ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 30.10.2019
Просмотров: 1830
Скачиваний: 1
36
(элонгация). В результате каждого цикла происходит двукратное
увеличение определяемой нуклеиновой кислоты либо ее фрагмента
(ампликона). Определение продуктов амплификации осуществляется при
помощи гельэлектрофореза или ИФА.
98.
Экспресс-метод определения маркеров вирусных гепатитов
основан
на
их
взаимодействии
с
иммобилизованными
на
нитроцеллюлозной мембране специфическими белками, представленными
антигенами и антителами с образованием видимого (окрашенного)
иммунного комплекса.
99.
Метод иммуноблотинга состоит из определения спектра антител
путем их связывания с иммобилизированными на нитроцеллюлозной
мембране специфическими антигенами. Выявление иммунного комплекса
антиген-антитело осуществляется при помощи меченных ферментом
антивидовых антител к иммуноглобулинам человека.
100.
Применение диагностических препаратов для проведения всех
видов лабораторных исследований по определению маркеров вирусных
гепатитов, оценка и интерпретация результатов осуществляются в
соответствии с инструкциями по применению.
101.
Объем
лабораторных
исследований
по
выявлению
специфических
маркеров
вирусных
гепатитов
методом
ИФА
предусматривает проведение 30 тысяч исследований в год на одну
врачебную бригаду (врач-лаборант, 2 фельдшера-лаборанта, санитарка).
102.
Забор биологического материала и его доставку для
исследования методами специфической лабораторной диагностики
вирусных гепатитов осуществляют медицинские работники организаций
здравоохранения.
103.
Забор фекалий от инфицированных ВГА производится в
период последней недели инкубации или в первую неделю клинических
проявлений
заболевания
с
соблюдением
правил
асептики.
Кратковременное хранение фекалий (до 24 часов) осуществляется при
температуре от плюс 2ºС до плюс 8ºС, более длительное хранение
допускается при температуре не ниже минус 20ºС. Обработка фекалий
проводится согласно инструкции по применению соответствующего
диагностического препарата.
104.
Забор венозной крови для серологических исследований
проводится натощак с соблюдением правил асептики и антисептики в
вакутайнеры или сухие центрифужные пробирки (для более эффективной
ретракции сгустка крови используются пробирки с гранулами и
активатором свертывания крови). В течение 24 часов с момента взятия
образца крови он должен быть подвержен обработке с целью получения
надосадочного слоя сыворотки крови, используемого для проведения
37
дальнейших лабораторных исследований. Кратковременное хранение
сыворотки крови (до 3-х суток) допускается при температуре от плюс 2ºС
до плюс 8ºС, более длительное хранение (до года) осуществляется при
температуре не выше минус 20ºС.
105.
Забор крови для исследований методом ПЦР осуществляется
путем взятия венозной крови с соблюдением правил асептики и
антисептики в сухие центрифужные пробирки или в пробирки с
антикоагулянтом
(калиевая
или
натриевая
соль
этилен-диамин
тетрауксусной кислоты).
Не допускается использование в качестве антикоагулянта гепарина
ввиду его ингибирующего воздействия на амплификацию генов.
Обработка исследуемого образца крови проводится в течение 24
часов с момента его взятия согласно инструкции по применению
соответствующей диагностической тест-системы.
Полученная в результате обработки сыворотка или плазма может
храниться:
до 3-х суток при температуре от плюс 2ºС до плюс 8ºС;
до 3-х месяцев при температуре минус 20ºС;
до одного года при температуре минус 80ºС.
Не допускается повторное размораживание и замораживание
исследуемых образцов крови, поскольку это способствует появлению
ложноотрицательных результатов.
106.
Специфическая лабораторная диагностика ВГА направлена на
выявление вирусиндуцированных маркеров инфекции, что является
необходимым условием для постановки окончательного диагноза.
107.
Лабораторными маркерами ВГА являются антиген вируса
гепатита А (далее – HAV Ag), анти-HAV IgМ и анти-HAV IgG, суммарные
(тотальные) антитела без разделения на классы (далее – анти-HAV). В
структуре анти-HAV преобладают анти-HAV IgG.
