ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.11.2019
Просмотров: 3825
Скачиваний: 1
кратного выявления антител, внепеченоч- ных проявлений инфекции,
морфологических исследований биоптата.
98.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ
ДИАГНОСТИКА
ЭНТЕРАЛЬНЫХ
ГЕПАТИТОВ
Гепатиты с фекально-оральным механизмом передачи: − вирусный гепатит А
(ВГА);
−
вирусный
гепатит
Е
(ВГЕ).
Вирусный
гепатит
А
Острое вирусное инфекционное заболевание с преимущественным поражением
печени, желтухой и токсическими проявлениями. Возбудитель ВГА – РНК-
содержащий вирус, лишенный липидной оболочки, относится к семейству
Picornaviridae к роду Нepatovirus (вирус гепатита А), имеет один серотип и семь
генотипов. Вирус обладает гепатотропизмом, однако повреждение гепатоцитов
возникает не за счет прямого цитопатического действия, а в результате
иммунопатологических
механизмов.
Вирус гепатита А устойчив к воздействию внешней среды, сохраняет свою
жизнеспособность при температуре -20°С несколько лет, при температуре 18–
20°С – от одной до нескольких недель, в воде водоемов – от 3 до 10 месяцев, а в
фекалиях человека – до 30 дней. При температуре +60оС вирус гепатита А
инактивируется
не
полностью.
Источниками вируса гепатита А являются лица с клинически выраженными,
субклиническими и инаппарантными формами течения заболевания. Вирус
гепатита А выявляется у инфицированных лиц в крови в первые дни заболевания,
а в фекалиях – через 2–4 недели после инфицирования. Пик выделения ВГА с
фекалиями отмечается за неделю до первых клинических проявлений
заболевания. В начале желтушного периода выделение вируса резко снижается. В
среднем период выделения вируса гепатита А составляет 14– 21 день. Дети могут
выделять вирус гепатита А на протяжении нескольких месяцев после появления
клинических
проявлений
заболевания.
Механизм заражения вирусом гепатита А – фекально- оральный. В период
циркуляции вируса в крови (вирусемия) возможна реализация парентерального
механизма
заражения
–
через
кровь.
Пути передачи инфекции: водный (основной), пищевой, контактно-бытовой.
Инкубационный
период
составляет
от
7
до
50
дней.
В результате перенесенного заболевания формируется стойкий естественный
иммунитет, проявляющийся наличием в крови антител класса G (анти-HAV IgG).
Антитела класса M (анти-HAV IgМ) появляются в крови на 10–15 день после
инфицирования и могут сохраняться до 4–6 месяцев. У детей в течение первого
года жизни сохраняются материнские антитела. Искусственный иммунитет
формируется
в
результате
вакцинации.
Лабораторная диагностика ВГА Лабораторными маркерами ВГА являются: − РНК
вируса
(HAV
RNA);
−
антиген
вируса
гепатита
А
(HAV
Ag);
− анти-HAV IgМ и анти-HAV IgG, суммарные антитела без разделения на классы
(анти-HAV).
В
структуре
анти-HAV
преобладают
анти-HAV
IgG.
Основным лабораторным маркером ВГА являются антитела класса IgM,
обнаружение которых свидетельствует о наличии текущей или недавней
инфекции. Выявление анти- HAV IgM осуществляется при помощи ИФА либо
ИЛА. Первично положительный результат подтверждается повторным
проведением исследования или использованием подтверждающего теста
(конфирматорный
тест).
Определение при помощи ИФА и ИЛА суммарных антител к HAV или
специфических антител класса G свидетельствует о перенесенной ранее инфекции
и применяется в основном в эпидемиологических исследованиях. Количественное
выявление анти-HAV либо анти-HAV IgG применяется с целью оценки
напряженности иммунитета. Первично-положительные по анти-HAV либо анти-
HAV IgG результаты подтверждаются проведением повторного исследования.
Культурально-клеточный анализ РНК, ПЦР и ИФА HAV Ag в крови имеют
ограниченное применение в связи с кратким периодом вирусемии. Ранним
диагностическим признаком заболевания гепатитом А является обнаружение РНК
вируса гепатита А и HАV Ag в фекалиях в период инкубации. Первичное
обнаружение HАV Ag должно в обязательном порядке подтверждаться
постановкой конфирматорного теста на основе принципа нейтрализации антигена
специфическими
антителами.
Диагноз «вирусный гепатит А» устанавливается на основании клинических,
лабораторных и эпидемиологических данных. Окончательная верификация
проводится на основании выявления антител класса IgM.
99.
