Файл: yablonskii_v_a_praktichne_akusherstvo_ginekologiya_ta_bioteh.pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 02.12.2019
Просмотров: 6935
Скачиваний: 1
75
Якщо
неможливо
відважити
необхідну
кількість
антибіотиків
,
то
вливають
у
флакон
з
антибіотиком
4
мл
перевареної
і
охолодженої
до
20°
С
дистильованої
води
,
після
повного
розчинення
препарату
набирають
необхідну
його
кількість
і
вносять
у
колбу
,
де
готують
розріджувач
.
При
приготуванні
великої
кількості
розріджувача
підбирають
флакони
з
необхідною
кількістю
антибіотиків
.
Глюкозо
-
фосфатно
-
жовткове
середовище
для
сперми
барана
.
Відважують
послідовно
3,2
г
глюкози
медичної
безводної
, 2,08
г
дво
-
заміщеного
12-
водного
натрію
фосфату
, 0,08
г
однозаміщеного
калію
фосфату
, 0,1 – 0,2
г
розчинного
стрептоциду
,
по
50 – 75
тис
.
ОД
пе
-
ніциліну
та
стрептоміцину
.
Відмірюють
100
мл
кип
’
яченої
і
охоло
-
дженої
до
36 °
С
дистильованої
води
,
вливають
її
у
колбу
з
відваже
-
ними
реактивами
,
розмішують
скляною
паличкою
до
повного
роз
-
чинення
складників
і
фільтрують
.
Додають
20
мл
жовтка
курячого
яйця
(
як
описано
вище
).
Накри
-
вають
колбу
з
розріджувачем
стерильною
серветкою
і
ставлять
у
ка
-
струлю
з
теплою
водою
.
Глюкозо
-
хелато
-
цитратно
-
сульфатне
середовище
(
ГХЦС
)
для
роз
-
рідження
сперми
кнура
.
Наливають
у
чисту
хімічну
колбу
100
мл
дистильованої
води
,
додають
4
г
глюкози
,
накривають
паперовим
ковпаком
,
ставлять
на
електроплитку
і
кип
’
ятять
1 – 2
хв
.
Знімають
колбу
з
вогню
,
охолоджують
її
вміст
до
80 °
С
,
додають
3,8
г
натрію
цитрату
, 0,5
г
двовуглекислої
соди
,
а
потім
при
температурі
55 –
58 °
С
додають
2,6
г
хелатону
.
Коли
середовище
охолоне
до
40 – 45 °
С
,
додають
25 – 30
тис
.
ОД
спермосану
.
Перевірка
якості
виготовлених
розріджувачів
.
Чистою
стериль
-
ною
скляною
паличкою
наносять
на
предметне
скло
краплю
нероз
-
рідженої
сперми
з
відомою
рухливістю
сперміїв
.
Поряд
з
нею
нано
-
сять
краплю
перевірюваного
розріджувача
,
накривають
накривним
скельцем
і
оцінюють
під
мікроскопом
при
температурі
38 – 40 °
С
рухливість
сперміїв
на
межі
злиття
обох
крапель
.
Якщо
вона
не
знизилася
,
то
розріджувач
можна
використовувати
.
Розрідження
сперми
.
Виготовивши
розріджувач
,
кожна
підгрупа
студентів
розріджує
сперму
відповідно
до
отриманого
завдання
з
та
-
ким
розрахунком
,
щоб
уся
група
виготовила
серію
розріджень
,
по
-
чинаючи
від
1 : 1
до
1 : 100.
Посуд
для
розріджування
сперми
нагрівають
у
термостаті
чи
на
водяній
бані
до
температури
30 – 35 °
С
.
Спочатку
розріджують
спе
-
рму
у
спермоприймачі
у
співвідношенні
1 : 1,
обережно
додавши
до
неї
(
по
стінці
)
однакову
кількість
розріджувача
.
