ - факторы регуляции транскрипции

каназ не только разрушать клеточные стенки грибов, но и продолжать деградацию освобождающихся фрагментов хи­тина и (3-1,3-глюканов, снижая их элиситорные способности [Salzer et al., 1997].

Патогениндуцируемые белки растений, нарушающие функционирование клеточной мембраны патогенов. Под влиянием инфицирования и ряда других неблагоприятных факторов в растениях быстро образуются модификаторы свойств клеточных мембран патогенных грибов и бактерий (см. рис. 54) - относительно небольшие (от 2 до 9 кДа) по­липептиды, подразделяемые на целый ряд семейств: тиони-ны, дефенсины, липидпереносящие белки, хевеины, ноти-ны, снейкины и др. [Garcia-Olmedo et al., 1998]. Список бак­терицидных и фунгицидных полипептидов продолжает по­полняться. Все они имеют идентичный план строения - нес­колько дисульфидных мостиков, гидрофобное ядро, одну протяженную а-спираль и три или четыре антипараллель-но расположенных небольших (3-полос [Song et al., 1997; Garcia-Olmedo et al., 1998; Fant et al., 1999]. Так, у одного из

тионинов - у-1-пуротионина [Bruix et al., 1995], насчитыва­ется четыре дисульфидных мостика, а-спираль, включаю­щая участок полипептида от 16 до 28 аминокислоты, три Р-полосы, включающие 1-6-, 31-34- и 39^7-остатки амино­кислот. У вискотоксина дисульфидные мостики соединяют 3 и 40, 4 и 32, 16 и 26 остатки цистеина [Orru et al., 1997], а у у-тионина из сорго - 3 и 47, 14 и 34, 20 и 41, 24 и 43 [Nitti et al., 1995].

Примечателен факт принципиального сходства строе­ния и относительно высокой гомологии отдельных участ­ков этих полипептидов с нейротоксинами скорпиона и де-фенсинами насекомых, что свидетельствует об эволюцион­ной стабильности этих важных защитных соединений [Zinn-Justin et al., 1996; Thevissen et al., 1997; Kushmerick et al., 1998]. Следует ожидать, что взаимодействующие с ними ре­цепторы клеточной мембраны бактерий и грибов также об­ладают консервативной структурой.

Образование дефенсинов растений индуцируется не только патогенами, но и промежуточными продуктами сигнальных систем клеток и некоторыми стрессовыми фитогормонами, например МеЖК и этиленом [Terras et al., 1998; Shah et al., 1999], однако регуляция этими со­единениями экспрессии генов различных дефенсинов мо­жет сильно отличаться. Так, МеЖК не действовал на син­тез некоторых изоформ дефенсинов [Epple et al., 1997]. Как правило, салициловая кислота также не индуцирова­ла образования дефенсинов [Epple et al., 1997; Terras et al., 1998; Shah et aL, 1999].

При выяснении причин ингибирующего действия на грибы тионинов и дефенсинов было обнаружено, что они вызывают изменение мембранного потенциала клеточной мембраны гриба [Froy, Gurevitz, 1998], усиливают погло­щение Са2+, выход К+, подщелачивание среды [Thevissen et al., 1996; De Samblanx et al., 1997], ингибируют №+-кана-лы [Kushmerick et al., 1998]. Дефенсины, тионины и липид­переносящие белки в разной степени вызывали аггрега-цию и усиление проницаемости для различных веществ ис­кусственных фосфолипидных липосом [Caaveiro et al., 1997]. Считается, что тионины могут подавлять рост гри­бов, непосредственно (неспецифически) действуя на их клеточные мембраны, а дефенсины - связываясь с распо-


ложенными в них специфическими рецепторами [Thevissen et al., 1996].

Интересно, что грибы в ответ на действие дефенсинов включают пока еще неизвестный механизм подавления их образования у растений [Sharma, Lonneborg, 1996]. Этот фе­номен проявляется через сутки и более после начала дейст­вия антигрибных полипептидов на грибы и является еще од­ним подтверждением гипотезы генетического пинг-понга между патогеном и хозяином.

Патогениндуцируемые белки растений, вызывающие нарушение процессов трансляции у патогенов. Рибосомо-инактивирующие белки (РИБ) относятся к широко распро­страненным [Gasperi-Campani et al., 1985; Stirpe, Barbieri, 1986; Barbieri et al., 1993; Citores et al., 1993; и др.] защитным антибиотическим стрессовым белкам, синтез большинства которых начинается после воздействия на растения биоген­ных и абиогенных стрессоров [Stirpe et al., 1996; Rippmann et al., 1997; и др.] (см. рис. 54). Следует отметить, что неко­торые из РИБ синтезируются конститутивно, например в семенах и плодах многих растений [Vigers et al., 1991], где вместе с другими белками (хитиназами, [3-1,3-глюканазами, ингибиторами протеиназ) обеспечивают защиту от бакте­рий, грибов и вирусов. В последние годы РИБ привлекли к себе особое внимание, так как обнаружилось, что они обла­дают противоопухолевой активностью [Langer et al., 1999; Sharma et al., 1999].

