Файл: Курс лекций по прикладной иммунологии орел 2015 2 снимщикова ирина анатольевна, д м. н., профессор.pdf

57
Особенности иммунных взаимоотношений донора и реципиента. - иммунологическая чувствительность реципиента зависит от возраста (после 50 лет сепсис ниже, чем до 50 лет); - у мужчин риск развития септич. и лейкоцит. антигенам ниже, чем у женщин; - лица с группой крови А(II) чаще вырабатывают анти-Д-антитела, чем лица с группой О(I); - носители антигена
HLA-В8 чаще встречаются в группе лиц с высокой иммунной реактивностью; - вид патологии значительно влияет на иммунную реактивность больного.
Например, чувствительные к алло сенсибилизации больные с болезнью
Верльгофа, язвенной болезнью желудка, гемоглобинопатиями, острым миелолейкозом.
Ошибки при определении групповой принадлежности
1. Технические (неправильное соотношение сывороток и эритроцитов, неправильное расположение сывороток на планшете, несоблюдение времени проведения реакции, t окружающего воздуха выше 25 С и др.)
2. Ошибки, связанные с применением неполноценных стандартных сывороток и стандартных эритроцитов
3 3
Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемой крови
(поздняя и слабая агглютинация, связанная со слабыми аг эритроцитов; неспецифическая или смешанная агглютинация)

58
Таблица
Геномные локусы, структура и функции эритроцитарных антигенов
Хромосомный
локус
Система
Гены
Продукт
Функция
1p36.1-p34-3 1 p35-p32 1q22-q23 1 q32 1 q32 2 q14-q21 4 q28.2-q31.1 6 p21.3 7 p14 7 q22 7 q33 9 q34.2 11 p13 12 p13.2-p12.1 17 q21-q22 18 q11-q12 19 p13.3 19 p13.3 19 p13.2 19 q13.2 19 q13.3 22 q11.2
X p21.1
X p22.3
Резус (Rh)
Сциана (Sc)
Даффи (Fy)
Кромер(DAF)
Кнопс(CRI)
Гербих
MNS
Чидо Роджерс
Колтон(AQPI
Картрайт
Келл
ABO
Индиан
(CD44)
Домброк
Диего(band 3)
Кидд
Левис
Ландштейнер-
Винер
Ok
Лютеран
Hh
P
Kx
Xg
RHD,RHCcEe
SC
FY
CROM
KN
GE
MNS
CH/RG
CO
YT
KEL
ABO
IN
DO
DI
JK
LE (FUT3)
LW
OK
LU
H (FUT1)
PI
XK
XG
Полипептид
Гликопротеин
Гликопротеин-рецептор цитокинов
Полипептид
Гликопротеин
Гликофорины C и D
Гликофорины А и В
КомпонентС4а комплем
Каналообразующий полипептид
Ацетилхолинэстераза
Металлопротеиназа
Гликозилтрасфераза
Рецептор гиалуроновой кислоты
Гликопротеин
Фукозилтрансфераза*
Гликопротеин из суперсемейства иммуноглобулинов
То же
Фукозилтрансфераза*
Галактозилтрансфераза*
Гликопротеин
-«-
Неизвестна
(транспорт NH4)
Неизвестна
Неизвестна
(удаление ненужных цитокинов?)
Негативная регуляция активации комплемента
Связывание компонентов
C3b/C4b
Структурная?
-«-
Адсорбирован из плазмы
Транспорт воды
Неизвестна
Структкрная?
Прикрепление к межклеточному матриксу
Неизвестна
Транспорт анионов
Транспорт мочевины
Неизвестна
Структурная?
Транспорт нейропептидов?
Неизвестна
Примечание. Звездочкой отмечены системы полисахаридов антигенов, в которых продуктом экспрессии гена является не эритроцитарный антиген, а синтезирующий его фермент.

59
Утверждено Приказом №2 МЗ РФ от 09.01.1998.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению Цоликлонов Анти-А, Анти-В и Анти-АВ диагностических
жидких для определения групп крови человека системы АВО (антитела
моноклональные Анти-А, Анти-В, Анти-АВ)
ТУ 9398-205-27575295-94
1. Назначение
Цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.
2. Характеристика и основные свойства Цоликлонов Анти-А, Анти-В и Анти-АВ
Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изго- тавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом.
Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.
3. Техника определения групп крови человека системы АВО с помощью
Цоликлонов
Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гем- агглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С.
3.1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками
Цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
3.2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл).
3.3. Смешайте кровь с реагентом.
3.4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами,

60 содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
3.5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации
(склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются.
3.6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с
Цоликлонами представлены в таблице.
Результат реакции* с Цоликлоном:
Анти-А Анти-В Анти-АВ
Исследуемая кровь принадлежит к группе**
-
-
-
0(I)
+
-
+
А(II)
-
+
+
В(Ш)
+
+
+
AB(IV)
* Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации.
**
Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.
4. Контроль специфичности реакции агглютинации
В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведения контроля с растворителем. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости 1 каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.
5. Форма выпуска
Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 10 мл. Цоликлон
Анти-А - красного цвета, Анти-В - синего и Анти-АВ - бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.
6. Хранение Срок хранения - 2 года при температуре 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8°С в течение месяца в закрытом виде.

