Сульфиды вступают в реакцию с ацетатом свинца, вследствие чего образуется осадок сульфида свинца черного или буро-черного цвета.

2. 
   Техника выполнения анализа.
   

В пробирку вносят 5 капель раствора яичного белка, 5 капель 30% раствора едкого натрия и 2 капли ацетата плюмбума. Смесь аккуратно нагревают на спиртовке до кипения и кипятят. Через некоторое время появляется буро-черный или черный окрас.

2. 
   Проведение итогов.
   

Наблюдать за появлением осадка и сделать вывод о наличии серосодержащих аминокислот и заполнить таблицу 3.4.

Таблица 3.4. – Результаты проведения реакции на выявление серосодержащих аминокислот

Пищевые образцы	Количество, капли			Наблюдение за изменением цвета
	Объект исследования	Едкого натрия, 30%	Ацетат плюмбума
Яичный белок
Желатин 1%

Вывод: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. 
   Реакция осаждения белков
   

Существует большое количество разных реакций осаждения белков. Реакции осаждения в зависимости от используемого осадителя могут быть обратимые и необратимые. В случае обратных реакций белки не поддаются глубоким изменениям, а осаждения, которые получают, могут быть снова растворены (в воде), только при этом сохраняют свои природные свойства. При необратимых реакциях осажденные белки поддаются глубоким изменениям. Осадки, которые получают, не могут быть снова растворены, то есть белки денатурируют.

При денатурации изменяется внутреннее строение полипептидных цепочек белков, разрываются некоторые связи, за исключением ковалентных, изменяются вторичная, третичная и четвертичная структура. Белки теряют гидрофильные и получают гидрофобные способности.

Денатурация белков осуществляется вследствие действий высокой температуры

---

, ультрафиолетового излучения, действий сильных кислот, солей тяжелых металлов.

Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами

5.1. Приборы и реактивы:

Штатив с пробирками, пипетки на 1 см³, капельницы, концентрированная сульфатная, хлоридная и нитратная кислоты.

Пищевые образцы: яичный белок.

5.2 Суть метода.

Концентрированные минеральные кислоты (кроме фосфорной кислоты) вызывают необратимое осаждение белков из растворов. Осаждение белка объясняется явлениями дегидратации частиц, уменьшения заряда, разрушения электростатических связей и т. д. Избыток минеральных кислот (за исключением азотной) растворяет выпавший осадок белков вследствие их гидролиза.
5.3 Техника выполнения анализа.

В три пробирки осторожно наливают по 0,5 см³ концентрированной кислоты: в первую – серную, во вторую – соляную и в третью – азотную. Во всех пробирках осторожно наслаивают на кислоту по 1 см³ раствора яичного белка. На границе двух жидкостей появляется осадок белка в виде небольшого белого кольца. Каждую пробирку осторожно встряхивают. В первой и второй пробирках осадок растворяется; в третьей – с азотной кислотой – осадок при встряхивании не исчезает. Реакция используется для качественного определения белка в биологических средах.
5.4 Проведение итогов

Сделать вывод о способности белков выпадать в осадок с помощью солей.

Вывод: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

5.5. Биохимические упражнения

Напишите реакцию образования глициналанина.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №2

Тема: «Свойства ферментов».

Цель: приобрести практические навыки и умения для проведения реакций при участии ферментов.

После проведения работы студент должен:

• 
  Знать: порядок и методы проведения реакций на выявление ферментов.
  
• 
  Уметь: проводить реакции на качественное и количественное выявление ферментов.
  

Контрольные вопросы

1. 
   Дайте определения ферментам.
   
2. 
   Какая биологическая роль ферментов?
   
3. 
   Охарактеризуйте свойства ферментов
   
4. 
   Приведите факторы, которые влияют на активность ферментов?
   
5. 
   Охарактеризуйте классификацию ферментов.
   
6. 
   Как влияют на крахмал α – и β – амилазы? Оптимальные условия для их действия.
   
