ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.11.2019
Просмотров: 3833
Скачиваний: 1
до подсыхания крови. Данный фрагмент исследования выполняют
непосредственно у «постели пациента» при его поступлении в стационар. Далее
препарат доставляют в бактериологическую лабораторию. Окраску мазка
производят водно-спиртовым раствором метиленовой сини в течение 2–3 мин. без
предварительной фиксации. После окрашивания препарат осторожно промывают
водой и подсушивают на воздухе. Препарат смотрят под имерсией при большом
увеличении, просматривая не менее 20 полей зрения или до обнаружения
морфологически
четких
микробных
клеток.
В препарате «толстой капли» менингококки имеют преимущественно такую же
морфологию, как в спинномозговой жидкости, но чаще располагаются
поодиночке, имеют более круглую форму. В мазке, имеющем голубой фон,
хорошо видны окрашенные в темно-синий цвет лейкоциты и между ними парно и
по одному кокков, как вне-, так и внутриклеточно. Результаты бактериоскопии
немедленно сообщают лечащему врачу в виде предварительного ответа.
Ликвор
Для микроскопического исследования готовят два мазка. На поверхность
предметного стекла наносят две капли ликвора, мазки высушивают на воздухе. Не
следует распределять материал по большой поверхности, так как при этом
снижается вероятность обнаружения микроорганизмов. Если немедленно
доставить материал в лабораторию невозможно, допустимо хранение ее в течение
1–2 ч в термостате при температуре 37°С. Мазки окрашивают метиленовым синим
и
по
Граму.
Менингококки в мазке, имеющем голубой фон, выглядят в виде мелких темно-
синих, располагающихся по одному, парами или кучками кокков с небольшим
бесцветным ореолом среди окрашенных в темно-синий цвет ядер лейкоцитов.
Микроскопия окрашенных мазков спинномозговой жидкости в известной части
случаев позволяет установить наличие бактерий, вызывающих гнойный менингит.
H. influenzae видна в виде мелких полиморфных грамотрицательных палочек и
нитей, окруженных еле заметной нежной капсулой. Пневмококки имеют вид
ланцетовидных грамположительных диплококков, образуют капсулу. Результаты
бактериоскопии немедленно сообщают лечащему врачу в виде предварительного
ответа.
2.
Бактериологический
метод
1-й
день
исследования
1–2 мл биоматериала, предназначенного для бактериологического исследования,
забирают в стерильную центрифужную пробирку. Одновременно готовят два
мазка
для
микроскопического
исследования.
Стерильной пастеровской пипеткой со дна пробирки берут 0,3–0,5 мл материала
и по 2–3 капли засевают на поверхность 4 чашек Петри с подогретыми
питательными
средами:
− 1-я чашка содержит менингококк агар (без добавок) или сывороточный агар;
− 2-я чашка – «шоколадный» агар; − 3-я чашка – кровяной агар; − 4-я чашка – агар
Эндо. Посевы с менингококк агаром, сывороточным агаром и «шоколадным»
агаром помещают в термостат при 37°С и создают условия повышенного
содержания СО2 в атмосфере термостата. Посевы с кровяным агаром и агаром
Эндо
инкубируют
при
37°С
в
условиях
обычной
атмосферы.
Для посева СМЖ наряду с прямым посевом используют среды во флаконах с
двухфазной средой, одноразовые флаконы со специальной средой для
автоматизированной
системы.
Спинномозговую жидкость, оставшуюся в пробирке, используют для посева на
среду «обогащения» (полужидкий сывороточный агар), 0,5 мл жидкости засевают
в 5 мл 0,1% полужидкого сывороточного агара, подогретого в термостате при
37°С.
Для прямого выявления в СМЖ антигенов (N. meningitidis A, B, C, H. influenzae
typeB (Hib), Str. pneumoniae 83 серотипов) используются наборы для латекс-
агглютинации.
41. заболевания ротоглотки.
