Файл: prakt_lf_mdd_fiu.pdf

51 

52 

Дата: ________________

ЗАНЯТИЕ № 18

РАБОТА  № 1.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ 

ВИТАМИНА С

 
ОБОСНОВАНИЕ  ВЫПОЛНЕНИЯ  РАБОТЫ.  Витамин  С  участ-

вует  в  окислительно-восстановительных  процессах;  в  синтезе  стеро-
идных  гормонов  и  катехоламинов  в  надпочечниках;  как  кофактор 
ферментов гидроксилаз (катализирующих превращение пролина в ок-
сипролин); ускоряет всасывание железа, активирует пепсиноген. Не-
достаток  витамина  С  в  организме  приводит  к  нарушению  этих  про-
цессов. 

 
ПРИНЦИП  МЕТОДА.  Метод  основан  на  восстановлении  вита-

мином  С  2,6-дихлорфенолиндофенола  (2,6-ДХФИФ),  который  в  ки-
слой  среде  имеет  красную  окраску,  в  щелочной  среде  синюю,  а  при 
восстановлении  обесцвечивается.  Исследуемый  раствор  титруют  в 
кислой среде щелочным раствором 2,6-ДХФИФ до розовой окраски. 

53 

ХОД РАБОТЫ: взять колбочку. 
 

ОТМЕРИТЬ 

О П Ы Т 

М о ч а 

10,0 мл 

Н

2

О дист. 

10,0 мл 

HCl 10 % 

20 капель 

2,6 ДХФИФ 0,001 н 

Титровать до розовой окраски 

 
РЕЗУЛЬТАТ:  
 
 
 
 

КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ     рассчитывают по формуле: 
                                                                       0,088 А 1500             
                                                          Х  =  ------------------- =  мг/сутки 
                                                                                 10 

0,088 -  содержание аскорбиновой кислоты, мг 
А - результат титрования 
1500

- среднее суточное количество мочи, мл 

10 - объем мочи, взятый для титрования, мл 

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 

Нормальное содержание витамина С в крови составляет 34-114 

мкмоль/л. Норма  экскреции витамина с мочой  = 20-30 мг/сут. 

Содержание витамина С в моче дает сведения о запасах витамина 

в  организме,  о  соответствии  между  его  содержанием  в  крови  и  экс-
крецией  из  организма.  При  приеме  100  мг  витамина  С  в  случае  его 
дефицита в организме его концентрация в моче не повышается. Уро-
вень  аскорбата  в  моче  снижается  при  острых  и  хронических  инфек-
ционных  заболеваниях,  анемии,  стеаторее,  нарушении  всасывания, 
алкоголизме. 

ВЫВОД: 
 
 

54 

Дата: ________________

ЗАНЯТИЕ № 19

РАБОТА № 1.  КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ 

ГЛЮКОЗЫ В КРОВИ. ЭНЗИМАТИЧЕСКИЙ 

(ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫЙ) МЕТОД  

ОБОСНОВАНИЕ  ВЫПОЛНЕНИЯ  РАБОТЫ.  Определение  глю-

козы  в  цельной  крови  или  плазме  производится  у  каждого  пациента 
для оценки состояния метаболизма углеводов и диагностики патоло-
гии  (гипергликемий,  гипогликемий).  Для  определения  содержания 
глюкозы в крови используется энзиматический метод, основанный на 
окислении глюкозы глюкозооксидазой до глюконовой кислоты в при-
сутствии  кислорода  воздуха.  Метод  является  высокоспецифическим 
для  определения  D-глюкозы  в  присутствии  других  востанавливаю-
щих  веществ,  содержащихся  в  экстрактах  тканей  и  биологических 
жидкостях. 

ПРИНЦИП МЕТОДА. Глюкозооксидаза – сложный фермент, со-

держащий  в  качестве  простетической  группы  молекулу  ФАД.  При 
окислении  глюкозы  глюкозооксидазой  происходит  отщепление  двух 
атомов водорода у первого атома  углерода в молекуле глюкозы. Да-
лее эти два атома водорода передаются на ФАД, что приводит к его 
восстановлению с образованием ФАДН

2

. Последний передает атомы 

водорода  на  молекулярный  кислород  с  образованием  Н

2

О

2

.

Далее 

Н

2

О

2 

расщепляется  ферментом  пероксидазой  на  воду  и  атомарный 

кислород,  который  окисляет  хромоген  (краситель),  приобретающий 
при окислении окраску. 

ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА: 
 
 
 

ПЕРОКСИДАЗА 

55 

ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт, стандарт и контроль. 
 
 

ПРОБА 

отмерить 

ОПЫТ  

СТАНДАРТ 

КОНТРОЛЬ 

Сыворотка крови 
Стандартный рас-
твор глюкозы  
(5,55 ммоль/л) 
Н

2

О 

Рабочий реактив 
 
 
 
 
 
 
 

0,02 мл 

- 

- 

2,0 мл 

- 

0,02 мл 

- 

2,0 мл 

- 

- 

0,02 мл 

2,0 мл 

Перемешать, инкубация в термостате 20 
минут при 37º С. 
ФЭК,   = 500 нм, колориметрия  опыта и 
стандарта против контрольной пробы, 
кювета - 5 мм. 

 
РЕЗУЛЬТАТ: Е ст =           ;  Е оп =            ;  Сст = 5,55 ммоль/л 
 
Конечный результат получают по формуле: 
 
                    
   
 
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 
Нормальное содержание глюкозы в крови у взрослых составляет 

3,3 – 6,4 ммоль/л.  

Содержание  глюкозы  в  крови  увеличивается  (

гипергликемия

) 

при  некоторых  физиологических  состояниях  (стресс,  прием  углево-
дов с пищей), а также при патологиях: сахарный диабет, острый пан-
креатит,  инфаркт  миокарда,  стенокардия,  гиперфункции  ряда  эндок-
ринных  желез  (тиреотоксикоз,  глюкагонома,  синдром  Иценко-
Кушинга, феохромоцитома).  

Содержание глюкозы в крови уменьшается (

гипогликемия

) при 

некоторых  физиологических  состояниях  (голодание,  недостаток 
приема с пищей углеводов, тяжелая изнурительная физическая рабо-

Cст

Еcт

Еоп

· 

Соп =

        =             ммоль/л.