Потім
переносять
у
підігрітий
до
30 – 35 °
С
градуйований
змішувач
1
мл
цієї
сперми
і
доливають
до
неї
поступово
по
стінці
таку
кількість
розріджувача
,
щоб
досягти
необхідного
ступеня
розрідження
.
Після
доливання
кожної
порції
розріджувача
старанно
змішують
його
зі
спермою
.
76
Після
розрідження
сперми
перевіряють
її
на
рухливість
сперміїв
.
Щоб
порівняти
вплив
різного
ступеня
розрідження
сперми
на
рухли
-
вість
сперміїв
,
на
чисте
предметне
скло
наносять
поступово
краплі
сперми
різного
ступеня
розрідження
(
використовуючи
також
сперму
,
розріджену
іншими
студентами
),
уважно
розглядають
їх
і
оцінюють
активність
сперміїв
.
Дані
про
оцінку
записують
у
вигляді
таблиці
.
2.6.
Зберігання
та
використання
замороженої
сперми
Завдання
.
Оволодіти
різними
методами
зберігання
сперми
.
Короткі
методичні
вказівки
.
Після
попереднього
ознайомлення
з
методами
збері
-
гання
сперми
різних
видів
тварин
студенти
формують
підгрупи
по
3 – 5
чоловік
і
са
-
мостійно
оцінюють
сперму
,
розріджують
її
відповідно
до
отриманого
завдання
,
розфа
-
совують
і
виконують
усі
технологічні
прийоми
,
передбачені
методикою
зберігання
сперми
.
Сперму
,
поставлену
на
короткочасне
зберігання
,
студенти
оцінюють
за
рух
-
ливість
сперміїв
протягом
зберігання
,
а
глибокозаморожену
—
щотижня
і
роблять
відповідні
записи
в
зошиті
.
Попередні
зауваження
.
Штучне
осіменіння
сільськогосподар
-
ських
тварин
проводять
нині
переважно
збереженою
спермою
,
тому
одним
з
головних
завдань
племпідприємств
і
пунктів
штучного
осі
-
меніння
має
бути
збереження
високого
виживання
та
запліднюваль
-
ної
здатності
сперміїв
з
моменту
еякуляції
і
аж
до
введення
їх
у
ста
-
теві
шляхи
самки
.
Для
цього
насамперед
необхідно
сповільнити
об
-
мін
речовин
у
спермі
,
знизити
температуру
її
зберігання
або
додати
до
неї
речовини
,
що
гальмують
рухливість
сперміїв
.
Застосовують
короткочасне
(
при
температурі
2 – 4°
С
або
при
кім
-
натній
температурі
)
і
довготривале
зберігання
сперми
у
глибоко
замороженому
вигляді
.
Нині
практично
всі
пункти
штучного
осіме
-
ніння
тварин
користуються
останнім
методом
.
В
охолодженій
до
2 – 4
º
С
спермі
обмінні
процеси
сповільнюють
-
ся
,
знижується
нагромадження
токсичних
продуктів
обміну
речо
-
вин
,
різко
зменшується
використання
на
енергетичні
цілі
пластич
-
них
речовин
протоплазми
,
що
викликає
у
сперміїв
стан
анабіозу
і
збільшує
їх
живучість
.
При
зберіганні
сперми
в
умовах
кімнатної
температури
у
ній
галь
-
муються
обмінні
процеси
наявними
у
розріджувачі
слабкими
кисло
-
тами
чи
хелатоном
.
У
глибокозамороженій
спермі
настає
глибокий
анабіоз
сперміїв
з
майже
повним
припиненням
обмінних
процесів
.
Методи
зберігання
сперми
в
замороженому
вигляді
передбачають
захист
сперміїв
від
температурного
шоку
при
охолодженні
до
0
º
С
і
від
кристалізації
внутрішньоклітинної
рідини
в
процесі
заморожування
.
У
заморо
-
женій
до
мінус
196
º
С
спермі
всі
обмінні
процеси
знижуються
до
рів
-
ня
підтримки
живучості
сперміїв
у
нерухомому
стані
,
і
вона
може
зберігатися
безмежно
довго
.
