Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Возбудитель может быть обна­ружен в аспирате из высыпных элементов, а также в цитоплаз­ме моноцитов периферической крови методом иммунофлюо-ресценции. Положительные результаты удается получить в 50 % случаев заболевания.

Биохимические и молекулярно-биологичес­кие исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбу­дителя с помощью метода "зондов" и ПЦР. В случае обнару­жения соответствующих молекул можно поставить предвари­тельный диагноз.

Серодиагностика. Является наиболее распространенным и доступным методом лабораторной диагностики риккетсиозов. Для обнаружения антител в крови больного применяют реак­ции агглютинации, РКС и РИГА, непрямой иммунофлюоре-сценции, ИФА и др. (см. схему 17.1.1, тему 10.4).

Реакция агглютинации применяется при серодиагностике всех риккетсиозов и характеризуется высокой специфичнос­тью. В отличие от РСК РИГА не позволяет провести внутри-групповую дифференциацию риккетсиозов. Однако РИГА мо­жет быть использована для определения фазы заболевания, поскольку гемагглютинирующие антитела накапливаются в вы­соком титре в ходе инфекционного процесса, титр их быстро падает в период реконвалесценции, а через 6 мес после выздо­ровления они исчезают. Использование РСК в сочетании с РИГА позволяет дифференцировать текущее заболевание от перенесенного в прошлом (анамнестического).

Серодиагностика позволяет дифференцировать первичный (эпидемический) сыпной тиф от рецидива сыпного тифа (бо­лезни Брилля—Цинссера) на основании особенностей иммун­ного ответа. При первичной инфекции образуются антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М, тогда как при рецидиве антитела представлены преимущественно иммуно­глобулинами класса G. Метод ИФА позволяет избирательно выявлять противомикробные IgM или IgG в сыворотке боль­ных.

• Микробиологическая диагностика эрлихиозов МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. В лейкоцитах периферичес­кой крови больных при окраске по методу Романовского— Гимзы могут быть обнаружены характерные гроздьевидные включения — морулы, напоминающие ягоды ежевики.

Бактериологическое исследование. Эрлихии культивируют путем заражения клеточных культур (первичные культуры мо­ноцитов собак, перевиваемые линии мышиных макрофагов, клетки HeLa, промиелоцитарные опухолевые клетки человека и др.). В зараженных клетках появляются характерные вклю­чения, которые выявляют при окраске по методу Романовско­го— Гимзы. Для идентификации используют иммунохимичес-кие и молекулярно-биологические методы (ПЦР, метод ДНК-зондов). Метод культивирования эрлихий редко применяют с диагностической целью по причине трудоемкости.

---

Экспресс-методы диагностики. Биохимические и моле­кулярно-биологические исследования. ДНК возбуди­теля может быть обнаружена непосредственно в крови и лей­коцитах больного с помощью метода "зондов" и ПЦР.

Серодиагностика. Антитела к антигенам эрлихий в сыворот­ке крови пациентов могут быть обнаружены с помощью метода непрямой ИФ (диагностический титр 1:40) и других серологи­ческих реакций. Необходимо помнить, что антитела в диагнос­тических титрах могут длительно сохраняться после выздоров­ления, поэтому для подтверждения диагноза применяют метод парных сывороток.

• Микробиологическая диагностика бартонеллезов

(см. тему 16.1 "Микробиологическая диагностика инфек­ций, вызванных Bartonella hensella")

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, биоптаты по­раженных органов, лимфатических узлов.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое, бактериологическое исследование, экс­пресс-методы диагностики см. тему 16.1 "Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных Bartonella hensella".

Серодиагностика. Антитела к антигенам бартонелл в сыво­ротке крови пациентов могут быть обнаружены с помощью ИФА, метода непрямой ИФ и других серологических реакций. Необходимо помнить, что антитела могут присутствовать в крови практически здоровых лиц, поэтому для подтверждения диагноза применяют метод парных сывороток. Для обнаруже­ния IgM используют метод непрямой ИФ.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Тест-системы для диагностики возвратного тифа и болезни Лайма методом ДНК-зондов.

Флюоресцирующие антитела для диагностики возвратного тифа и болезни Лайма методом ИФ.

Тест-системы для серодиагностики возвратного тифа и бо­лезни Лайма методом непрямой ИФ.

Тест-системы для диагностики эрлихиозов методом ДНК-зондов.

Флюоресцирующие антитела для диагностики эрлихиозов ме­тодом ИФ.

Тест-системы для серодиагностики эрлихиозов методом ИФА.

Тест-системы для серодиагностики эрлихиозов методом не­прямой ИФ.

Антибиотики: пенициллины, тетрациклины, хлорамфеникол, фторхинолоны, макролиды и др.

---

---

Название вируса Вызываемые заболевания РНК-вирусы СЕМЕЙСТВО Orthomyxoviridae вирус гриппа типа А Грипп (эпидемии, пандемии, спорадические заболевания) вирус гриппа типа В Грипп (спорадические заболе-вирус гриппа типа С вания, эпидемии) СЕМЕЙСТВО Paramyxoviridae Вирусы парагриппа, респираторно- ОРВИ синцитиальный вирус (РСВ) Пневмония СЕМЕЙСТВО Coronaviridae коронавирусы человека ОРВИ СЕМЕЙСТВО Picomaviridae РОД Rhinovirus риновирусы человека ОРВИ (ринит) РОД Enterovirus вирусы Коксаки — серотипы А- 10, ОРВИ и др. (см. также главу 19) А-21, А-24, В-3, В-4, В-5 и др. вирусы ECHO — серотипы 4, 9, 11, ОРВИ и др. (см. также главу 19 20, 25 и др. СЕМЕЙСТВО Reoviridae реовирусы человека ОРВИ, пневмония

3. Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

а Демонстрация

Иммунофлюоресцентный метод экспресс-диагности­ки гриппа и ОРВИ.