7. 
   Ферменты, каких классов содержаться в муке. Какое их содержание в зависимости от вида и сорта муки.
   

---

Ход работы

1. 
   Инструктаж по охране труда.
   
2. 
   Инструктаж по выполнению работы.
   
3. 
   Выполнение студентами опытов и обработка результатов.
   
4. 
   Подведение итогов занятия.
   
5. 
   Оформление отчетов.
   
6. 
   Защита отчетов.
   
7. 
   Уборка рабочих мест.
   

1. 
   Определение термолабильности ферментов
   

Обеспечение работы:

1. 
   Приборы и реактивы:
   

Термостат, нагретый до 37. °С, холодильник, пипетки на 1, 2 см³, капельницы, нагревательный прибор, 1% раствор крахмала картофельного, 0,1н раствор йода, разбавленный непосредственно перед определением до 0,004н.

Объект исследования: слюна, разбавленная в 5 раз.

1.2 Суть метода.

При низкой температуре ферментативные реакции проходят медленно. По мере повышения температуры скорость ферментативных реакций обычно повышается. При достижении некоторого оптимума повышения температуры уже приводит к падению активности ферментативных реакций. Так, уже при температуре раствора 50-60. °С часто происходит температурная инактивация ферментов. Для большинства ферментов температурный оптимум лежит в пределах 37-50 °С. Низкие температуры не инактивируют ферменты. Как правило, они только замедляю или останавливают их действие.

Влияние температуры на активность ферментов легко можно проследить на примерах действий на крахмал ферментов слюны.

Фермент амилаза катализирует гидролиз крахмала до декстринов и мальтозы. Такой процесс происходит, например, в ротовой полости при употреблении с едой продуктов, которые содержат крахмал: картофель, хлеб, макаронные изделия. Источником амилазы является слюна. Этот фермент находится и в других отделах пищеварительного тракта, а также в печени и других тканях. Разные типы амилаз используются в пищевой промышленности, в пивоварении, где их источником являются растения (ячмень).

Действие амилаз распознают по исчезновению синего окраса, который образуется при добавлении йода.

1.3 Техника выполнения работы

В 3 пробирки наливают по 1 см³ источника амилазы, одну из них кипятят не меньше 5 минут и дают остынуть; другую кладут в холодильник для охлаждения до 10. °С; третью – ставят в термостат. Потом ко всем трем пробиркам приливают по 3 капли крахмала и ставят на 10 минут при температуре 37 °С. Через 10 минут ко всем пробиркам приливают по 1-2 капле раствора йода. Если крахмал не переварился амилазой, то образуется синий окрас. При наличии продуктов гидролиза цвет с йодом становится фиолетовым, красным или желтым в зависимости от размера образованных молекул декстринов. Амилодекстрины окрашиваются йодом в фиолетовый окрас, эретродекстины – в красный, ахродекстрины – образуют желтый окрас, как и мальтоза. По цвету определяют глубину расщепления крахмала.

---

1.4 Проведение итогов

Сделать вывод о влиянии разных температур на активность амилазы, судя по окрасу, который образовался в каждой из трех пробирок.

Вывод: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. 
   Влияние рН среды на активность амилазы
   

Обеспечение работы:

1. 
   Приборы и реактивы:
   

Буферныйраствор рН которого равен 5,0 (10,30 см³ 0,2М NaHPO₄H₂O смешивается с 9,70 см³ 0,1М раствора лимонной кислоты); штатив с пробирками, закрытыми пробками; пипетки на 1-2 см³; буферный раствор рН 8 (19,45 см³ 0,2М NaHPO4 смешивается с 0,55 см³ 0,1М раствора лимонной кислоты); крахмал, 1% раствор; раствор йода калия йодиде 0,004Н, приготовленный путем разбавления с 0,1Н непосредственно перед исследованием. В такой концентрации йод разбавляет крахмал в синий цвет и не останавливает действия амилазы.

