ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 16.03.2019
Просмотров: 52738
Скачиваний: 1935
140
плазмы А(II) и В(III) - реципиентам 0(I) группы. Плазму 0(I) переливают реципиентам той
же группы крови.
В соответствии с современным правилом трансфузиологии необходимо
переливать только одногруппную (по системе АВ0) и однорезусную кровь.
При экстремальных ситуациях можно перелить кровь универсального донора,
воспользоваться правилом Оттенберга или перелить резус-положительную кровь в объёме
не более 500 мл. Но это абсолютно недопустимо у детей.
Определение группы крови и резус-фактора
Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим
сывороткам
Для определения групповой принадлежности крови необходимо следующее
оснащение: два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I(0), II(А), III
(В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV(АВ) (в каждую ампулу с
сывороткой опускают сухую чистую пипетку), флакон с изотоническим раствором
хлорида натрия с пипеткой, чисто вымытая сухая тарелка, предметные стекла, стерильные
копьевидные иглы для прокола кожи пальца, стерильные марлевые шарики, спирт.
Определение проводят в помещении с хорошим освещением, при температуре от 15 до 25
° С.
Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указанием
группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без
этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для определения группы
крови по системе АВ0 выпускают с определённой цветовой маркировкой: I(0) -
бесцветная, II (А) - голубая, III (В) - красная, IV(АВ) - жёлтая. Маркировка имеется на
этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки I(0) полос нет, сыворотки II (А) -
две полосы синего цвета, сыворотки III (В) - три полосы красного цвета и сыворотки
IV(АВ) - четыре полосы жёлтого цвета. Сыворотки хранят при температуре 4-10 ° С.
Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула - сохранной. Наличие хлопьев,
осадка, помутнения являются признаками непригодности сыворотки. Титр сыворотки
должен быть не менее 1:32, активность - высокая: первые признаки агглютинации должны
появляться не позднее чем через 30 с. Сыворотки с истекшим сроком хранения к
использованию непригодны.
Тарелку делят цветным карандашом на четыре квадрата и в направлении по часовой
стрелке обозначают квадраты I(0), II (А), III (В). В соответствующий квадрат тарелки
пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I(0), II (А), III (В) групп.
Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьём. Первую
каплю крови снимают марлевым шариком, последующие капли разными уголками
предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно
размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки.
Затем путём покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой.
Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю
изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путём покачивания тарелки и
через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации (рис. 37, см. цв. вкл.).
При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зёрнышки из склеившихся
эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и
141
перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные,
равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зёрен. Возможны следующие четыре
комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками I(0), II(А), III(В) групп.
1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь - I(0)
группы.
2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий
и положительная с сыворотками I(0) и III(В) групп. Исследуемая кровь - II(А) группы.
3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III(В) группы в обеих
сериях и положительная с сывороткой I(0) и III(А) групп. Исследуемая кровь - III(В)
группы.
4. Сыворотки I(0), II(А), III(В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях.
Кровь принадлежит к IV(АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо
провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV(АВ) группы по той
же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно
отнести исследуемую кровь к IV(АВ) группе.
Выявление других комбинаций свидетельствует о неправильном определении
групповой принадлежности крови больного.
Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают
соответствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего
исследование, с указанием даты исследования.
Ошибки при определении групповой принадлежности крови возможны в ситуациях,
когда при фактическом наличии агглютинации она не выявляется или, наоборот,
выявляется агглютинация при её фактическом отсутствии. Невыявленная агглютинация
может быть обусловлена: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой
агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови,
добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при
высокой температуре окружающей среды.
Чтобы избежать ошибок, необходимо использовать активные, с достаточно высоким
титром сыворотки при соотношении объёма исследуемой крови и стандартной сыворотки
1:5, 1:10. Исследование проводят при температуре не выше 25 ° С, оценивать результаты
следует не ранее чем через 5 мин от начала исследования.