77
Необхідними
умовами
зберігання
сперми
є
її
висока
якість
,
роз
-
рідження
та
суворе
дотримання
температурного
режиму
Зберігання
сперми
бугая
,
барана
,
кнура
та
жеребця
при
плюс
2 –
4 °
С
.
Охолодження
розрідженої
сперми
до
плюс
2 – 4
º
С
викликає
у
сперміїв
стан
анабіозу
,
проте
за
надто
раптового
зниження
темпера
-
тури
навіть
від
38
до
12 – 18 °
С
у
них
виникає
температурний
шок
(
холодовий
удар
)
з
незворотною
втратою
рухливості
.
Сперму
бугая
охолоджують
до
температури
плюс
2 – 4 °
С
поступово
,
протягом
2 – 3
год
.
Для
цього
скляну
мензурку
з
розрідженою
спермою
бугая
став
-
лять
спочатку
в
посуд
з
теплою
водою
(30 °
С
),
потім
переносять
на
20
хв
в
інший
посуд
з
температурою
22 °
С
і
лише
після
цього
розфа
-
совують
при
кімнатній
температурі
в
чисті
і
стерильні
флакони
з
-
під
антибіотиків
,
одноразові
стерильні
скляні
чи
поліетиленові
ам
-
пули
,
поліетиленові
пробірки
об
’
ємом
1
мл
.
Розливають
розріджену
сперму
у
флакони
з
-
під
антибіотиків
майже
до
самої
шийки
,
закривають
гумовими
корками
,
підклавши
під
них
аркушики
парафінованого
паперу
,
й
закріплюють
гумовими
кільцями
.
Для
розфасовування
сперми
бугая
в
поліетиленові
ампули
вий
-
мають
з
пакета
стерильну
поліетиленову
ампулу
,
надрізають
її
верх
,
стискають
її
двома
пальцями
і
занурюють
шийку
ампули
в
мензур
-
ку
з
розрідженою
спермою
.
Розтискають
пальці
і
,
коли
ампула
на
-
повниться
спермою
,
запаюють
її
отвір
,
притуляючи
шийкою
до
на
-
грітої
праски
через
фторопластову
плівку
.
Складають
наповнені
спе
-
рмою
ампули
в
пластмасові
коробки
з
покришками
і
залишають
їх
при
кімнатній
температурі
на
20 – 30
хв
.
Для
розфасовування
розрідженої
сперми
бугая
у
скляні
ампули
наливають
її
в
чисту
суху
стерильну
чашку
пневматичного
фасу
-
вального
апарата
.
Потім
беруть
комплект
чистих
сухих
скляних
стерильних
ампул
,
занурюють
їх
шийками
у
сперму
,
накривають
чашку
покришкою
і
вміщують
її
у
гніздо
апарата
.
Натискують
кно
-
пку
вмикача
і
ампули
заповнюються
спермою
.
Запаюють
кінці
ам
-
пул
на
некіптявому
полум
’
ї
апарата
Флетчера
.
Вміщують
їх
у
спе
-
ціальні
коробки
(
чи
поліетиленові
мішечки
)
і
кладуть
у
термос
на
шар
вати
над
льодом
.
Розфасовану
сперму
ставлять
на
10
хв
у
кю
-
вету
з
водопровідною
водою
,
після
чого
переносять
на
полицю
холо
-
дильника
,
де
температура
підтримується
у
межах
плюс
2 – 5 °
С
.
Сперму
барана
,
розфасовану
в
ампули
,
пробірки
чи
флакони
,
ви
-
тримують
протягом
10 – 15
хв
при
кімнатній
температурі
,
потім
об
-
гортають
їх
шаром
вати
або
вміщують
у
поролонові
амортизатори
,
а
потім
—
у
поліетиленові
чи
гумові
пакети
,
герметично
закривають
і
поступово
охолоджують
до
плюс
2 – 5 °
С
в
побутовому
холодильнику
чи
харчовому
термосі
з
льодом
,
підстеливши
під
пакети
із
спермою
шар
вати
,
який
через
3 – 4
год
виймають
,
а
пакети
із
спермою
став
-
лять
безпосередньо
на
лід
.
