ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.11.2019
Просмотров: 3836
Скачиваний: 1
44. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Основные
методы
исследования
1. Посев кала на дизентерию, сальмонеллез, эшерихиозы, патогенный
стафилококк, иерсиниоз, условно-патогенную фло- ру, а также по эпидемическим
и клиническим показаниям на холеру и обследование кала на антигены
ротавирусов
(ИФА)
и
энтеровирусов.
2. Копрологическое исследование кала позволяет уточнить преимущественный
отдел
кишечника,
подвергшийся
поражению.
3. Серологический анализ крови в динамике заболевания (РНГА при подозрении
на дизентерию, сальмонеллез, кампилобактериоз, иерсиниоз и др.).
4. Посев рвотных масс и промывных вод на патогенную микрофлору.
5. Исследование кала на криптоспоридиоз, амебиаз (вегетативные формы амеб в
теплом кале), балантидиаз, лямблиоз, глистные инвазии по показаниям.
Дополнительные
методы
исследования
− Посев крови на стерильность и гемокультуру при сохраняющейся лихорадке и
подозрении на брюшной тиф, сальмонеллез, стафилококковый сепсис.
−
Дуоденальное
зондирование
при
подозрении
на
лямблиоз.
Взятие исследуемого материала. Исследуемым материалом могут служить
испражнения, полученные при естественной дефекации или с помощью
ректальных тампонов (петель). Время до начала бактериологического
исследования, если консервант не применяется, не должно превышать двух часов.
Универсальным консервантом является транспортная среда Кэри-Блер. Объем
испражнений, вносимых в транспортную среду, не должен превышать 1/3 её
объема. После внесения пробу перемешивают со средой. Время хранения
образцов до начала исследования может составлять до 1 суток в холодильнике,
однако оптимальным является проведение посева через 1–2 часа после забора.
Выбор питательных сред для первичного посева испражнений определяется
целью исследования. Вирусологическое исследование испражнений в рутинной
практике не используется, однако для обнаружения антигенов наиболее
распространенных возбудителей вирусных ОКИ – ротовирусов – широко
применяют иммунологические методы: ИФА, РНГА, реакцию ко-агглютинации и
др. Их разработка сделала возможной расшифровку значительной части вирусных
диарей
в
условиях
обычных
лабораторий.
Наибольшую сложность представляет диагностика острых кишечных инфекций,
обусловленных условно-патогенными микроорганизмами. Широкий перечень
возможных возбудителей и необходимость оценки количества микроорганизмов
в исследуемом материале придают лабораторного исследования в случае
подозрения на ОКИ условно-патогенной или смешанной этиологии ряд
особенностей:
− исследование испражнений на условно-патогенные микроорганизмы должно
проводиться обязательно параллельно с исследованием на максимально широкий
перечень
патогенных
бактерий
и
вирусов;
− для индикации возможно большего числа видов бактерий и грибов
одновременно проводится посев на среду Эндо, 5% кровяной агар, желточно-
солевой
агар
и
агар
Сабуро;
− с целью определения количества отдельных видов условно-патогенных
бактерий посев испражнений на все виды питательных сред проводится методом
секторных посевов (1 г фекалий растирают в фарфоровой ступке с 9 мл
стерильного физиологического раствора, после чего дают суспензии отстоятся 5–
10 минут для оседания крупных частиц. Посев исходной суспензии 1/10 и учет
результатов
проводится
так
же,
как
при
исследовании
мочи).
Таблица 4 – Питательные среды для посева испражнений и условия их
инкубирования.
Питательная среда Выделяемые микроорганизмы Условия инкубации Эндо
Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia spp. Enterobacteriaceae сутки при 37оС и
сутки при комнатной температуре (для обнаружения Yersinia spp.) Плоскирева
Salmonella spp., Shigella spp., V. parahaemolyticus 2 суток при 37оС с просмотром
через 24 часа Селенитовый бульон или Мюллера-Кауф- мана или магниевая
Salmonella spp. 18–20 часов при 37оС Фосфатно-буферный раствор (ФБР) или
забуференная пептонная вода или среда Серова или буферно-казеино-во-
дрожжевая среда Y.pseudotuberculosis , Y.enterocolitica до 15 суток и более в
холодильнике при 6–10оС Элективные питательные среды с антибиотиками
(Skirrow или Kar-mali или Blaser или др.) Campylobacter spp. 2 суток при 42,5оС в
атмосфер
45. кампилобактериоз
Диагностика кампилобактериозов. Принципы микробиологической диагностики
кампилобактериозов. Выявление кампилобактер. Лечение кампилобактериозов.