61
Лекция 6. ОЦЕНКА ИММУННОГО СТАТУСА
Одной из важнейших задач, непосредственно затрагивающих интересы врачей различных специальностей, является оценка иммунной системы человека. При этом оценка иммунной системы человека представляется одной из наиболее трудных проблем клинико-лабораторной службы и до настоящего времени еще во многом не оптимизирована.
Для объективной оценки состояния иммунной системы человека введено понятие – иммунный статус.
Иммунный статус - это совокупность количественных и функциональных показателей, отражающих состояние иммунной системы человека в данный момент времени.
Оценка иммунного статуса используется для:
Диагностики иммунодефицитов (первичных и вторичных)
Выявления аллергических и аутоиммунных заболеваний
Выявления онкологических заболеваний
Диагностики инфекционных заболеваний
Подбора совместимой пары донор-реципиент и мониторинга посттрансплантационных реакций
Установления причин конфликтов
“мать-плод” и нарушений репродукции
Оценки эффективности иммунотерапии
Скрининга различных групп населения или рабочих на предприятиях с целью выявления иммунопатологии
ВАРИАНТЫ ИММУННОГО СТАТУСА.
Иммунный статус здорового человека
Иммунный статус при патологии
- антигенспецифический
 аллергический
 аутоиммунный
 онкологический

62
 посттрансплантационный
 репродуктивный (статус беременной женщины)
 инфекционный
- антигеннеспецифический
 иммунодефицитный (первичный и вторичный)
 лимфопролиферативный
В конце 80-х годов по инициативе академика Р.В. Петрова была создана
«Программа иммуноэкологического обследования населения России», перед началом реализации которой были проведены крупномасштабные исследования по разработке региональных иммунологических нормативов, которые отражают особенности иммунного статуса здоровых людей определенного региона. Наиболее достоверную информацию об иммунном статусе обследуемых можно получить в результате проведения иммунологического
мониторинга - динамического слежения за состоянием иммунной системы определенного контингента населения в определенный интервал времени (1-5 лет).
Варианты иммунного статуса для практически здорового населения
1. Нормоиммунограмма (РФ)
2. Иммунный статус с супрессией Т-клеточного иммунитета (жители крайнего Севера, Краснодарского края)
3. Иммунный статус с супрессией В-клеток (Новокузнецк, Семипалатинск)
4. Супрессивный тип иммунного статуса со значениями всех параметров ниже средних норм (Семипалатинская область)
5. Иммунный статус с супрессией гуморального звена иммунитета (гг.
Москва, Санкт-Петербург)
6. Равномерно активированный тип иммунного статуса с некоторой активацией клеточного и гуморального звена (г. Одесса)
7. Активированный профиль гуморального звена иммунного статуса при нормальных или несколько сниженных показателях клеточного иммунитета (Н. Новгород)

63 8. Смешанный тип иммунного статуса с супрессией клеточного и активацией некоторых показателей гуморального звена иммунитета (г.
Армавир)
ЭТАПЫ ОЦЕНКИ ИММУННОГО СТАТУСА
 Анализ анамнеза
 Клиническое обследование
 Лабораторное иммунологическое обследование иммунограмма)
Анализ анамнеза:

Выяснение наследственной предрасположенности к иммунопатологии
(хронические, генерализованные инфекции; аутоиммунные и аллергические заболевания; повышенная частота злокачественных новообразований, соматические пороки развития).

Перенесенные инфекции, гнойно-воспалительные процессы (частота, преимущественная локализация).

Неблагоприятные факторы внешней среды, работы и проживания
(постоянный контакт с химическими веществами, лекарствами, биопрепаратами; воздействие радиации, магнитного поля, высоких или низких температур, постоянных стрессовых ситуаций).

Перенесенные интоксикации, хирургические вмешательства, травмы, нарушения питания.

Длительная терапия: цитостатиками, лучевая и гормональная, антибиотиками.

Принадлежность к группам риска (наркомания, половые перверсии, хронический алкоголизм, курение).

Эпизоды аллергических реакций (сезонность, возраст, аллергизирующий фактор).

Реакция на переливание крови и ее продуктов.

Патология беременности (бесплодие, выкидыши).

64
Клиническое обследование:

Физикальное обследование органов и тканей иммунной системы: лимфатических узлов, селезенки, миндалин (лимфоаденопатия, спленомегалия, локальная или генирализованная гипер- или аплазия лимфоузлов, миндалин).

Хронизация соматического заболевания, лихорадка неясной этиологии, необъяснимая потеря веса, длительная диарея.