Риноцитоскопия при гриппе и аденовирусной инфек­ции.

Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

а Задание студентам

Ознакомиться с бланками-направлениями на исследо­вание в вирусологическую лабораторию.

Указать материал для исследования, необходимый для диагностики ОРВИ.

Оценить результаты реакции гемагглютинации с материалом зараженного куриного эмбриона (амниотической и аллантоисной жидкостью), поставленной с целью индикации вируса гриппа.

Учесть результаты идентификации выделенного виру­са гриппа в РТГА. Сделать заключение.

Учесть результаты идентификации аденовирусов, вы­деленных в культуре клеток, в РСК.

Учесть результаты серодиагностики респираторных вирусных инфекций в РСК.

Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профи­лактическими препаратами. Указать механизм их дей­ствия.

а Методические указания

• Микробиологическая диагностика гриппа и других респираторных вирусных инфекций

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из респи­раторного тракта, мазки и смывы со слизистой оболочки верх­них дыхательных путей, промывные воды бронхов, мокрота.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Мазки, приготовленные из исследуемого материала, окрашивают по методу Романовско­го—Гимзы или другими методами и микроскопируют. В поло­жительном случае наблюдаются признаки ЦПД вирусов. По­скольку большинство респираторных вирусов оказывают не­специфическое ЦПД (дегенерация и лизис зараженных кле­ток), метод является малоспецифичным и имеет ориентиро­вочное значение.

Цитологическое (риноцитоскопическое) исследование при­меняют как ориентировочный экспресс-метод лабораторной диагностики гриппа. С поверхности нижней носовой раковины

берут мазки-отпечатки. Препараты окрашивают смесью основ­ного фуксина и метиленового синего. В цитоплазме цилинд­рического эпителия, а также в цитоплазме дегенерированных макрофагов и лейкоцитов располагаются широко контуриро-ванные включения, окрашенные в красный цвет. Данный ме­тод позволяет дифференцировать грипп от аденовирусной ин­фекции, при которой наблюдаются деструкция клеток, вакуо­лизация ядер и образование внутриядерных включений.

---

Вирусологическое исследование. Исследуемый материал по­мещают в транспортную среду, содержащую антимикробные препараты широкого спектра действия для уничтожения сопут­ствующей бактериальной флоры. Затем материал центрифуги­руют. Для выделения чистой культуры производят заражение культур клеток надосадочной жидкостью. В зависимости от предполагаемого возбудителя используют разные типы клеточ­ных культур: клетки человека (первичные культуры эмбрио­нальных клеток, диплоидные линии фибробластов, перевивае­мые клеточные линии Не La, НЕр-2 и др.) или животных (пер­вичные культуры клеток почки обезьян, линии мышиных фиб­робластов и др.). Культивирование респираторных вирусов мо­жет занимать от 2—3 до 20 сут и более в зависимости от природы возбудителя. Так, выделение аденовирусов занимает в среднем 6 сут, риновирусов — 4—5 сут, вируса гриппа — 3—4 сут, реовирусов — около 3 нед. Индикацию вирусов про­изводят по ЦПД. Для индикации гемагглютинирующих виру­сов (грипп, парагрипп) может быть использована реакция гем-адсорбции (см. тему 5.2), которая становится положительной еще до появления ЦПД. Идентификацию респираторных ви­русов осуществляют по их антигенной структуре с помощью иммунологических методов [иммунофлюоресценция, РТГА, РСК, реакция нейтрализации (РН), ИФА и др.]. Эти же реак­ции используют для типирования выделенных вирусов. При­меняют также биохимические (анализ фрагментов вирусных НК методом электрофореза) и молекулярно-биологические ме­тоды идентификации (ПЦР, метод нуклеиновых зондов).

Вирусологическое исследование не применяется для диа­гностики заболеваний, вызванных коронавирусами и РСВ, в связи со сложностью их культивирования.

В ряде случаев для выделения вируса гриппа используют куриные эмбрионы. Наличие вирусов гриппа в амниотической или аллантоисной жидкости устанавливают с помощью РГА (см. тему 5.2). Вирусы гриппа А хорошо агглютинируют эрит­роциты курицы, морской свинки, человека с группой крови 1(0), вирусы гриппа В — эритроциты курицы. Этот метод по­зволяет также установить титр вируса.

Идентификацию и типирование выделенной чистой культу­ры вируса гриппа осуществляют на основании антигенной структуры с помощью серологических реакций. Тип вируса (А, В или С) определяют в РСК. Подтипы вируса гриппа А по Н- и N-антигенам (HON1, H1N1, H2N2, H3N2 и др.) - в реакциях с набором типоспецифических сывороток к гемаг-глютинину и нейраминидазе (см. табл. 10.1.2 и 10.1.3). Иден­тификацию по Н-антигену проводят в РТГА, результаты реак­ции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Для опреде­ления N-антигена применяют реакцию ингибиции нейрамини-дазы и реакцию иммунопреципитации в геле. Результаты РТГА (рис. 18.1.1; на вклейке), приведенные в табл. 10.1.3, свиде­тельствуют, что гемагглютинирующая активность исследуемого вируса нейтрализуется типоспецифической сывороткой N3H2 в разведениях 1:10—1:160 (до ее титра), т.е. исследуемый вирус относится к подтипу N3H2.

---

Смотрите также файлы

• ГИПЕРТЕНЗИЯ, Эклампсия.doc

• ДИВ.doc

• ВЗРП.doc

• Внутриутробная задержка развития плода.doc

• Антенатальный 20уход_24Nov[1].doc