78
Зберігання
сперми
кнура
при
температурі
16 – 20 °
С
.
Взяту
на
штучну
вагіну
й
оцінену
сперму
кнура
розріджують
середовищами
ГХЦС
чи
ГХЦ
,
визначають
у
ній
активність
сперміїв
,
розливають
у
скляні
колби
чи
поліетиленові
флакони
,
накривають
їх
негер
-
метично
поліетиленовою
плівкою
,
вміщують
у
невелику
картонну
коробку
і
зберігають
в
затемненому
місці
при
температурі
16…20 °
С
.
Для
зберігання
сперми
при
дещо
нижчих
температурах
(
не
нижче
6 °
С
)
її
розріджують
середовищами
ГХЦСЖ
або
ГХЦЖ
.
Транспортують
розріджену
сперму
в
термосах
,
термос
-
скриньках
,
побутових
сумках
-
холодильниках
при
температурі
16 – 20 °
С
,
за
-
кривши
щільно
колби
зі
спермою
.
На
пункті
штучного
осіменіння
сперму
зберігають
у
негерметично
закритих
колбах
.
Не
менше
одно
-
го
разу
на
добу
її
легенько
змішують
.
Термін
використання
такої
спе
-
рми
(
при
рухливості
сперміїв
не
нижче
6
балів
) —
до
3-
х
діб
.
Методи
заморожування
сперми
бугая
.
Заморожування
сперми
бугая
у
вигляді
гранул
над
парою
рідкого
азоту
на
фторопластовій
пластинці
(
рис
. 32).
Для
заморожування
використовують
сперму
,
попередньо
оцінену
(
з
концентрацією
сперміїв
не
менше
0,7
млрд
в
1
мл
та
рухливістю
їх
не
нижче
8
балів
)
й
розріджену
у
2
чи
10
разів
лактозо
-
жовтково
-
гліцериновим
середовищем
і
витриману
4 – 6
год
в
холодильнику
.
Сперму
низьких
ступенів
розрідження
застосовують
для
ви
-
готовлення
концен
-
трованих
гранул
по
0,1 – 0,2
мл
,
які
по
-
требують
додаткового
розрідження
на
пун
-
ктах
штучного
осіме
-
ніння
,
а
великі
—
для
виготовлення
гранул
об
’
ємом
0,5 – 1
мл
,
що
не
потребують
додат
-
кового
розрідження
.
Рідкий
азот
нали
-
вають
у
ванну
з
пінопластового
блока
,
в
яку
вставлено
емальовану
ме
-
талеву
кювету
.
Опускають
фторопластову
пластинку
на
1
хв
в
рідкий
азот
(
до
припинення
кипіння
азоту
),
виймають
її
,
закріплюють
її
на
ви
-
соті
2 – 3
см
над
поверхнею
рідкого
азоту
.
Розріджену
і
витриману
протягом
4 – 6
год
при
5 °
С
сперму
на
-
бирають
у
стерильний
холодний
2-
мілілітровий
пластмасовий
шприц
з
голкою
для
взяття
крові
чи
в
спеціальну
крапельницю
і
швидко
накапують
у
кожну
з
малих
ямок
пластинки
по
0,1 – 0,2
мл
сперми
,
а
у
великі
ямки
—
по
0,5 – 1
мл
.
Рис
. 32.