108.
Основным лабораторным диагностическим маркером ВГА
являются антитела класса IgM, обнаружение которых свидетельствует о
наличии текущей или недавней инфекции. Выявление анти-HAV IgM
осуществляется при помощи ИФА либо ИЛА. Первично положительный
результат подтверждается повторным проведением исследования или
использованием подтверждающего теста (далее – конфирматорный тест).
109.
Определение при помощи ИФА и ИЛА суммарных антител к
HAV или специфических антител класса G свидетельствует о
перенесенной
ранее
инфекции
и
применяется
в
основном
в
эпидемиологических
исследованиях.
Количественное
выявление
анти-HAV либо анти-HAV IgG применяется с целью оценки
напряженности иммунитета. Первично-положительные по анти-HAV либо
38
анти-HAV IgG результаты подтверждаются проведением повторного
исследования.
110.
Культурально-клеточный анализ РНК, ПЦР и ИФА HAV Ag в
крови имеют ограниченное применение в связи с кратким периодом
вирусемии. Ранним диагностическим признаком заболевания гепатитом А
является обнаружение РНК вируса гепатита А и HАV Ag в фекалиях в
период инкубации. Первичное обнаружение HАV Ag должно в
обязательном порядке подтверждаться постановкой конфирматорного
теста на основе принципа нейтрализации антигена специфическими
антителами.
111.
Диагноз «Вирусный гепатит А» устанавливается на основании
клинических,
лабораторных
и
эпидемиологических
данных.
Окончательная верификация проводится на основании выявления антител
класса IgM.
112.
Основными диагностическими маркерами ВГЕ являются
антиген вируса гепатита Е (далее – HЕV Ag) и РНК вируса гепатита Е,
выявляемые в фекалиях в продромальный период и в острой стадии
заболевания, а также специфические антитела класса М (далее – анти-
HЕV IgM), выявляемые в сыворотке крови в остром периоде заболевания
и в стадии реконвалесценции. Специфические антитела класса G (далее –
анти-HЕV IgG) и состоящие в основном из них суммарные антитела
(далее – анти-HЕV) свидетельствуют о перенесенном ранее ВГЕ.
Для выявления антител применяется метод ИФА. Первично-
положительные результаты подтверждаются проведением повторного
исследования.
Выявление РНК вируса гепатита Е проводится методом ПЦР.
113.
Диагноз «Вирусный гепатит Е» устанавливается на основании
клинических,
лабораторных
и
эпидемиологических
данных.
Окончательная верификация проводится на основании выявления
анти-HЕV IgM.
114.
Основным диагностическим маркером ВГВ является HBsAg.
Определение HBsAg осуществляется методами ИФА, ФИА, МФА, а также
мембранным экспресс-методом. Антитела к HBsAg (далее – анти-HBs)
являются маркером, свидетельствующим о ранее перенесенной инфекции
либо наличии поствакцинального иммунитета.
115.
В случаях первичного обнаружения HBsAg методами ИЛА или
ФИА необходимо проведение конфирматорного теста.
116.
Для выявления HBeAg используются методы ИФА и ФИА, а
также мембранный экспресс-метод. Первично-положительные по HBeAg
результаты исследования подтверждаются конфирматорным тестом либо
проведением повторного исследования. HBeAg представляет собой
39
диагностический маркер, ассоциированный с высокой инфекционностью
крови, активной репродукцией вирусных частиц и риском перинатальной
передачи возбудителя.
Выявление антител к HBeAg (далее – анти-НВе) свидетельствует о
завершении активной репродукции вирусных частиц и начале стадии
реконвалесценции (за исключением мутантных форм вируса).
117.
Для выявления HBcAg применяется преимущественно МФА.
Наличие HBcAg в гепатоцитах свидетельствует об активной репродукции
вирусных частиц.
118.
Антитела к НВсAg класса М (далее – анти-НВс IgM)
появляются через 1-2 недели после появления HBsAg и циркулируют в
крови от 2 до 18 месяцев у пациентов с острым вирусным гепатитом В и у
пациентов с хроническим вирусным гепатитом В – при реактивации
инфекции.
119.