Принципы микробиологической диагностики кампилобактериозов включают
бактериоскопические, бактериологические и серологические методы. Материалы
для исследований — испражнение, кровь, вода, молоко и различные пищевые
продукты. • Микроскопическое исследование тонкого мазка, окрашенного 1%
раствором фуксина в течение 10-30 с, позволяет быстро обнаружить
спиралевидные или S-образные бактерии. Типичные формы чаще обнаруживают
при окраске кристаллическим фиолетовым. Также можно применять фазово-
контрастную микроскопию суспензии испражнений в жидкой среде. •
Кампилобактеры плохо переносят транспортировку — их следует помещать в
консервант, например тиогликолсвый бульон (рН 8,5) или щелочную пептонную
воду, и хранить при температуре 4 "С. Материал засевают на селективные
питательные среды (например, среду Бутцлера). Можно пропускать материал
через мембранный фильтр (диаметр пор 0,65 мкм) — подвижные кампилобактеры
быстро проходят через фильтр. Основное достоинство этого метода —
возможность посева фильтрата на неселективные среды (например, КА или ША).
Основные дифференциальные признаки кампилобактер представлены в табл. 19-
2. Для дифференцирования campylobacter jejuni и campylobacter coli применяют
экспресс-тест с гиппуратом (свежевыделенные штаммы campylobacter jejuni
всегда дают положительную реакцию в отличие от campylobacter coli). Для
дифференцирования кампилобактер jejuni и кампилобактер lari можно применять
тест чувствительности к налидиксовой кислоте (С jejuni — чувствителен, С. lari—
резистентен). Таблица 19-2. Дифференциально-диагностические признаки
патогенных для человека бактерий рода Campylobacter • Для идентификации Аг
кампилобактер применяют РА с обработанной формалином культурой (через 10
сут после инфицирования титр AT составляет 1:8-1:32) или РСК
(видоспецифическая реакция, требующая соответствующего Аг). В России
разработаны диагностикумы для выявления AT в реакции РНГА, применяемые
для распознавания кампилобактериозов животных и человека. За рубежом
разработаны коммерческие реагенты для выявления AT в РИФ или реакции
иммунной сорбции AT, меченных ферментами.
47. Принципы лабораторной диагностики эшерихиозов Известно 5 видов рода
Escherichia – E.coli (кишечная палочка), Е. fergusoni, E. hermannii, E.vulneris,
E.blattae.
E.coli классифицируется по О-антигену (более 170 вариантов), по К-антигену
(более 100 сероваров), по Н-антигену –около 60. Строение О-антигена определяет
принадлежность
к
серогруппе.
Диареегенные
кишечные
палочки
вызывают
кишечные
инфекции
(энтероинвазивные и энтерогеморрагические поражают толстый, а остальные
группы диареегенных эшерихий – тонкий кишечник). Кроме того, кишечная
палочка может вызывать инфекции мочевыводящих путей, быть причиной
бактериемии,
а
у
новорождённых
вызывать
менингит.
По особенностям взаимодействия с организмом человека диареегенные эшерихии
подразделяются
на
следующие
группы:
1. энтеротоксигенные кишечные палочки (ЕТЕС) своим энтеротоксином
вызывают диарею (диарея путешественников, холероподобная диарея);
2. энтеропатогенные (ЕРЕС) – вызывают вакуализацию и гибель ворсинок
кишечного эпителия, что может привести к появлению эрозий и даже развитию
бактериемии
(диареи
у
детей
первого
года
жизни);
3. энтероагрегирующие – массово прикрепляются к поверхности энтероцитов,
препятствуя абсорбции жидкости, что сопровождается обезвоживанием
организма
(диареи
у
детей);
4. энтероинвазивные (EIEC) – вызывают язвенно- катаральное воспаление с
дизентериеподобным
синдромом
(дизентериеподобное
заболевание),
а
энтерогеморрагические эшерихии вырабатывают цитотксин, вызывающий
развитие геморрагического колита, а в тяжёлых случаях и гемолитико-
уремического
синдрома.