Бактериальные инфекции у ВИЧ-инфицированных обусловлены формированием
ассоциаций возбудителей. Их проявлениями могут быть: гингивит, некротические
поражения дёсен или слизистых оболочек щёк, нёба, миндалин, задней стенки
глотки, полости носа (вплоть до образования тотальной перфорации перегородки
носа): хронический пародонтит, стоматит. Характерно частое развитие острых
гнойных средних отитов с осложнениями, обострений хронической ЛОР-
патологии. Некротические поражения дёсен, слизистой оболочки щёк, неба,
миндалин и полости носа в виде глубоких кратерообразных язв отмечают у
больных с генерализованной лимфаденопатией в стадии перехода в СПИД.
В последние годы особую актуальность представляют поражения ЛОР органон
при заболеваниях, передающихся половым путем (хламидийные фарингит,
уpeтрит, гонококковый фарингит, сифилис) и внелёгочном туберкулёзе
(туберкулезные отиты, туберкулёз глотки и гортани).
Среди вирусных инфекций в клинической симптоматике у ВИЧ-инфицированных
отмечают поражение слизистой оболочки полости рта и носа, вызванное вирусом
простого герпеса.
42. пищевод.
Пищевод не имеет своей постоянной микрофлоры. Бактерии, которые здесь
обнаруживаются, являются транзиторными представителями полости рта и
глотки.
Забор бипсийного материала из слизистой оболочки пищевода следует
осуществлять способом вращательной аспирации, при этом открытый форцепт
подводится близко к концу эндоскопа, эндоскоп поворачивается к стенке,
выполняется аспирация, форцепт выдвигается, закрывается и кусочек
извлекается. Сообщается, что у пациентов с тяжелой дисплазией отказавшихся от
операции, эта методика (проводимая с 3-6 месячным интервалом) позволяла
эффективно диагностировать рак, который на момент выявления в 96% случаев
располагался в пределах слизистой оболочки.
Эндоскопическое исследование с высоким разрешением и хромоэндоскопия с
метиленовым синим увеличивают частоту выявления короткого сегмента
пищевода Барретта за счет выполнения прицельной биопсии. Хромоэндоскопия с
раствором Люголя и метиленовым синим увеличивают частоту выявления
соответственно плоскоклеточного рака и неопластических изменений в зоне
пищевода Барретта, хотя значение использования метиленового синего в ходе
наблюдения за пациентами с пищеводом Барретта остается дискутабельной.
Исследование биоптатов методом проточной цитометрии с проведением ДНК-
анализа позволяет выявлять пациентов с анэуплоидией, полиплоидией, а с
помощью р-53 потерю гетерозиготности, что свидетельствует о повышенном
риске развития рака.
Локальные очаги в пищеводе могут быть удалены путем эндоскопической
резекции слизистой. При этом в подслизистый слой вводится физиологический
раствор с целью приподнятия патологически измененного участка, а затем он
удаляется методом петлевой электроэксцизии. Эта методика с успехом
применяется для удаления неопластических очагов в участках пищевода Барретта
и для удаления доброкачественных опухолей пищевода.
Инфекционный эзофагит развивается у больных с иммунодефицитными
состояниями, обусловленными проведением системной противоиммунной
терапии, ингаляцией стероидных препаратов, злокачественными опухолями
(после химиотерапии), при диабете, СПИДе. Наиболее частым возбудителем
инфекционного эзофагита являются грибы рода Candida, вирус герпеса простого,
цитомегаловирус. Грибковый эзофагит распознается по наличию белого налета на
фоне воспаленной слизистой. Выполняются щеточная биопсия и забор кусочков,
но цитологическое исследования мазков после щеточной биопсии является более
чувствительным методом. Вирусный эзофагит проявляется образованием
изъязвлений. Биопсию следует брать как из края, так и из центра язвенных
дефектов. Гистологическое исследование обычно информативно, но при СПИДе
требуется забор большого количества кусочков (до 10). Выделение вируса в
культуре способствует диагностике, но этот метод менее чувствителен, чем
гистологическое исследование направленное на диагностику цитомегаловирусной
инфекции.
23,
43.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРИ
ЗАБОЛЕВАНИЯХ
ЖЕЛУДКА
Диагностика
инфекций,
вызванных
Helicobacter
pylori
Хеликобактерная инфекция – самая частая причина хронического гастрита,
язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, хронических
гастродуоденитов.