Суммарные антитела к НВсAg (далее – анти-НВс) и
составляющие их антитела класса G (далее – анти-НВс IgG) появляются
после анти-НВс IgM и длительно (часто пожизненно) определяются у
переболевших острым вирусным гепатитом В, пациентов с хронической
формой заболевания.
120.
Специфические антитела к антигенам вируса гепатита В
обнаруживаются в крови методами ИФА и ИЛА, а также мембранным
экспресс
методом
с
последующим
подтверждением
первично-
положительного результата проведением повторного исследования.
121.
Качественное определение ДНК вируса гепатита В методом
ПЦР указывает на наличие и репродукцию в организме возбудителя.
Количественное обнаружение ДНК вируса гепатита В методом ПЦР
(определение вирусной нагрузки) позволяет оценить активность
репликации вируса и эффективность противовирусной терапии. Метод
ПЦР используется также для определения генотипов вируса гепатита В с
целью выбора оптимальной схемы лечения заболевания.
122.
Диагноз ОГВ устанавливается на основании клинических,
лабораторных
и
эпидемиологических
данных.
Окончательная
верификация проводится на основании выявления HBsAg, HBeAg, анти-
HBc IgM.
123.
Диагноз ХГВ устанавливается на основании клинических,
морфологических,
лабораторных
и
эпидемиологических
данных.
Окончательная верификация проводится на основании выявления в
течение не менее 6 месяцев HВsAg или HBeAg, анти-HВс IgG, ДНК
вируса гепатита В.
124.
Специфическая лабораторная диагностика маркеров ВГD,
проводится у лиц, имеющих маркеры вируса гепатита В.
40
125.
Антиген вируса гепатита D обнаруживается в сыворотке крови
методом ИФА через 1-2 недели после клинических проявлений
заболевания.
126.
Первично-положительный
результат
подтверждается
конфирматорным тестом либо проведением повторного исследования. В
ткани печени антиген вируса гепатита D (далее – HDAg) выявляется
преимущественно МФА на протяжении острого или хронического
периода заболевания. Выявление методом ПЦР РНК вируса гепатита D
свидетельствует о наличии вируса в организме и его репликации в клетках
печени.
127.
Специфические антитела к HDAg обнаруживаются в крови
методом
ИФА
с
последующим
подтверждением
первично-
положительного результата проведением повторного исследования.
128.
Антитела класса IgM к антигену вируса гепатита D (далее –
анти-HDV IgM) выявляются при остром гепатите D в течение 3-х месяцев
c момента появления симптомов заболевания и свидетельствуют об
активной репродукции вируса в гепатоцитах. Анти-HDV IgM выявляются
и у пациентов при обострении заболевания.
129.
Суммарные антитела к вирусу гепатита D (далее – анти-HDV)
представлены в основном антителами класса G (анти – HDV IgG) и
свидетельствуют о текущей или имевшей место в прошлом инфекции.
130.
Окончательная верификация гепатита D проводится на
основании выявления анти-HDV IgM, анти- HDV IgG, РНК вируса
гепатита D.
131.
Для диагностики ВГС используется определение суммарных
специфических антител (далее – анти-HCV) и антител класса IgG (далее –
анти-HCV IgG) методами ИФА, ФИА и мембранным экспресс-методом.
Выявление анти-HCV и анти-HCV IgG свидетельствует об имеющейся в
настоящее время или перенесенной в прошлом инфекции. Первично-
положительное обнаружение анти-HCV и анти-HCV IgG в обязательном
порядке подтверждается повторной постановкой пробы в двух лунках или
конфирматорными тестами, основанными на принципах реакции
нейтрализации либо раздельного определения специфических антител к
различным антигенам вируса гепатита С.
132.
Выявление антител класса М (далее – анти-HCV IgM) методом
ИФА свидетельствует об активной репродукции вирусных частиц.
Первично-положительный
результат
выявления
анти-HCV
IgM
подтверждается проведением повторного исследования. В случае
выздоровления анти-HCV IgM исчезают в течение 2 месяцев.
133.
Диагностическое значение имеет определение капсидного
антигена вируса гепатита С (далее – core-HCV). Его обнаружение в