В настоящее время известны десятки патогениндуциру-емых представителей РИБ у растений различных семейств. Названия этих РИБ обычно отражают родовую или видо­вую принадлежность растений: аспарины из Asparagus offi-cinalis [Bolognesi et al., 1990], волкенсин из Avenia volkensii [Sparapani et al., 1997], бриодины из Bryonia dioica [Bolognesi et al., 1990], колоцины из Citrullus colocynthis [Bolognesi et al., 1990], диантин из Dianthus caryophyllus [Hong et al., 1996], гелонин из Gelonium multiflorum [Brigotti et al., 1999], луф-фины и луффацилин из Luffa cylindrica [Brigotti et al., 1995], лихнин из Lychnis chalcedonica [Bolognesi et al., 1990; Brigotti et al., 1995], мапалмин из Manihot palmata [Bolognesi et al.,1990], MOR и MOR 1 из Marah oreganus [Bolognesi et al., 1996], момордины [Bolognesi et al., 1996], моморхарины

| Mock et al., 1996; Wang, Ng, 1998] и моморкохин [Bolognesi ct al., 1990] из Momordica charantia, фитолакцин из Phytolacca americana [Barbieri et al., 1992], рицин из Ricinus communis [Wang, Ng, 1998; Sharma et al., 1999], эбулитины из Sambucus ebulus [De Benito et al., 1995], нигритины и ниг-рины из Sambucus nigra [Battelli et al., 1997], сапорины из Saponaria officinalis [Bolognesi et al., 1996], кириловины и трихокирин из Trichosanthes kirilowii [Brigotti et al., 1995], тритины из Triticum aestivum [Brigotti et al., 1995], синамо-мин и камфорин из Cinnamomum camphora [Li, Chory, 1997] и т.д.

Определение первичной структуры многих РИБ показа­ло, что они обладают более или менее хорошо выраженной гомологией [Funatsu et al., 1991; Wang, Ng, 1998] и что все они могут быть подразделены на два основных типа: одно-цепочечные (РИБ I) и двухцепочечные (РИБ II). Некото­рые из них гликозилированы [Di Maro et al., 1999]. Молеку­лярные массы большинства РИБ находятся в пределах 28-32 кДа. Защита против патогенных бактерий и грибов обеспечивается ингибирующим действием РИБ на процесс трансляции в рибосомах, а именно блокированием фактора элонгации [Citores et al., 1993]. Специальные исследования молекулярного механизма подавления трансляции позволи­ли установить, что РИБ вызывают расщепление N-связи между рибозой и аденином, причем в специфическом нук-леотиде А-4256, который находится в петле 28S в рибосо-мальной РНК, входящей в состав 60S субъединицы рибосо­мы [Fong et al., 1991; Brigotti et al., 1999]. Считается, что де-иуринизация нуклеотида А-4256 нарушает динамическую гибкость структуры рибосом, которая необходима для осу­ществления синтеза очередной пептидной связи [Holmberg, Nygard, 1996].


Накапливается все больше фактов не только о N-глико-шдазной, но также о суперспиральзависимой эндонуклеаз-ной [Liu, Pu, 1999], РНКазной [Obrig et al., 1985; Mock et al., 1996], ДНКазной [Nicolas et al., 1998] активностях РИБ. Об­наружен также новый фермент - сайт-специфическая рРНК-лиаза, которая способна расщеплять молекулу РНК на 3'-участке апуринового сайта [Ogasawara et al., 1999] и ра­ботающая в комплексе с N-гликозидазой, обеспечивая не


только точечное видоизменение, но и последующее раз­рушение рибосомной РНК патогенов. У одного из РИБ -камфорина, обнаружена супероксиддисмутазная актив­ность [Li, Chory, 1997].

Получены любопытные данные о связи структуры не­которых РИБ с другими стрессиндуцируемыми белками. Так, N-концевой участок одного из РИБ типа I отличался от аналогичного участка хитиназы лишь одной аминокисло­той [Di Maro et al., 1999]. Обнаружена гомология между N-концом жасмонатиндуцируемого белка 60 кДа и каталити­ческим доменом одного из РИБ [Fong et al., 1991]. Оказа­лось, что последний может образовываться из белка 60 кДа в ходе двухступенчатого процессинга.

Многие РИБ вызывают гибель не только грибов и бак­терий, но и клеток растений и животных [Chaudhry et al., 1994; Bolognesi et al., 1996]. В клеточной мембране найден специфический РИБ I-связывающий белок, причем РИБ I не проникает через плазмалемму в неинфицированные про­топласты, в отличие от инфицированных вирусами, что предотвращает их размножение [Watanabe et al., 1997]. РИБ I проявляют гомологию с А-цепью РИБ II [Wang, Ng, 1998], обладающей каталитической активностью, а проник­новение РИБ II в клетки (перенос А-цепи) обеспечивается с помощью В-цепи, отвечающей за узнавание специфических рецепторных белков клеточной мембраны [Sharma et al., 1999]. В-цепь обладает галактозоспецифичным лектино-вым доменом, узнающим галактозные остатки на поверх­ности клеточной мембраны [Chaudhry et al., 1994].

