Файл: 1. Предмет и задачи клинической иммунологии.docx

Снижение абсолютного числа Т-хелперов сопровождает Т-клеточные иммунодефициты.

Например, определенное, сниженное абсолютное количество Т-хелперов характеризует каждую из стадий ВИЧ-инфекции.

Изменение количества Т-лимфоцитов киллеров (CD8--)

У взрослого человека в норме относительное число Т-лимфоцитов: 19- 37 %, абсолютное число лимфоцитов 450-850 в 1 мл.

Повышение относительного числа Т-киллеров может происходить при инфекции, в момент, когда идет увеличение специфических цитотоксических клеток. Аналогичные изменения наблюдаются при опухолевом росте, в поствакцинальном периоде, при аллотрансплантации.

Снижение относительного числа Т-киллеров может иметь место при аутоиммунных и

аллергических заболеваниях. Учитывая, что при инфекционной и опухолевой патологии может наблюдаться миграция CD8-лимфоцитов в патологический очаг, в периферической крови может наблюдаться снижение относительного числа Т-киллеров.

Повышение абсолютного числа Т-киллеров может быть связано с лимфоцитозом и увеличением абсолютного числа Т-клеток. Повышение абсолютного числа Т-киллеров может быть связано с увеличением абсолютного числа антиген - специфических цитотоксических клеток - в ходе

иммунного ответа на инфекционный, вакцинальный, опухолевый, трансплантационный антигены.

Снижение абсолютного числа Т-киллеров выявляется при аутоиммунных и аллергических

заболеваниях, а также при инфекционных и опухолевых заболеваниях (миграция цитотоксических

-лимфоцитов в патологический очаг).

---

Изменение соотношения CD4/ CD8

В норме иммунорегуляторный индекс (соотношение CD4/ CD8) = 1-2.0 Увеличение соотношения CD4/ CD8 может происходить за счет:

1. 
   увеличения Т-хелперов (при нормальном количестве Т-киллеров),
   
2. 
   снижения CD8 лимфоцитов;
   
3. 
   увеличения CD4 и снижения CD8 лимфоцитов.
   

В первом случае это может быть следствием поляризованного Тх2 иммунного ответа на алло- или аутоантиген. Во втором случае - отражать миграцию Т-киллеров в патологический очаг при

инфекционной патологии, аутоиммунных и аллергических заболеваниях.

Увеличение соотношения CD4/ CD8 за счет увеличения CD4 и снижения CD8 лимфоцитов обычно выявляется при смешанном Тх1/Тх2 ответе на алло- или аутоантиген.

Снижение соотношения CD4/ CD8 может происходить за счет:

1. 
   увеличения Т-киллеров (при нормальном количестве Т-хелперов)
   
2. 
   снижения CD4 лимфоцитов
   
3. 
   увеличения CD8 и снижения CD4 лимфоцитов.
   

В первом случае это может быть следствием поляризованного Thl ответа при вирусной инфекции в тот период, когда нарастает число антигенспецифических цитотоксических Т-клеток.

Снижение CD4 лимфоцитов может происходить по многим причинам, в частности, за счет усиленного апоптоза Т-хелперов. Эти эффекты наблюдаются при ВИЧ-инфекции. Существует

представление, что прогрессивное снижение коэффициента CD4/ CD8 коррелирует с прогрессией ВИЧ-инфекции, достигая в терминальной стадии 0,1.

5. Тесты второго уровня.

Тесты 2 уровня:

1. 
   По В-системе лимфоцитов:
   

 Субпопуляции

---

В-лимфоцитов

 Субклассы Ig (IgG1-4, IgМ1-3, IgA1-2)

 Пролиферативная активность (РБТЛ) на В-митогены

 Антителопродуцирующая активность in vitro

 Способность отвечать на вакцинацию выработкой АТ

2. 
   По Т-системе лимфоцитов:
   

CD4+ и CD8+ субпопуляции, их соотношение (норма - 2,0) Если > 4,0 - активация (аутоиммунные процессы; аллергия) Если < 1,0 - супрессия (хр. инфекции, в т. ч. СПИД; опухоли)

Пролиферативная активность (РБТЛ) на Т-митогены (ФГА)

Цитотоксическая активность Тл

Продукция цитокинов (ИЛ-2,3,4,5,6 др.)

Внутрикожные пробы на митогены и анамнестические антигены

3. 
   По фагоцитозу:
   

 Непрямые методы – расшифровка отдельных этапов:

• 
  хемотаксис
  
• 
  опсонизация
  
• 
  адгезия
  
• 
  бактерицидная активность
  
• 
  метаболическая активность
  

4. 
   По системе комплемента:
   

 Комплементарный профиль:

количественное содержание и функциональная активность отдельных компонентов

 Уровень фрагментов деградации белков С: С3а, С5а, С4а и др.