Заморожування
сперми
бугая
у
вигляді
гранул
:
1
—
охолодження
пластинки
;
2
—
розлив
сперми
в
виїмки
охо
-
лодженої
пластини
(2 – 3
хв
);
3
—
охолодження
гранул
над
рідким
азотом
(2
хв
);
4
—
занурення
в
рідкий
азот
(1 – 2
хв
);
5
—
зсипання
гранул
в
контейнер
(1 – 2
хв
);
6
—
роз
-
лив
сперми
79
Витримують
пластинку
із
спермою
над
поверхнею
рідкого
азоту
1,5 – 2
хв
,
після
чого
занурюють
їх
на
1 – 2
хв
у
рідкий
азот
,
знову
пі
-
діймають
,
нахиляють
убік
і
згортають
гранули
охолодженою
в
рідкому
азоті
лопаткою
з
органічного
скла
в
кювету
чи
в
кружку
з
рідким
азо
-
том
.
Потім
пересипають
гранули
в
охолоджені
до
температури
рідко
-
го
азоту
чашечку
чи
марлеві
мішечки
,
прикріплюють
до
них
бирки
з
кличкою
бугая
і
датою
заморожування
сперми
й
опускають
у
посуди
-
ну
Дьюара
з
рідким
азотом
,
яку
нещільно
закривають
кришкою
.
Заморожування
сперми
бугая
в
облицьованих
гранулах
(
за
Ф
.
І
.
Осташком
).
З
’
єднавши
спермоприймач
із
свіжовзятою
спермою
із
стерильною
поліетиленовою
місткістю
(
об
’
ємом
200 – 400
мл
)
спеціа
-
льного
обладнання
для
розріджування
сперми
,
заповненого
середо
-
вищем
№
1,
розріджують
сперму
у
співвідношенні
1 : 1.
Витримують
розріджену
сперму
при
кімнатній
температурі
5 – 10
хв
,
після
чого
розріджують
її
так
само
середовищем
№
2
до
концентрації
15
млн
сперміїв
у
дозі
.
Під
’
єднують
до
місткості
поліетиленову
трубку
діаметром
3,8 – 4
мм
і
товщиною
стінки
120
мкм
і
витісняють
у
неї
розріджену
сперму
за
допомогою
апарата
ПРЖ
.
Розділяють
заповнену
спермою
трубку
на
частини
по
0,25 – 0,33
мл
і
герметизують
термічним
способом
.
Зси
-
пають
облицьовані
гранули
в
алюмінієві
туби
,
закривають
їх
поро
-
лоновими
корками
й
закріплюють
у
спеціальному
пристрої
для
ек
-
вілібрації
та
заморожу
-
вання
сперми
.
Заповне
-
ний
гранулами
пристрій
вміщують
у
холодиль
-
ник
з
температурою
2 –
5 °
С
на
4 – 6
год
,
потім
занурюють
обойму
апа
-
рата
з
тубами
на
8 –
10
хв
у
посудину
з
рідким
азотом
,
після
чого
опускають
повністю
у
посудину
Дьюара
(
рис
. 33).
Перевірка
рухливості
сперміїв
у
розмороженій
спермі
.
У
чистий
стерильний
флакон
з
-
під
пеніциліну
вносять
1
мл
2,9 %-
го
розчину
натрію
цитрату
,
закривають
корком
і
ставлять
на
водяну
баню
з
те
-
мпературою
40 °
С
.
Підтягують
за
бирку
чашечку
з
гранулами
до
горловини
посудини
Дьюара
і
анатомічним
стерильним
пінцетом
з
гладенькими
обточеними
краями
,
попередньо
охолодженим
до
тем
-
ператури
мінус
196 °
С
,
беруть
з
неї
одну
малу
гранулу
сперми
й
швидко
опускають
у
флакон
з
підігрітим
розчином
натрію
цитрату
.
Струшують
флакон
для
прискорення
розморожування
гранули
.
Відразу
після
розморожування
гранули
флакон
виймають
з
теплої
Рис
. 33.
Посуд
Дьюара
для
стаціонарного
зберіган
-
ня
сперми
:
зліва
—
посудина
КВ
-6202;
решта
—
посудини
АТ
-7, «
Хар
-
ків
-30»,
СД
-50,
СД
-20
та
АТ
-6