Выявление агглютинации при её фактическом отсутствии может быть обусловлено
подсыханием капли сыворотки и образованием «монетных» столбиков эритроцитов или
проявлением холодовой агглютинации, если исследование проводят при температуре
окружающей среды ниже 15 ° С. Добавление капли изотонического раствора хлорида
натрия к исследуемой крови и сыворотке и проведение исследований при температуре
выше 15 ° С позволяют избежать указанных ошибок. Ошибки в определении группы
крови всегда связаны с нарушением методики исследования, поэтому необходимо
тщательное соблюдение всех правил исследования.
Во всех сомнительных случаях необходимо повторное исследование групповой
принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью
стандартных эритроцитов.
142
Определение группы крови по системе АВ0 с помощью моноклональных антител
анти-А и анти-В (цоликлоны анти-А и анти-В )
Цоликлоны анти-А и анти-В применяют для определения группы крови человека по
системе АВ0 вместо стандартных изогемагглютинирующих сывороток путём выявления
антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами, содержащимися в цоликлонах.
Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными
гибридомами, полученными в результате слияния мышечных антителообразующих В-
лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные цоликлоны представляют собой
разведённую асцитическую жидкость мышей-носителей гибридомы, содержащую IgM
против антигенов А и В. Цоликлоны дают более быструю и более выраженную реакцию
агглютинации, чем стандартные АВ0-сыворотки.
Определяют группу крови при температуре от 15 до 25 °С. На фарфоровую пластину
или маркированную тарелку наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-
В, рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают
отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластинку слегка покачивают и
наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает в первые 3-5 с и
проявляется образованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев. Возможны
следующие варианты реакции агглютинации.
1. Агглютинация отсутствует с цоликлонами анти-А и анти-В, кровь не содержит
агглютиногенов А и В - исследуемая кровь группы I (0) (рис. 38, см. цв. вкл.).
2. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А, эритроциты исследуемой крови
содержат агглютиноген А - исследуемая кровь группы II(А).
3. Агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, эритроциты исследуемой крови
содержат агглютиноген В - исследуемая кровь группы III (В).
4. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти-В, эритроциты содержат
агглютиногены А и В - исследуемая кровь группы IV(АВ) (табл. 2).
Таблица 2.
Реакция агглютинации исследуемых эритроцитов с цоликлонами анти-А и анти-В
При наличии реакции агглютинации с цоликлонами анти-А и анти- В [группа крови
IV(АВ)] для исключения неспецифической агглютинации производят дополнительное
контрольное исследование с изотоническим раствором хлорида натрия. Большую каплю
(0,1 мл) изотонического раствора смешивают с маленькой (0,01 мл) каплей исследуемой
143
крови. Отсутствие агглютинации подтверждает принадлежность исследуемой крови к
IV(АВ) группе. При наличии агглютинации проводят определение группы крови с
использованием отмытых стандартных эритроцитов.
Цоликлоны анти-А и анти-В выпускаются в жидком виде в ампулах или флаконах,
жидкость окрашена в красный (анти-А) и синий (анти- В) цвета. Хранят в холодильнике
при температуре 2-8 °С. Срок хранения 2 года.
Определение группы крови системы АВ0 по стандартным отмытым эритроцитам
с известной групповой принадлежностью
Из вены больного берут 3-4 мл крови в пробирку и центрифугируют. На тарелку,
разделённую на секторы, наносят соответственно надписям по капле сыворотки, к
которой добавляют каплю стандартных эритроцитов в 5 раз меньше капли исследуемой
сыворотки, перемешивают капли углом предметного стекла, покачивают тарелку в
течение 3 мин, затем добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия,
продолжают смешивать покачиванием и через 5 мин оценивают результаты. Возможны
четыре варианта реакции агглютинации.
1. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) группы и определяется с
эритроцитами II(А) и III(В) групп - исследуемая кровь I(0) группы.
2. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) и II(А) групп и определяется с
эритроцитами III(В) группы - исследуемая кровь II(А) группы.
3. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0) и III(В) групп и определяется с
эритроцитами II (А) группы - исследуемая кровь III(В) группы.
4. Агглютинация отсутствует с эритроцитами I(0), II(А), III(В) групп - исследуемая
кровь I V(АВ) группы.
