Файл: yablonskii_v_a_praktichne_akusherstvo_ginekologiya_ta_bioteh.pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 02.12.2019
Просмотров: 6932
Скачиваний: 1
70
де
Sa —
показник
абсолютного
виживання
сперміїв
;
Σ
—
сума
;
а
—
оцінка
сперміїв
за
рухливістю
(
активністю
)
в
балах
;
t —
час
між
по
-
передньою
і
наступною
перевірками
;
n —
кількість
проведених
до
-
сліджень
.
Відносний
показник
виживання
сперміїв
—
це
відношення
абсо
-
лютного
показника
їх
виживання
у
розрідженій
відповідно
спермі
до
показника
їх
виживання
у
нерозрідженій
спермі
.
При
застосуванні
спрощеного
методу
оцінки
виживання
сперміїв
шкалу
розрідження
сперми
бугая
можна
обмежити
шістьма
пробір
-
ками
(
в
2, 4, 8, 16, 32
та
64
рази
),
а
в
барана
—
чотирма
пробірками
(
в
2, 4, 8
та
16
разів
)
і
рухливість
сперміїв
визначати
лише
2 – 3
доби
.
Іноді
виживання
сперміїв
у
розрідженій
спермі
перевіряють
при
-
скореним
методом
—
витримуванням
їх
у
водяній
бані
при
38
º
С
з
щогодинним
визначенням
рухливості
сперміїв
.
При
визначенні
виживання
деконсервованої
сперми
експрес
-
методом
з
кожного
глибоко
замороженого
дуплетного
еякуляту
бе
-
руть
по
дві
дози
сперми
і
вмішують
на
інкубацію
у
термостат
або
в
автоматичну
водяну
баню
при
температурі
38
º
С
.
Одночасно
оціню
-
ють
вихідну
рухливість
сперміїв
і
фіксують
час
відтаювання
.
Через
5
год
оцінювання
повторюють
.
Придатною
для
осіменіння
корів
вважається
сперма
з
вихідною
рухливістю
сперміїв
не
нижче
4
бали
і
виживанням
5
год
.
2.4.
Санітарна
оцінка
технологічних
процесів
,
що
застосовуються
при
штучному
осіменінні
Дослідження
сперми
та
змиву
з
препуція
на
бактеріальне
і
грибкове
забруднення
та
колі
-
титр
Місце
проведення
заняття
:
лабораторія
,
клініка
або
навчальний
пункт
кафедри
.
Оснащення
заняття
:
сперма
,
змиви
з
препуція
та
інструментів
,
середовища
для
розрідження
сперми
,
живильні
середовища
МПА
,
МПБ
,
Кітта
—
Тароцці
,
Буліржа
,
Літмана
,
Лен
НДВІ
,
Сабура
,
Чапека
,
МПА
у
бактеріологічних
чашках
,
термостат
,
предметні
та
накривні
скельця
,
бактеріологічні
фарби
,
мікроскопи
.
Короткі
методичні
вказівки
.
Заняття
відбувається
у
два
етапи
:
спочатку
роблять
змиви
з
приладів
,
інструментів
,
беруть
сперму
та
змиви
з
препуція
,
роблять
з
них
посіви
на
живильні
середовища
і
ставлять
у
термостат
на
пророщування
.
Для
визна
-
чення
мікробного
та
грибкового
забруднення
повітря
ставлять
відкриті
чашки
Петрі
з
МПА
у
приміщенні
лабораторії
,
манежі
,
стаціонарі
,
навчальному
пункті
і
перено
-
сять
у
термостат
на
пророщування
.
Друга
частина
заняття
має
форму
студентської
наукової
роботи
.
Розділивши
студентів
на
малі
підгрупи
,
викладач
дає
конкретні
завдання
на
час
пророщування
культур
—
приходити
почергово
в
лабораторію
кафе
-
дри
і
визначати
зміни
середовищ
,
кількість
колоній
,
видовий
склад
мікробів
і
грибів
через
24
год
протягом
пророщування
.
Потім
беруть
з
термостату
,
відповідно
до
вказі
-
вки
викладача
,
пробірки
та
бактеріологічні
чашки
із
заздалегідь
зробленими
посі
-
вами
і
визначають
їх
мікробне
та
грибкове
забруднення
,
як
описано
нижче
.