Вирусный
гепатит
Е
Вирусное инфекционное заболевание с преимущественным поражением печени,
желтухой и токсическими проявлениями. ВГЕ отличается от ВГА более тяжелым
клиническим течением, особенно у беременных, нередко с летальным исходом.
Возбудитель ВГЕ – РНК-содержащий вирус размером 27– 37 нм, относится к
семейству Caliciviridae, недавно переведен в группу гепатит Е-подобных вирусов,
семейство Hepeviridae. РНК вируса и антитела к вирусу гепатита Е выявляются у
различных видов животных (диких кабанов, коров, овец, свиней, грызунов, птиц
и др.). Возможно перекрестное инфицирование вирусами человека и животных.
Источники инфекции – люди с острым или латентным течением заболевания, а
также животные. Механизм передачи инфекции фекально-оральный, факторы
передачи – вода, продовольственное сырье и пищевые продукты.
Инкубационный период составляет от 14 до 50 дней, в среднем около 35 дней.
Выделение вируса с испражнениями начинается в последние дни инкубационного
периода и достигает максимума в продромальном периоде. После появления
желтухи интенсивность выделения вируса гепатита Е существенно снижается.
Подтверждением диагноза является выявление специфических антител в крови,
антигена – в крови или фекалиях.
99.2 Лабораторные методы исследования на маркеры ВГЕ применяются при
обращении
за
медицинской
помощью:
− пациентов, инфицированных вирусом гепатита неустановленной этиологии;
− лиц, которые в пределах инкубационного периода находились в эндемичных по
ВГЕ
странах;
− лиц, которые были в контакте с пациентом с установленным клиническим
диагнозом
«вирусный
гепатит
Е».
Лабораторная
диагностика
1.
Определение
в
крови
уровня
билирубина
и
его
фракций,
тел
класса
IgM.
Лабораторная диагностика ВГЕ Основными диагностическими маркерами ВГЕ: −
РНК
вируса
(HEV
RNA);
− антиген вируса гепатита Е (HЕV Ag) и РНК вируса гепатита Е, выявляемые в
фекалиях в продромальный период и в острой стадии заболевания;
− специфические антитела класса М (анти-HЕV IgM), выявляемые в сыворотке
крови в остром периоде заболевания и в стадии реконвалесценции;
− специфические антитела класса G (анти-HЕV IgG) и состоящие в основном из
них суммарные антитела (анти-HЕV) свидетельствуют о перенесенном ранее ВГЕ.
Для выявления антител применяется метод ИФА. Первично-положительные
результаты
подтверждаются
проведением
повторного
исследования.
Выявление РНК вируса гепатита Е проводится методом ПЦР. Применяют также
метод иммунной электронной микроскопии для обнаружения вируса в кале.
Диагноз «вирусный гепатит Е» устанавливается на основании клинических,
лабораторных и эпидемиологических данных. Окончательная верификация
проводится на основании выявлении анти-HЕV IgM.
103.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ
ДИАГНОСТИКА
ВИРУСНЫХ
ЭНЦЕФАЛИТОВ
И
ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТОВ
Арбовирусы (от англ. arthropod borne viruses – передаваемые членистоногими
вирусы) – экологическая группа вирусов, обитающих в организме членистоногих,
передающихся
при
их
укусах.
Вызывают
вирусные
энцефалиты,
энцефаломиелиты,
геморрагические
лихорадки
и
т.
д.
Арбовирусы
включают
в
себя
представителей
ряда
семейств:
−
Тогавирусы
−
Флавивирусы
−
Буньявирусы
−
Реовирусы
− Рабдовирусы − Аренавирусы – Филовирусы
104.
ирусы
Тогавирусы
(семейство
Togaviridae)
Тогавирусы (от лат. toga – мантия) – семейство РНК- содержащих вирусов,
относящихся к группе арбовирусов (кроме вируса краснухи). Переносятся
комарами, сопровождаются лихорадкой, энцефалитом, сыпью, миалгией и
увеличением лимфоузлов. Семейство тогавирусов включает роды: Alphavirus и
Rubivirus
(вирус
краснухи).
Вирион тогавирусов сферической формы, диаметром 50– 70 нм, капсид
икосаэдральный,
окруженный
оболочкой
(мантией)
со
встроенными
гликопротеиновыми шипами. Геном представлен однонитевой линейной плюс-
нитью РНК. Репродукция и сборка вируса происходит в цитоплазме, выход из
клетки
–
почкование
через
клеточную
мембрану.
Род Alphavirus представлен вирусами: Синдбис, Венесуэльского, Восточного,
Западного энцефаломиелитов лошадей; Карельской лихорадки, Чикунгунья, О
Ньонг-Ньонг,
а
также
леса
Семлики.