Гены перечисленных в разделе десятков белков облада­ют определенной видовой, тканевой и органоидной специ­фичностью. Вид и интенсивность синтеза белков зависят от природы элиситорных сигналов и времени, прошедшего после начала их действия. Можно быть абсолютно уверен­ным, что в одном опыте на определенном объекте исследо­ватель не сможет обнаружить значительную часть этих белков. В этом отношении представляется показательным исследование пространственных и временных характе­ристик транскриптов различных белков, образующихся в листьях бобов в месте инокуляции патогенных бактерий и на различном расстоянии от него [Meier et al., 1993]. В мес-

те инокуляции обнаруживались мРНК хитиназ, фенилала-нин-аммиак-лиазы, халконсинтазы, в небольшой степени -липоксигеназ. На расстоянии 0,5- 0,7 см от места инокуля­ции было зарегистрировано высокое содержание мРНК ли­поксигеназ, не было найдено мРНК халконсинтазы и лишь в небольших количествах обнаруживались мРНК хитиназы и фенилаланин-аммиак-лиазы. На еще большем удалении можно было найти лишь мРНК липоксигеназ, но их содер­жание было достаточно высоким. Естественно, что по мере увеличения времени действия патогенов системные элиси-горные сигналы распространяются на все большее расстоя­ние и в удаленных от места инфекции клетках индуцирует­ся синтез защитных белков и фитоалексинов.


ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЭЛИСИТОРОВ И ИНТЕРМЕДИАТОВ СИГНАЛЬНЫХ СИСТЕМ

КЛЕТОК ДЛЯ СОЗДАНИЯ ПРЕПАРАТОВ,

ПОВЫШАЮЩИХ УСТОЙЧИВОСТЬ РАСТЕНИЙ

К ПАТОГЕНАМ

Материалы, приведенные в предыдущем разделе, свиде­тельствуют, что элиситоры, интермедиаты сигнальных сис­тем и стрессовые фитогормоны индуцируют образование большого набора защитных белков, в том числе фермен­тов, катализирующих образование антипатогенных ве­ществ небелковой природы. Некоторые из защитных со­единений повышают устойчивость самих растений, другие оказывают ингибирующее действие на развитие патогенов.

Все это приводит к снижению отрицательного действия патогенов на продукционные процессы и урожай растений, что не могло не обратить на себя внимания. Было предло­жено достаточно много рекомендаций практического ис­пользования препаратов, содержащих природные элисито­ры, интермедиаты сигнальных систем и стрессовые фито­гормоны или их химические аналоги. Часть этих предложе­ний запатентована, и налажены выпуск и реализация анти-фитопатогенных препаратов.

Из элиситоров чаще всего использовались арахидоновая кислота и производные хитина - олигохитозаны. В качест­ве сырья для получения арахидоновой кислоты используют морских животных и некоторые органы теплокровных жи­вотных. Первый препарат для повышения устойчивости растений к патогенам на основе арахидоновой кислоты был предложен более 20 лет тому назад [Метлицкий и др., 1978, 19826; Озерецковская, 1994]. Установлено, что после пред­посевной обработки клубней картофеля или листьев в пе-

риод бутонизации значительно повышалась комплексная устойчивость к фитофторозу, ранней сухой пятнистости, ризоктониозу и парше. Прибавка урожая составляла в сред­нем 25%. Обработка арахидоновой кислотой защищала клубни картофеля и при хранении [Чаленко и др., 2001]. За­щитное действие арахидоновой кислоты от фитопатогенов было подтверждено при исследовании ее действия на тома­ты и сахарную свеклу [Метлицкий, Озерецковская, 1985].

Установлено, что арахидоновая и эйкозапентаеновая кислоты индуцируют не только локальную, но и системную пролонгированную устойчивость картофеля к возбудителю фитофтороза [Чалова и др., 1989]. Было также обнаруже­но, что арахидоновая кислота повышает устойчивость к не­матодам при выращивании растений в теплицах [Зиновьева и др., 1996], особенно в сочетании с метилжасмонатом [Зи­новьева и др., 1998].

В Российской Федерации налажен производственный выпуск антипатогенных препаратов на основе арахидоно­вой кислоты.

В последние годы широко испытывается действие на ус­тойчивость растений к патогенам еще одного элиситора -хитозана. Обнаружено, что максимальная фитофтороус-тойчивость картофеля проявляется при использовании во­дорастворимого хитозана с молекулярной массой 5 кДа [Переход и др., 1997; Васюкова и др., 2000]. Хитозан повы­шал также устойчивость к нематодам растений томатов в условиях тепличного хозяйства [Зиновьева и др., 1999], при­чем индуцировал не только локальную, но и системную ус­тойчивость растений к фитофторе и нематодам [Васюкова и др., 2001].