Иммунодиагностические методы 2-го уровня включают в себя определение:

1. 
   относительное и абсолютное количество субпопуляций Т-лимфоцитов: Тh1 типа, Th 2 типа, Тh 3 типа;
   
2. 
   фенотипические характеристики клеток иммунной системы на разных этапах иммуногенеза и иммунопоэза. Подобные исследования очень важны, например, для диагностики лейкозов и других онкологических заболеваний;
   
3. 
   экспрессию активационных маркеров на поверхности иммунокомпетентных клеток. К таким маркерам относят: CD25, CD69, CD71, HLA-DR и др.;
   
4. 
   оценка способности Т- и В-лимфоцитов давать пролиферативный ответ на различные стимуляторы ( антигены);
   
5. 
   показатели апоптоза лимфоцитов;
   
6. 
   оценка концентрации цитокинов, вырабатываемых Th 1 и 2 типа (ИФНгамма, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5);
   
7. 
   активность киллерных лимфоцитов (Т-киллеров, NK-клеток и др.) с определением способности вырабатывать гранзимы и перфорин;
   
8. 
   классы и подклассы иммуноглобулинов (IgM, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl, IgA2, IgE);
   
9. 
   наиболее типичные цитокины в сыворотке крови и различных биологических жидкостях;
   
10. 
    различные этапы фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитов;
    
11. 
    другие показатели.
    

---

Для исследования иммунной системы используют различные биологические материалы:

1. 
   цельная периферическая кровь (как правило, венозная) является наиболее частым материалом;
   
2. 
   сыворотку крови - жидкую фракцию крови, освобожденную от фибриногена;
   
3. 
   плазму крови жидкую фракцию крови, содержащую фибриноген и, следовательно, способную к образованию сгустков фибрина;
   
4. 
   клеточные элементы крови;
   
5. 
   спинномозговую жидкость;
   
6. 
   синовиальную жидкость;
   
7. 
   бронхоальвеолярную жидкость;
   
8. 
   выделения слизистых секретов половых органов (из канала шейки матки, влагалища, семенная жидкость);
   
9. 
   выделения из носа (смывы или адсорбция на пористые материалы);
   
10. 
    мочу; 12 11. слезную жидкость, зубодесневую жидкость и пр.;
    

12. 
    супернатант с культивируемых in vitro клеток;
    
13. 
    гомогенаты тканей (биопсия или post mortem);, 14. цитоплазматические и ядерные компоненты клеток
    

6. Интерпретация данных иммунологического обследования

При анализе иммунограмм чаще всего прибегают к патогенетическому принципу их

интерпретации. Он основан на лабораторной оценке ключевых этапов иммунного ответа, позволяющей установить уровень патогенетического дефекта в иммунной системе.

С этой целью оценивают показатели, характеризующие различные стадии развития иммунного ответа, включая распознавание, активацию, пролиферацию, дифференцировку, эффекторные механизмы, формирование иммунной памяти, регуляцию и апоптоз.

Для оценки патогенетических механизмов иммунного процесса предложены разнообразные тесты, число которых постоянно растет.

Для оценки процессов распознавания предложены следующие тесты:

1. 
   взаимодействие лимфоцитов с макрофагами in vitro;
   
2. 
   определение экспрессии молекул МНС класса II (презентация антигена);
   
3. 
   оценка образования цитокинов (ИФН-гамма, ИЛ-4 и др.) Т-клетками при распознавании специфического антигена;
   
4. 
   выявление специфических СD4 и/или CD8 Т-лимфоцитов с использованием комплексов рекомбинантных молекул.
   

---

Для оценки активации лимфоцитов определяют:

1. 
   экспрессию лимфоцитами и другими клетками иммунной системы маркеров активации: CD25, CD69, CD71, HLA-DR и др.;
   
2. 
   внутриклеточные сигнальные молекулы лимфоцитов, в том числе внутриклеточную концентрацию ионов Са;
   
3. 
   уровень провоспалительных цитокинов (ФНО-альфа. ИЛ-1β. ИЛ-6, ИЛ-8 и др.) в сыворотке крови и других биологических жидкостях;
   

Если активация лимфоцитов блокируется до вступления в пролиферацию, то клетки подвергаются апоптозу и погибают. Такая массовая гибель активированных лимфоцитов лежит в основе

феномена «апоптоза, индуцированного активацией». Этот феномен играет большую роль в

патогенезе многих заболеваний человека, включая ВИЧинфекцию. Возникает парадоксальная ситуация: выраженная активация клеток иммунной системы приводит к развитию

иммунодефицита.

Для исследования пролиферативной активности иммунокомпетентных клеток используют тесты на определение:

1. способности Т- и В-лимфоцитов усиливать пролиферацию в ответ на различную стимуляцию (митогенами, антигенами).

Оценка эффекторных функций иммунокомпетентных клеток проводится с использованием следующих тестов:

1. 
   оценка клеточной цитотоксичности (Т-киллеры. NK-клетки и др.);
   
2. 
   образование иммуноглобулинов в культуре В-лимфоцитов in vitro;
   
3. 
   образование клетками иммунной системы цитокинов и ответ на них in vitro.
   

Цитотоксические тесты проводят, чтобы оцепить способность Т-киллеров, NKклеток, макрофагов убивать соответствующие клетки-мишени in vitro.

Определение синтеза иммуноглобулинов в культуре антитело-образующих клеток in vitro, а также в сыворотке главные методы оценки функциональной активности Влимфоцитов.

---