Микробиологическая
диагностика
Исследуемый материал: кровь (при вирусемии), церебро- спинальная жидкость,
моча,
Вирусологический
метод.
Патологическим материалом заражают культуру клеток куриных фибробластов,
куриный эмбрион, мышей-сосунков (интрацеребрально). Вирус идентифицируют
в
РТГА,
РН,
РСК.
Серологический метод. Исследуют сыворотку крови с помощью реакций: РТГА,
РСК, РН, ИФА. Определяют нарастание титра антител в парных сыворотках.
Молекулярно-генетический метод. Вирусы обнаруживают с помощью ПЦР.
Венесуэльский энцефаломиелит лошадей Клинические проявления: лихорадка,
энцефалит,
менингоэнцефалит.
Исследуемый материал: сыворотка крови в острой и реконвалесцентной стадии,
ликвор,
носоглоточный
смыв.
Серологическая метод. Исследуют сыворотку крови методом парных сывороток в
РТГА, РСК и РН вируса гомологичными сыворотками. Подтверждением диагноза
является
четырехкратное
нарастание
титра
антител.
Вирусологический метод. В острой стадии заболевания патологическим
материалом заражают подкожно или интрацеребрально белых мышей или
хорионаллантоинную
оболочку
куриных
эмбрионов
(в
специально
оборудованных боксах в связи с высокой контагиозностью вируса).
Идентификация:
РТГА,
РН,
РСК.
Восточный энцефаломиелит лошадей Клинические проявлении: лихорадка,
энцефалит. Исследуемый материал: сыворотка крови в острой и
реконвалесцентной
стадии,
ликвор.
Серологический метод. Исследуют сыворотку крови в реакциях РСК, РТГА, РН,
ИФА методом парных сывороток. Диагностическим является четырехкратное и
более нарастание титра антител. В ИФА обнаруживают антитела класса М как в
крови, так и в цереброспинальной жидкости, что позволяет произвести раннюю
диагностику
заболевания.
Западный энцефаломиелит лошадей Клинические проявления: лихорадка,
энцефалит,
миалгии.
Исследуемый материал: кровь в острой и реконвалесцентной стадии, ликвор.
Серологический метод. Исследуют кровь методом парных сывороток в реакциях
РТГА, РН и РСК. Диагностическим является четырехкратное нарастание титра
антител.
Вирусологический метод. Патологическим материалом заражают куриный
эмбрион. Идентификацию производят в РТГА, РН, РСК.
104.2 Флавивирусы (семейство Flaviviridae) Флавивирусы (от лат. flavus – желтый)
– семейство РНК- содержащих оболочечных вирусов. Имеют сферическую
форму, размер 40–60 нм. Вирион имеет оболочку, капсид и геном, состоящий из
однонитевой линейной плюс-нити РНК, на оболочке имеются шипы из
гемагглютининов. Репродукция вируса происходит в цитоплазме, вирионы
собираются и отпочковываются через мембрану эндоплазматического ретикулума
путем
экзоцитоза
или
при
лизисе
клетки.
К флавивирусам, переносимым комарами относятся: вирусы желтой лихорадки,
Денге, Японского энцефалита, энцефалитов долины Муррея и Сент-Луис, а также
лихорадки
Западного
Нила.
Флавивирусы, переносимые клещами – вирусы Кьяссанурской лесной болезни,
клещевого энцефалита, Шотландского энцефалита овец, Омской геморрагической
лихорадки
и
др.
Микробиологическая
диагностика
Исследуемый
материал:
цереброспинальная
жидкость,
кровь,
моча,
носоглоточный
смыв,
кал.
Вирусологический метод. Патологическим материалом заражают культуры
клеток или мышей-сосунков (интрацеребрально). Идентификацию производят с
помощью
РН,
РСК,
РНГА,
ИФА.
Серологический метод. Определяют наличие антител или антигенов в сыворотке
крови
с
помощью
реакций
РТГА,
РСК,
РН,
ИФА.
Молекулярно-генетический метод. Вирусы обнаруживают с помощью ПЦР.
Европейский
и
дальневосточный
клещевой
энцефалит
Клинические проявления: лихорадка, энцефалит, вялые парезы и параличи.
Исследуемый материал: сыворотка крови в острой или реконвалесцентной стадии,
ликвор,
моча,
носоглоточный
смыв.
Серологический метод. Исследуют кровь с помощью реакций ИФА, РСК, РТГА,
РПГА, РН методом парных сывороток. Лабораторным подтверждением диагноза
является четырехкратное нарастание титра антител. При отсутствии нарастания
титра антител, сыворотку больных исследуют трижды: в первые дни болезни,
через 3–4 недели и через 2–3 месяца от начала заболевания.