Объект исследования: источник амилазы слюна, разбавленная в 5 раз.

2. 
   Суть метода
   

Ферменты очень чувствительны к изменению кислотности среды, в которой они действуют. Для каждого фермента есть определенная оптимальная концентрация водородных ионов, при которой он наиболее активен. Смена активной кислотности среды в ту или другую среду от оптимума рН вызывает снижение активности фермента.

Влияние рН на действие фермента можно проиллюстрировать на примере действий амилазы слюны на крахмал. Активность амилазы слюны выше всего при почти нейтральной реакции (рН = 6,8 – 6,9) и подавляется как кислотами, так и щелочами.

3. 
   Техника выполнения работы
   

В 3 пробирки наливают по одному см3 источника амилазы, в одну из них прибавляют 1 см3 буфера с рН 5,0; в другою столько же с рН 6,8; в третью – с рН 8. Для приготовления буферных растворов смешивают 0,2М раствор натрий ортофосфат и 0,1М раствор лимонной кислоты в соотношении приведенных в таблице 3.1

В каждую пробирку приливают по 2 капли йода и по 3 капли крахмала. Пробирки закрывают пробками и оставляют их при комнатной температуре, наблюдают за исчезновением синего окраса в каждой пробке.

Примечание: если под действием двух капель йода крахмал не посинел, добавляют еще одинаковое количество раствора крахмала во все пробирки пока не появится синий окрас.

---

4. 
   Подведение итогов
   

Определить при каком значении рН быстрее гидролизуется крахмал и сделать вывод о влиянии рН среды на активность амилазы. Результаты и выводы привести в виде таблицы 4.1.

Таблица 4.1 – Результаты исследования о влиянии рН на активность амилазы.

№	Количество 0,2М раствора Na2PO4, см3	Количество 0,1М раствора лимонной кислоты, см3	рН смеси	Время обесцвечивание синего цвета, мин.	Выводы
1	10,3	9,7	5
2	15,45	4,55	6,8
3	19,45	0,55	8

3. 
   Определение специфичного действия ферментов.
   

Обеспечение работы:

1. 
   Приборы и реактивы:
   

Штатив с пробирками, термостат или водяная баня 38. °С, капельницы, пипетки, сахароза, 1% и 0,5% раствор; крахмал, 1% раствор; едкий натрий, 10% раствор; реактив Фелинга.

Объект исследования: источник амилазы - слюна, разбавленная в 5 раз.

2. 
   Суть метода
   

Ферментам присуща специфичность действий, поскольку они способны катализировать только конкретные химические элементы.

Ферменты специфичны относительно как типа реакции, который канализируют, так и субстратов, на которые они действуют. Некоторым ферментам присуща абсолютная специфичность, которая оказывается с действий только на один любой субстрат. Высокая специфичность ферментов определяется тем, что только некоторые строг определенные функциональные группы, которые входят в состав ферментов могут брать участие в образовании фермент-субстратных комплексов.

Амилаза слюны ускоряет гидролиз только полисахаридов, не влияя на дисахариды. Мальтоза слюны ускоряет гидролиз дисахарида мальтозы, который образуется при гидролизе крахмала, но совсем не влияет на другой дисахарид – сахарозу. Сахароза не имеет свободной альдегидной группы, потому не дает реакции с реактивом Фелинга. Реакция может быть позитивной только в том случае если сахароза расщепится на свои составные - глюкозу и фруктозу.

---

Смотрите также файлы

• Орынбасар Аяулым Хайдарызына.docx

• Работа с типами данных в Microsoft Excel Многие пользователи Excel не видят разницы между понятиями формат ячеек.docx

• Лр 3 Решение практических задачах путем сведения их к транспортной задаче Лабораторная работа 3 Тема работы Решение практических задачах путем сведения их к транспортной задаче Цель работы.doc

• 1. Теория государства и права понятие и общая характеристика 3.docx

• Происхождение, быт и верования восточных славян в древности.docx