Определение Rh-фактора
Исследование крови на резус-принадлежность методом конглютинации проводят с
помощью специальных сывороток анти-Rh в лабораторных условиях. Предварительно
определяют групповую принадлежность (по системе АВ0).
Оснащение: две различные серии стандартных сывороток анти-Rh, соответствующих
групповой принадлежности определяемой крови, или совместимые в групповом
отношении стандартные отмытые одногрупповые резус-положительные и резус-
отрицательные эритроциты, чашка Петри, водяная баня, пипетки для сывороток,
предметные стёкла или стеклянные палочки.
На чашку Петри наносят подряд три большие капли сыворотки анти- Rh одной серии и
параллельно - три капли сыворотки другой серии, получая два горизонтальных ряда
сывороток. Затем в первый вертикальный ряд сывороток обеих серий вносят по
небольшой капле исследуемой крови (соотношение сыворотки и крови 10:1 или 5:1), в
средний ряд - по такой же капле стандартных резус-положительных эритроцитов
(контроль активности), в третий ряд - резус-отрицательные стандартные эритроциты
(контроль специфичности). Отдельной для каждой капли стеклянной палочкой или углом
предметного стекла тщательно перемешивают сыворотку и эритроциты, чашки закрывают
крышкой и помещают на водяную баню при температуре 46-48 °С. Спустя 10 мин
144
учитывают результат, просматривая чашку в проходящем свете. В капле со стандартными
резус-положительными эритроцитами должна быть агглютинация, с резус-
отрицательными она отсутствует. Если в каплях обеих серий сывороток с исследуемыми
эритроцитами определяется агглютинация - кровь резус-положительная, если она
отсутствует - кровь резус-отрицательная.
Следует помнить о том, что добавлять изотонический раствор хлорида натрия в каплю
сыворотки, как это принято при определении групповой принадлежности крови по
системе АВ0 с помощью стандартных сывороток, категорически запрещено, так как это
может нарушить ре- акцию агглютинации.
Ошибки при определении Rh-фактора могут быть обусловлены снижением активности
стандартных сывороток анти-Rh, нарушением пропорции сыворотка / кровь,
несоблюдением температурного режима при исследовании, уменьшением времени
экспозиции (менее 10 мин), добавлением изотонического раствора хлорида натрия,
отсутствием контрольных проб на активность и специфичность сыворотки, групповыми
несоответствиями стандартных сывороток и исследуемых и стандартных эритроцитов.
Для экспресс-метода определения Rh-фактора используют специальный реагент -
сыворотку анти-Rh IV(АВ) группы, разведённую 20-30% раствором альбумина человека
или 30-33% раствором декстрана [ср. мол. масса 50 000-70 000], используемого как
вещество, способствующее агрегации эритроцитов при комнатной температуре.
Каплю стандартной сыворотки анти-Rh IV(АВ) группы наносят на предметное стекло
или чашку Петри и параллельно наносят каплю резус-отрицательной сыворотки I V(АВ)
группы, не содержащей антител. К ним добавляют в 2-3 раза меньшего объёма каплю
исследуемой крови, перемешивают углом предметного стекла, стеклянной палочкой или
путём покачивания в течение 3-4 мин, после чего добавляют по 1 капле изотонического
раствора хлорида натрия и по истечении 5 мин учитывают реакцию. При наличии
агглютинации эритроцитов с сывороткой анти-Rh и отсутствии её с контрольной
сывороткой кровь резус-положительная, при отсутствии агглютинации с обеими
сыворотками - резус-отрицательная. В случае появления агглютинации с обеими
сыворотками реакцию следует рассматривать как сомнительную. Для экстренного
переливания следует использовать только резус-отрицательную кровь, а при её отсутствии
возможно в опасной для жизни ситуации переливание резус-положительной крови после
проведения пробы на совместимость по Rh-фактору.
МЕТОДЫ ПЕРЕЛИВАНИЯ КРОВИ
В настоящее время используют следующие методы переливания крови:
1) переливание консервированной крови (непрямое переливание);
2) обменные переливания;
3) аутогемотрансфузия.
В клинической практике в основном применяют непрямые переливания с
использованием консервированной крови и её компонентов.