Микробиологическая диагностика эшерихиозов основана на выделении чистой
культуры на среде Эндо и идентификации её по биохимическим и серологическим
признакам.
48. сальмонеллёзных гастроэнтеритов В настоящее время сальмонеллы
классифицируются на два вида. Медицинское значение имеет вид Salmonella
enterica (второй вид встречается редко), одноименный подвид которого –
«enterica» – включает основную массу сальмонелл, патогенных для человека,
традиционно разделяющихся на две группы: тифо- паратифозную (возбудители
брюшного тифа S.typhi, паратифа А S.paratyphi A, паратифа В S.schottmuelleri) и
возбудители сальмонеллёзных гастроэнтеритов (S.typhimurium, S.enteritidis,
S.choleraesuis
и
др.).
Основной
метод
микробиологической
диагностики
сальмонеллёзных
гастроэнтеритов – культуральный: рвотные массы, промывные воды желудка,
испражнения, остатки пищи засеваются на селенитовую среду (среда накопления).
Культура, выросшая на ней, рассевается на висмут-сульфит агар, с которого
отбираются чёрные колонии и идентифицируются по биохимическим свойствам
(все сальмонеллы, кроме возбудителя брюшного тифа, газообразующие, т. е.
ферментируют углеводы с образованием не только кислоты, но и газа,
продуцируют сероводород) и по серологическим свойствам (по О-антигену
сальмонеллы классифицируются на серогруппы, внутри которых делятся на
серовары
по
Н-антигену;
S.typhi
имеет
Vi-
антиген).
Сальмонеллы могут вызывать госпитальные инфекции, микробиологическая
диагностика которых, по сравнению с диагностикой сальмонеллёзных пищевых
отравлений, имеет следующие особенности: для выделения культуры берутся
также смывы со стен и т. д. (т. к. госпитальные штаммы сальмонелл передаются и
контактным, и аэрогенным путём), биопроба не проводится (т. к. госпитальные
штаммы теряют вирулентность к лабораторным животным), выделенная культура
обязательно тестируется на чувствительность к антибиотикам (т. к. госпитальные
штаммы сальмонелл способны к формированию антибиотикорезистентности).
49.
Принципы
микробиологической
диагностики
дизентерии
Микробиологическая диагностика бактериальной дизентерии основана на
выделении чистой культуры и идентификации её по биохимическим и
серологическим свойствам. Выделенная чистая культура обязательно тестируется
на
чувствительность
к
антибиотикам.
Род Shigella классифицируется на четыре серогруппы, каждой из которых
соответствует
свой
вид:
−
S.dysenteriae
(серогруппа
А)
− S.flexneri (серогруппа В), S.boydii (серогруппа С) − S.sonnei (серогруппа D
S.dysenteriae
и
S.boydii
обладают
термолабильным
К-антигеном,
а
термостабильные типовые антигены отсутствуют у S.sonnei (т.е. этот вид
серологически
однороден).
Минимальной биохимической активностью (на коротком ряду Гисса
ферментирует только глюкозу) обладает S.dysenteriae, а газообразующей
активностью на углеводах – только один серовар (Ньюкастл) из серогруппы В
(S.flexneri).
50.
Принципы
микробиологической
диагностики
иерсиниозов
Возбудителями данных инфекций являются микроорганизмы рода Yersinia.
Вид pseudotuberculosis вызывает псевдотуберкулёз, вид enterocolitica – кишечный
иерсиниоз, остальные виды рода Yersinia редко могут вызывать
оппортунистические
инфекции.
Материалом для исследования являются кал, моча, кровь, ликвор, а также
удаленный
аппендикс.
Основным методом исследования является бактериологический: засев на среды
для энтеробактерий, выделение чистой культуры с идентификацией аналогично
другим энтеробактериям до серовара и биохимического варианта. Иерсинии
представляют собой психрофилы (оптимум роста 28°С). Подвижность
определяется при температуре ниже 30°С.В качестве вспомогательного метода
определяют
нарастание
титра антител в сыворотке крови с помощью ИФА и РНГА.