Helicobacter pylori (НР) – микроаэрофильная, грамотрицательная бактерия,
продуцирующая уреазу, щелочную фосфатазу, протеазу, муциназу, фосфолипазу,
супероксиддисмутазу, гемолизин, вакуолизирующий цитотоксин, а также белок,
ингибирующий секрецию соляной кислоты, и белки-адгезины, благодаря чему она
преодолевает защитные барьеры, колонизирует слизистую оболочку желудка,
повреждает ее и вызывает развитие хронического гастрита. Механизм передачи
инфекции
фекально-оральный.
Инвазивные
методы
диагностики
хеликобактерной инфекции: − цитологическое исследование; − гистологическое
исследование;
−
уреазные
тесты;
−
бактериологический
метод;
−
ПЦР
слизистой
оболочки
желудка;
− определение специфических IgА, IgG к Helicobacter pylori в сыворотке крови.
Неинвазивные
методы
диагностики
хеликобактерной
инфекции:
− определение специфических антигенов Helicobacter pylori в биоматериалах;
−
ПЦР
слюны,
кала,
зубного
налета;
− уреазные дыхательные тесты на основе изотопов: 13С, 14С;
−
аммонийный
дыхательный
тест.
Цитологическое
исследование
Для цитологического исследования используют мазки- отпечатки биоптатов
слизистой оболочки желудка при гастроскопии. Биоптат необходимо брать из
участков с наибольшей гиперемией и отеком, но не из дна эрозий или язв. Затем
мазки высушиваются и окрашиваются по методу Романовского-Гимзе.
Хеликобактерии располагаются в слизи, имеют изогнутую S-образную или слегка
спиралевидную форму, толщина – 0,5–1 мкм, длина – 2,5–3,5 мкм.
Выделяют
три
степени
обсемененности
хеликобактериями:
1)
слабая
(+)
–
до
20
микробных
тел
в
поле
зрения;
2)
средняя
(++)
–
до
50
микробных
тел
в
поле
зрения;
3) высокая (+++) – более 50 микробных тел в поле зрения.
Гистологическое
исследование
Материалом служат биоптаты слизистой оболочки желудка в местах наиболее
выраженного воспаления. Готовятся тонкие срезы, препараты окрашиваются
гематоксилином, эозином акридиновым оранжевым, по методу Гимзе или
серебрением
(по
Вартин-Старри).
Экспресс-уреазный
метод
Является вариантом идентификационного теста для HP в биоптате слизистой без
выращивания бактерии в культуре. Основан на обнаружении уреазы в слизистой
оболочке желудка. Экспресс-набор содержит мочевину, бактериостатический
агент и фенол-рот в качестве индикатора рН (индикатор меняет цвет от желтого к
малиновому при сдвиге реакции в щелочную сторону). Биоптат слизистой
оболочки желудка, полученный при гастроскопии, помещают в среду экспресс-
набора. При наличии в биоптате хеликобактерий среда приобретает малиновую
окраску. Время появления малиновой окраски косвенно указывает на количество
хеликобактерий.
Оценка
результатов:
(+) – незначительная инфицированность (малиновое окрашивание к концу суток);
(++) – умеренная инфицированность (малиновое окрашивание в течение 2 ч;
(+++) – значительная инфицированность (малиновое окрашивание появляется в
течение
первого
часа);
аступает
позже,
чем
через
сутки).
Бактериологический
метод
Материалом для исследования является биоптат слизистой оболочки желудка и
двенадцатиперстной кишки с последующей обработкой и посевом на
дифференциально-диагностические среды. Биоптат помещают в 20% раствор
глюкозы объемом 2 мл. Он может быть использован для посева на
дифференциально- диагностические среды в течение 2 ч (при хранении при +4°С
до 5 ч). Возможно также использование транспортной среды Стюарта.
Среды
для
выделения
HР:
− неселективные: шоколадныйагар, агар «Колумбия», содержащий 10% крови
барана;
− селективные: агар «Колумбия», содержащий 10% крови барана и селективную
добавку из антибиотиков (ванкомицин, триметоприм, амфотерицин).
Переносят транспортную среду вместе с биоптатом на среду для выделения НР,
зажимают биоптат стерильным пинцетом и волнообразными движениями
проводят им по агару, стараясь не повредить поверхностный слой. Биоптат
удаляют. Инкубируют среду в микроаэрофильных условиях