Взяття
змиву
з
препуція
(
рис
. 30).
Фіксують
плідника
у
спеці
-
альному
станку
,
обмивають
йому
препуцій
,
вставляють
у
його
канал
стерильну
гумову
трубку
чи
катетер
і
,
з
’
єднавши
її
з
шприцом
,
вво
-
71
дять
у
порожнину
препуція
5 – 10
мл
стерильного
фізрозчи
-
ну
.
Затиснувши
край
препуція
рукою
,
енер
-
гійно
масажують
йо
-
го
.
Набирають
розчин
у
шприц
і
виливають
у
стерильну
пробірку
.
Визначення
колі
-
титру
сперми
та
зми
-
ву
з
препуція
.
Став
-
лять
у
штатив
сім
сте
-
рильних
пробірок
.
У
першу
вносять
1
мл
змиву
чи
сперми
і
,
додавши
1
мл
стерильного
фізрозчину
,
одержу
-
ють
розбавлення
1 : 1.
Набирають
і
переносять
з
неї
1
мл
суміші
в
наступну
пробірку
і
додають
10
мл
стерильного
фізрозчину
.
Так
са
-
мо
переносять
з
2-
ої
пробірки
1
мл
суміші
в
3-
тю
і
додають
10
мл
фі
-
зрозчину
,
з
3-
ої
—
у
4-
ту
і
т
.
д
.
Отримавши
,
таким
чином
,
серію
роз
-
ріджень
1 : 1; 1 : 10; 1 : 100; 1 : 1000; 1 : 10 000; 1 : 100 000;
1 : 1 000 000,
з
кожного
роблять
посіви
на
середовище
Буліржа
.
Зміна
кольору
середовища
і
поява
у
газових
трубочках
газу
після
24-
годинного
перебування
посівів
у
термостаті
при
температурі
37 –
37,5 °
С
свідчать
про
наявність
у
спермі
та
змиві
з
препуція
кишко
-
вої
палички
.
Колі
-
титр
сперми
не
повинен
перевищувати
1 : 1 – 1 : 10,
змиву
з
препуція
— 1 : 100.
Визначення
мікробного
та
грибкового
забруднення
сперми
і
пре
-
пуція
.
Готують
серію
розріджень
сперми
чи
змиву
з
препуція
(1 : 10,
1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10 000
та
1 : 100 000),
набирають
стерильною
піпе
-
ткою
з
останніх
трьох
пробірок
по
0,5
мл
вмісту
і
рівномірно
розподі
-
ляють
в
чашках
Петрі
на
поверхні
МПБ
.
Витримують
чашки
15 –
20
хв
(
до
повної
абсорбції
рідини
в
агар
),
перевертають
догори
дном
,
маркують
склографом
і
переносять
у
термостат
на
48
год
.
Після
цього
підраховують
кількість
колоній
і
перераховують
на
1
мл
.
Дослідження
сперми
та
змиву
з
препуція
на
наявність
синьог
-
нійної
палички
.
Беруть
заздалегідь
приготовлені
стерильні
бакте
-
ріальні
чашки
з
МПБ
,
що
містить
1 – 2 %
цукру
і
,
зробивши
на
них
посів
сперми
та
змиву
з
препуція
,
ставлять
їх
на
6 – 7
діб
у
термо
-
стат
при
температурі
37 °
С
,
перевіряючи
посів
кожні
1 – 2
дні
.
Про
наявність
синьогнійної
палички
свідчить
зелено
-
голубе
за
-
барвлення
середовища
під
впливом
виділюваного
нею
піоціаніну
.
Дослідження
сперми
на
наявність
анаеробних
мікробів
.
Беруть
дві
пробірки
із
середовищем
Кітта
–
Тароцці
і
вносять
у
них
по
0,1
Рис
. 30.
Взяття
змиву
з
препуція
бугая
-
плідника
:
1
—
введення
катетера
в
порожнину
препуція
;
2
—
ін
’
єкція
в
препуцій
фізіологічного
розчину
;
3
—
масаж
препуція
та
ста
-
тевого
члена
;
4
—
збирання
змиву
в
чашку
Коха
(
за
Н
.
В
.