Кожные покровы (тургор, гнойничковые высыпания, экзема, дерматит, новообразования).

Слизистые оболочки и пазухи (кандидоз, изъязвления, сухость, воспаление, гингивит, гайморит).

Бронхолегочная система (воспалительные, обструктивные процессы, бронхоэктазы, фиброз).

Пищеварительная и выделительная системы (воспалительные процессы, дискинезия, гепатомегалия, патология желчевыводящих, мочеполовых путей).

Нейроэндокринная система (воспалительные процессы центральной и периферической нервной систем, эндокринопатии, пороки развития).

Опорно-двигательный аппарат (воспалительные процессы суставов и костей, деструкции, нарушение двигательной функции).

Сердечно-сосудистая система
(кровоточивость, воспалительные процессы, атеросклероз, тромбоз).

Злокачественные новообразования.

Типические клинические проявления известных иммунопатологических синдромов.
В настоящее время известно большое количество методов оценки отдельных звньев иммунной системы, что позволяет врачу выбрать наиболее адекватные из них для конкретных диагностических и прогностических целей.
В этом отношении наиболее оптимальной является двухэтапная система оценки.

65
ТЕСТЫ ОЦЕНКИ ИММУННОГО СТАТУСА
I уровень (ориентировочные):
Определение относительного и абсолютного числа лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови
Определение числа Т-лимфоцитов СD3)
Определение числа В-лимфоцитов CD19)
Определение концентрации сывороточных IgM, IgА, IgG (реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини)
Определение фагоцитарной активности лейкоцитов.
II уровень (аналитические):
Определение субпопуляций регуляторных Т-лимфоцитов: CD4+, CD8+.
(ИФА, РИФ, проточная цитофлюорометрия)
Оценка пролиферативной активности Т- и В- лимфоцитов на митогены, аг, аллогенные клетки (РБТЛ, СКЛ)
Оценка активности киллерных лимфоцитов (NK-лимфоциты -CD16)
Оценка этапов фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитов
Выявление ЦИК;
Определение компонентов комплемента
Проведение аллергологического обследования: кожные пробы, определение уровня общего и специфического IgE (ИФА)
Выявление аутоат, ат к опухолевым аг
Определение медиаторов иммунной системы, в т.ч. Цитокинов
Анализ генов, ответственных за экспрессию иммунологически значимых молекул
ПРАВИЛА ИНТЕРПРИТАЦИИ ИММУНОГРАММЫ
оценка показателей в комплексе оценка показателей в динамике с учетом проводимой терапии с учетом клиники

66
КЛАССИФИКАЦИЯ БОЛЕЗНЕЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ
1.
Болезни, вызванные недостаточностью иммунной системы
– иммунодефициты: первичные, вторичные, транзиторные.
2.
Болезни, обусловленные избыточным реагированием иммунной системы: аутоиммунные, аллергические.
3.
Инфекции иммунной системы с непосредственной локализацией вируса в лимфоцитах: ВИЧ-инфекция, инфекционный мононуклеоз.
4.
Опухоли иммунной системы: лимфогранулематоз, лимфомы, острые и хронические лейкозы, лимфосаркома.
5.
Болезни иммунных комплексов.
Лекция 7. ИММУНОДЕФИЦИТНЫЕ СОСТОЯНИЯ.
ПЕРВИЧНЫЕ ИММУНОДЕФИЦИТЫ.
Наука о первичных иммунодефицитах (ПИД) – один из быстро развивающихся разделов иммунологии. В настоящее время описано более 80 различных форм ПИД, для 20 из них идентифицированы генные дефекты
(делеции генов, кодирующих синтез тяжелых цепей иммуноглобулинов, рецепторы Т-лимфоцитов, мутации генов, кодирующих синтез ИЛ, ферментов и компонентов комплемента, мутации, ведущие к потере МНС-антигенов и др., например, тяжелый комбинированный иммунодефицит, связанный с Х- хромосомой обусловлен дефектом гена, кодирующего рецептор к ИЛ-2), описаны новые механизмы развития ПИД. Фактором, ограничивающим изучение ПИД, является относительная их редкость в популяции (от 1:1000 до
4:1000000), а также дороговизна современных научных исследований. В настоящее время создано Европейское общество по ПИД, которое регистрирует все сведения о больных с ПИД.
Первичные иммунодефициты – это состояния, при которых нарушения иммунных механизмов связаны с генетическими дефектами (порок развития иммунной системы).

67
В зависимости от уровня поражения и локализации дефекта различают следующие виды первичных иммунодефицитов:
Преимущественно гуморальные;
Преимущественно клеточные;
Комбинированные;
Наследственно обусловленные дефекты антигеннеспецифических факторов защиты (фагоцитоз, система комплемента и т.д.)
Нарушения в системе ИЛ и кооперации клеток в иммунном ответе.
Существуют и другие классификации, в основу которых положен генетический блок развития иммунной системы.