Вирусологический метод. Патологическим материалом заражают культуру тканей
или интрацеребрально мышей- сосунков. Вирус обнаруживают в первые 7 дней
болезни.
Идентифицируют
с
помощью
РН
и
РИФ.
Молекулярно-генетический метод. Определяют наличие вируса в крови или
ликворе методом ПЦР. На исследование может быть взят клещ для определения
вирусной
РНК.
Желтая
лихорадка
Клинические проявления: интоксикация, геморрагический синдром, поражение
почек и печени. Исследуемый материал: кровь. Серологический метод. Выявляют
антитела в крови методом парных сывороток с помощью РСК, РТГА, ИФА, РН.
Диагностическим является четырехкратное нарастание титра антител.
Вирусологический метод. Вирус из крови выделяют при заражении культуры
клеток, куриных эмбрионов, мышей- сосунков. Идентификацию проводят в РН.
Японский
энцефалит
Клинические проявления: лихорадка, интоксикация, менингоэнцефалит.
Исследуемый
материал:
кровь,
ликвор.
Серологический метод. Антитела в крови выявляют методом парных сывороток с
помощью реакций РСК, РН, РТГА, ИФА. Вирусологический метод.
Патологическим материалом заражают культуры клеток или новорожденных
мышей.
Идентификацию
проводят
в
РН,
РСК,
РТГА,
ИФА.
Молекулярно-генетический метод. Определяют РНК вируса в процессе ПЦР-
анализа.
Лихорадка
Западного
Нила
Клинические проявления: лихорадка, кожные экзантемы, полиаденит,
менингоэнцефалит. Исследуемый материал: кровь, ликвор. Серологический
метод. В крови с помощью реакций РТГА, РСК, и РН определяют нарастание
титра
антител
методом
парных
сывороток.
Вирусологический метод. Из крови больного вирус выделяют при заражении
культур клеток и новорожденных мышей (внутримозговое заражение).
Идентификацию
возбудителя
осуществляют
с
помощью
РИФ.
Лихорадка
Денге
Клинические проявления: геморрагическая диарея, интоксикация, мышечные и
суставные боли, изменяющие походку, которая становится «щеголеватой», как у
лондонских
денди
(от
англ.
Dandy
–
франт).
Исследуемый
материал:
сыворотка
крови.
Серологический метод. Антитела выявляют методом парных сывороток с
помощью
реакций
ИФА,
РСК,
РН,
РТГА.
Вирусологический метод. Патологическим материалом заражают культуру клеток
или новорожденных мышей. Идентификация производится с помощью РН, РСК,
РТГА.
105.
Европейский
и
дальневосточный
клещевой
энцефалит
Клинические проявления: лихорадка, энцефалит, вялые парезы и параличи.
Исследуемый материал: сыворотка крови в острой или реконвалесцентной стадии,
ликвор,
моча,
носоглоточный
смыв.
Серологический метод. Исследуют кровь с помощью реакций ИФА, РСК, РТГА,
РПГА, РН методом парных сывороток. Лабораторным подтверждением диагноза
является четырехкратное нарастание титра антител. При отсутствии нарастания
титра антител, сыворотку больных исследуют трижды: в первые дни болезни,
через 3–4 недели и через 2–3 месяца от начала заболевания.
Вирусологический метод. Патологическим материалом заражают культуру тканей
или интрацеребрально мышей- сосунков. Вирус обнаруживают в первые 7 дней
болезни.
Идентифицируют
с
помощью
РН
и
РИФ.
Молекулярно-генетический метод. Определяют наличие вируса в крови или
ликворе методом ПЦР. На исследование может быть взят клещ для определения
вирусной РНК.
106.
КИХ
СПИД-АССОЦИИРОВАННЫХ
ИНФЕКЦИЙ
Вирус
иммунодефицита
человека
(ВИЧ)
Вирус иммунодефицита человека имеет типы ВИЧ-1, а также ВИЧ-2 (human
immunodeficiency virus- HIV-1, HIV-2) и относится к семейству Retroviridae , роду
Lentivirus.
Вирион имеет сферическую форму, размер 100–130 нм и покрыт оболочкой,
которая содержит белки р24 и поверхностные гликопротеины gp120 и gp41.
Нуклеоид имеет конусовидную форму с расположенной внутри диплоидной
одноцепочечной геномной РНК, нуклеокапсидным белком и комплексом
ферментов:
обратная
транскриптаза,
РНКаза,
интеграза,
протеаза.
Геном ВИЧ существует в двух видах: − геномная РНК вируса;
− интегрированная в хромосому клетки-хозяина ДНК, синтезированная на основе
геномной
РНК
(«провирус»).