Ру
-
м
’
янцевим
, 1938)
72
мл
досліджуваної
сперми
.
Прогрівають
одну
з
пробірок
на
водяній
бані
при
80 °
С
протягом
20
хв
для
знищення
супутньої
вегетативної
мікрофлори
і
ставлять
обидві
пробірки
в
термостат
на
10
діб
при
37 °
С
.
Через
3 – 4
дні
треба
оцінити
інтенсивність
росту
мікробів
,
ха
-
рактер
осаду
,
наявність
та
ступінь
газоутворення
,
зробити
мазки
із
сперми
обох
пробірок
,
зафарбувати
за
Грамом
і
провести
мікроско
-
пію
.
Дослідження
сперми
та
змиву
з
препуція
на
вміст
грибків
.
Роб
-
лять
посів
сперми
і
змиву
з
препуція
на
одне
із
спеціальних
середо
-
вищ
—
Літмана
,
Лен
НДВІ
,
Сабура
чи
Чапека
;
культивують
їх
у
термостаті
10 – 45
днів
при
температурі
22 – 37 °
С
.
Перевіряють
ви
-
ділені
грибки
на
патогенність
.
За
аналогічною
методикою
проводять
перевірку
стерильності
си
-
нтетичних
середовищ
для
розрідження
сперми
.
Бактеріологічний
контроль
приладів
та
інструментів
,
які
вико
-
ристовують
для
взяття
і
введення
сперми
.
Взявши
5 – 10
мл
стериль
-
ного
фізрозчину
,
роблять
змиви
з
підготовленої
штучної
вагіни
,
шприца
-
катетера
,
піхвового
дзеркала
.
Вносять
по
0,1
мл
змиву
на
МПБ
та
середовище
Кітта
–
Тароцці
.
Далі
дослідження
проводять
так
само
,
як
при
визначенні
мікроб
-
ного
забруднення
сперми
.
Визначення
мікробного
і
грибкового
забруднення
повітря
лабо
-
раторії
,
манежу
та
приміщення
для
плідників
.
Ставлять
на
5
хв
у
різних
ділянках
приміщення
на
відстані
1,5
м
від
підлоги
відкриті
бактеріологічні
чашки
з
МПА
.
Після
цього
переносять
їх
у
термо
-
стат
і
щодня
підраховують
кількість
колоній
та
визначають
видовий
склад
мікробів
.
При
виявленні
грибків
роблять
з
них
посіви
на
спе
-
ціальні
середовища
для
визначення
їх
видового
складу
.
2.5.
Розрідження
сперми
Місце
проведення
заняття
:
лабораторія
кафедри
.
Мета
заняття
:
вивчити
склад
основних
синтетичних
та
біологічних
середовищ
для
розрідження
сперми
,
методику
їх
виготовлення
,
техніку
і
правила
розрідження
,
оволодіти
основними
методами
біологічного
контролю
якості
розріджувачів
.
Оснащення
заняття
:
свіжовзята
сперма
бугая
і
кнура
,
розріджена
сперма
бугая
,
барана
,
жеребця
,
дистильована
вода
,
аптечні
терези
з
наважками
,
необхідні
реакти
-
ви
(
натрію
цитрат
,
глюкоза
,
лактоза
,
глікокол
,
однозаміщений
калію
фосфат
,
хе
-
латон
,
двовуглекислий
натрій
,
магнію
сульфат
,
цитратна
кислота
,
калію
хлорид
,
амонію
сульфат
,
вітаміни
В
і
А
в
ампулах
,
гліцерин
),
бактеріостатичні
речовини
(
стрептоцид
,
пеніцилін
,
стрептоміцин
,
спермосан
),
свіжі
курячі
яйця
,
свіже
та
сухе
молоко
,
плоскодонні
колби
або
хімічні
склянки
,
мензурки
на
50
мл
,
змішувачі
(
вели
-
кі
й
малі
),
бактеріологічні
чашки
,
шприци
на
20
мл
,
скляні
палички
,
пеніцилінові
та
інсулінові
флакони
,
гумові
корки
для
них
,
марлеві
серветки
,
спиртові
тампони
,
па
-
перові
фільтри
;
пінцети
,
скальпелі
,
термометри
хімічні
,
мікроскопи
,
обігрівальні
столики
,
скринька
-
термостат
,
предметні
та
накривні
скельця
,
термоси
,
водяна
баня
(
каструля
),
електроплитки
,
таз
з
теплою
водою
,
одноразові
скляні
та
поліетиленові
ампули
,
пробірки
,
поліетиленові
мішечки
,
градуйовані
піпетки
,
фасувальний
апарат
73
та
апарат
Флетчера
,
термоси
різних
конструкцій
,
кружки
з
поліетиленової
плівки
з
діаметром
,
що
відповідає
отвору
термоса
,
пластмасові
круглі
коробки
для
складання
ампул
,
вата
сіра
,
лід
,
посудини
Дьюара
,
гумові
рукавиці
,
захисні
окуляри
,
спеціаль
-
не
обладнання
для
розрідження
сперми
,
автомат
ПРЖ
,
рогова
лопатка
,
побутовий
холодильник
,
водяна
баня
.