51.
Сбор
исследуемого
материала
− мочу для исследования следует брать до начала антибактериальной терапии или
в
интервалах
между
ее
курсами;
− исследованию подлежит средняя порция свободно выпущенной мочи;
− лучше исследовать утреннюю порцию мочи (по возможности накануне вечером
воздержаться
от
мочеиспускания
до
взятия
анализа);
− количество мочи должно быть 3–5 мл (но не менее 1 мл); − моча собирается в
стерильную
посуду;
− перед взятием материала должен быть совершен тщательный туалет наружных
половых
органов
теплой
водой
с
мылом.
Инструкции
по
сбору
мочи
(ВОЗ)
Для
мужчин:
1)
тщательно
вымыть
руки;
2) обнажить головку полового члена и выпустить небольшую порцию мочи;
3) прервать мочеиспускание и выпустить порцию мочи в контейнер;
4) закрыть контейнер и передать в лабораторию. Для женщин:
1)
тщательно
вымыть
руки;
2) вымыть половые органы, используя стерильные марлевые салфетки и теплую
мыльную
воду,
в
направлении
спереди
назад;
3) промыть половые органы еще раз теплой водой и вытереть стерильной
салфеткой. На протяжении всей процедуры держать половые губы раздвинутыми
и
не
касаться
их
пальцами;
4) помочиться, отбросив первую порцию мочи. Собрать порцию мочи в
стерильный
контейнер;
5)
закрыть
контейнер
и
передать
в
лабораторию.
Сбор чистой порции мочи у новорожденных и грудных детей – достаточно
сложная процедура. Необходимо чисто вымыть наружные половые органы
ребенка. Моча собирается в контейнер, который следует закрыть крышкой и
быстро доставить в лабораторию. Для сбора мочи у новорожденных и грудных
детей
используют
специальные
мочеприемники
(рис.
7), которые представляют собой прозрачный сборный мешочек, основание
которого
приклеивается
к
коже
ребенка.
Рисунок 7 – Мочеприемник для сбора мочи у новорожденных
Такое приспособление подходит как для девочек, так и для мальчиков (чтобы моча
не выливалась – мошонку необходимо поместить внутрь мочеприемника). Чтобы
не произошло отклеивание мочесборника, аккуратно поверх его необходимо одеть
одноразовый подгузник. Катетеризация мочевого пузыря у детей раннего возраста
проводится
по
строгим
показаниям.
По показаниям проводят катетеризацию мочевого пузыря у взрослых (для
уточнения локализации инфекции), надлобковую пункцию мочевого пузыря, а
также цитоскопию.
52.
Посев
исследуемого
материала
Питательные
среды:
− среда Эндо (среда Мак-Конки) – инкубация 24 часа при 35–37°С;
− 5% кровяной агар – инкубация 24–48 часов при 35–37°С; − среда Сабуро (при
подозрении
на
поражении
грибами)
–
25–30°С,
72
часа;
− хромогенные среды для уропатогенов. Хромогенные и флюорогенные
питательные среды – это среды нового поколения, которые позволяют проводить
быстрое (в течение суток) обнаружение и идентификацию микроорганизмов.
Хромогенные питательные среды позволяют выявлять специфические ферменты
микроорганизмов. К таким ферментам относятся, например, β-глюкуронидаза и
триптофаназа (E.coli), β-галактозидаза (колиформы), фосфолипаза С (L.
monocytogenes), кислая фосфатаза (Cl. perfringens), β-глюкозидаза (энтерококки).
Для обнаружения специфического фермента в состав среды включают
хромогенные субстраты – вещества, при расщеплении которых образуются
окрашенные или флюоресцирующие продукты (светятся в УФ-свете). В
результате хромогенная среда контрастно изменяет свой цвет или флюоресцирует
при
обнаружении
искомого
микроорганизма.
− Системы, которые содержат несколько типов питательных сред.
Схема
посева
мочи
на
питательные
среды
Метод
секторных
посевов:
Платиновой петлей диаметром 2 мм и емкостью 0,005 мл производят посев мочи
(30–40 штрихов) на сектор А чашки Петри с простым питательным агаром. После
этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор I
и аналогичным образом из сектора I во II и из II в III.