Короткі
методичні
вказівки
.
Обговоривши
з
викладачем
зміст
заняття
та
одер
-
жавши
необхідні
пояснення
,
студенти
приступають
до
виготовлення
розріджувачів
(
по
100
мл
,
відповідно
до
отриманих
завдань
),
оцінки
їх
і
розрідження
сперми
.
Попередні
зауваження
.
При
розробці
технології
штучного
осіменін
-
ня
для
кожного
виду
тварин
були
запропоновані
середовища
для
роз
-
рідження
сперми
(
глюкозо
-
фосфатне
,
жовтково
-
фосфатне
,
жовтково
-
цитратне
,
глікокол
-
жовтково
-
цитратне
,
молочне
та
ін
.).
Найпошире
-
нішими
для
короткочасного
зберігання
є
глюкозо
-
жовтково
-
цитратні
середовища
для
сперми
більшості
видів
тварин
.
Перехід
на
викорис
-
тання
замороженої
сперми
для
осіменіння
корів
і
телиць
їх
дещо
від
-
тіснив
,
проте
на
практиці
і
в
наукових
дослідженнях
іноді
вдаються
до
короткочасного
зберігання
сперми
,
тому
цей
метод
потрібно
знати
.
Слід
дотримуватися
таких
вимог
щодо
розрідження
сперми
:
розріджувачі
мають
бути
ізотонічними
зі
спермою
,
тобто
осмотич
-
ний
тиск
у
них
має
дорівнювати
тиску
всередині
спермія
;
розріджувачі
готують
лише
у
скляному
посуді
,
заздалегідь
вими
-
тому
,
простерилізованому
і
висушеному
;
розріджувач
готують
безпосередньо
перед
отриманням
сперми
від
плідника
.
Час
від
моменту
приготування
і
до
використання
роз
-
ріджувача
має
становити
не
більше
1 – 2
год
;
температура
розріджувача
в
момент
розрідження
повинна
бути
30 – 35 °
С
для
сперми
бугая
,
кнура
і
жеребця
і
25 – 30 °
С
—
для
спер
-
ми
барана
;
для
пригнічення
мікрофлори
до
складу
розріджувачів
додають
сануючі
речовини
в
таких
кількостях
(
з
розрахунку
на
100
мл
):
стрептоцид
— 120
мг
,
пеніцилін
кристалічний
(
натрієва
або
калієва
сіль
) — 25 – 50
тис
.
МО
,
стрептоміцин
сірчано
-
або
солянокислий
25 – 50
тис
.
МО
.
У
середовища
для
кімнатних
температур
їх
вводять
у
подвійній
кількості
;
при
розрідженні
сперми
розріджувач
приливають
до
сперми
,
а
не
навпаки
;
перед
розрідженням
і
після
нього
визначають
рухливість
сперміїв
.
Виготовлення
розріджувачів
.
Глюкозо
-
жовтково
-
цитратний
роз
-
ріджувач
сперми
бугая
.
Підвішують
аптечні
терези
на
штативі
та
зрівноважують
їх
,
кладуть
на
обидві
шальки
терезів
паперові
філь
-
три
однакових
розмірів
і
ще
раз
зрівноважують
терези
.
У
велику
чисту
хімічну
колбу
на
3
л
наливають
бідистильованої
води
(
для
усієї
групи
),
накривають
її
паперовим
чи
поліетиленовим
ковпаком
,
ставлять
на
електроплитку
,
доводять
до
кипіння
й
охоло
-
джують
до
температури
35°
С
.
На
ліву
шальку
терезів
пінцетом
,
що
є
в
коробці
з
наважками
,
кладуть
триграмовий
тягарець
,
відкривають
банку
з
глюкозою
,
на
-
74
бирають
її
чистою
роговою
ложечкою
і
всипають
необхідну
кількість
на
паперовий
фільтр
,
що
лежить
на
правій
шальці
терезів
.
Наси
-
пають
відважену
кількість
глюкози
в
чисту
суху
колбу
на
100
мл
і
роблять
про
це
відмітку
на
колбі
або
кладуть
біля
неї
аркуш
паперу
з
рецептом
розріджувача
та
роблять
у
ньому
відповідні
позначки
.
Знову
кладуть
папірець
на
терези
,
старанно
витирають
рогову
ло
-
жечку
ваткою
від
решток
глюкози
,
відважують
так
само
1,4
г
натрію
цитрату
і
120
мг
стрептоциду
та
всипають
їх
у
ту
саму
колбу
.
Відмірюють
100
мл
перевареної
і
охолодженої
до
35 °
С
дистильо
-
ваної
води
,
вливають
її
у
колбу
з
відваженими
реактивами
,
розмі
-
шують
скляною
паличкою
до
повного
їх
розчинення
і
фільтрують
крізь
стерильний
паперовий
фільтр
.
Після
цього
куряче
яйце
миють
щіткою
,
витирають
насухо
марлевою
серветкою
і
протирають
шка
-
ралупу
тампоном
,
просоченим
70 %-
м
спиртом
(
рис
. 31,
а
)
або
витри
-
мують
його
10 – 15
хв
у
настільній
бактерицидній
камері
під
ульт
-
рафіолетовими
променями
.
За
допомогою
стерильного
скальпеля
чи
пінцета
розколюють
шкаралупу
яйця
на
дві
половини
і
,
пере
-
кладаючи
жовток
з
однієї
половини
на
другу
над
чашкою
,
відокрем
-
люють
його
від
білка
(
рис
. 31,
б
).
Перекладають
жовток
на
стериль
-
ний
аркуш
фільтрувального
паперу
і
,
перекочуючи
його
по
паперу
,
об
-
сушують
від
решток
білка
(
рис
. 31,
в
).
Складають
краї
паперу
вдвоє
,
трохи
стиснувши
жовток
,
проколюють
сте
-
рильним
скальпелем
його
оболонку
(
рис
. 31,
г
)
і
зливають
у
стерильну
мензурку
,
витісняють
рештки
жовт
-
ка
,
легко
здавлюючи
фільтр
іззовні
(
рис
. 31,
д
).
Відмірюють
12
мл
жовтка
і
вно
-
сять
у
колбу
з
розчиненими
у
ній
ком
-
понентами
.
Старанно
розмішують
,
накривають
стерильною
серветкою
і
ставлять
в
термостат
чи
каструлю
з
теплою
водою
(25 – 35 °
С
).
Беруть
флакон
пеніциліну
,
див
-
ляться
,
скільки
в
ньому
одиниць
дії
,
відкривають
його
,
зважують
на
апте
-
чних
терезах
масу
препарату
,
що
мі
-
стить
75 – 100
тис
.
ОД
,
і
вносять
її
у
колбу
.
Так
само
вносять
у
колбу
,
в
якій
готують
розріджувач
, 75 – 100
тис
.
ОД
стрептоміцину
.
Рис
. 31.
Обробка
курячих
яєць
перед
використанням
для
виготовлення
розріджувача
сперми
:
а
—
протирання
фурациліновим
тампо
-
ном
;
б
—
зливання
білка
;
в
—
висушуван
-
ня
жовтка
на
фільтрувальному
папері
;
г
—
проколювання
жовткової
плівки
стериль
-
ним
скальпелем
;
д
—
зливання
жовтка
в
мензурку
і
видалення
його
лишків
;
е
—
тонка
плівка
жовтка
,
що
залишається
на
фільтрі