Файл: prakt_lf_mdd_fiu.pdf

61 

Дата _________________

ЗАНЯТИЕ № 22 

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА 

ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ УГЛЕВОДОВ» 

Задания для самостоятельной работы: 

1.

Составить метаболическую карту углеводного обмена. 

2.

На карте отметить: 

2.1.

Диагностически значимые субстраты (глюкоза, пируват, 
лактат, гликоген печени и мышц, галактоза, фруктоза). 

2.2.

Ферменты, исследуемые с целью диагностики (глюкозо-6-
фосфатаза, фруктозо-1,6-дифосфатальдолаза, ЛДГ, глико-
генфосфорилаза, гл-6-ф-дегидрогеназа). 

2.3.

Регуляторные ферменты гликолиза, метаболизма гликогена, 
глюконеогенеза, пентозофосфатного пути. 

2.4.

Витаминзависимые ферменты. 

3. Решение и обсуждение ситуационных задач. 

62 

Дата: _________________

ЗАНЯТИЕ № 24

РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИГЛИЦЕРИДОВ  

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ 

 
ПРИНЦИП МЕТОДА. Освободившийся в процессе расщепления 

триглицеридов глицерол превращается в глицерол-3-фосфат под дей-
ствием  глицеролкиназы.  Глицерол-3-фосфат  окисляется  глицерофос-
фатоксидазой  до  диоксиацетонфосфата  с  образованием  Н

2

О

2

.  Далее 

Н

2

О

2

 расщепляется пероксидазой на воду и атомарный кислород, ко-

торый  и  окисляет  хинониминовый  краситель.  Оптическая  плотность 
образующегося окрашенного соединения определяется фотометриче-
ски. 

 
ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки – опыт, стандарт и контроль 

Реагенты 

Опыт 

Стандарт 

Контроль 

Сыворотка крови 

Стандарт (2,5 ммоль/л) 

Н

2

О 

Рабочий реагент 

(буфер, смесь фермен-

тов 

и краситель) 

0,02 мл 

- 

- 

2,0 мл 

- 

0,02 мл 

- 

2,0 мл 

- 

- 

0,02 мл 

2,0 мл 

Перемешать, инкубация в термостате 10 минут при 37º С. 
ФЭК,   = 490-500 нм, колориметрия  опыта и стандарта против 
контрольной пробы, кювета - 5 мм. 

РЕЗУЛЬТАТ: Е ст =           ;  Е оп =            ;  Сст = 2,5 ммоль/л 
 
Конечный результат рассчитывают по формуле: 
 
                    
   
 

Cст

Еcт

Еоп

· 

Соп =

        =             ммоль/л.

63 

От рассчитанной концентрации ТГ вычесть 0,11 ммоль/л (это концен-
трация свободного глицерина в сыворотке). 

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 

Нормальное содержание триглицеридов в сыворотке крови 0,40 – 

1,54 ммоль/л у женщин и 0,45 – 1,82 ммоль/л у мужчин. 

Гипертриглицеридемия 

может быть обусловлена:  

-  приемом жирной пищи, 
-  ожирением, голоданием, кровопотерями, тяжелой анемией, са-

харным  диабетом,  панкреатитом,  вирусным  гепатитом,  алкогольным 
циррозом печени, острой перемежающейся порфирией, гликогенозом 
I, III, IV типов.  

Гипотриглицеридемия 

отмечается  при  абеталипопротеинемиях 

и  гипобеталипопротеинемиях,  что  чаще  всего  связано  с  угнетением 
синтеза печени апопротеина В. 

 
ВЫВОД:  
 
 
 

64 

Дата: __________

ЗАНЯТИЕ № 25

РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРИНА В 

СЫВОРОТКЕ КРОВИ 

(энзиматический метод) 

 
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. В организм челове-

ка  холестерин  поступает  с  пищевыми  продуктами  (0,3  -  0,5  г)  и  по-
стоянно  синтезируется  в  печени,  почках,  надпочечниках,  слизистой 
оболочке тонкого кишечника, стенке артерий, коже. Содержание хо-
лестерина в крови увеличивается при нарушении липидного обмена. 

ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА:  
 
  
 
 
                                                                      
                                                  

Интенсивность окраски красителя прямо пропорциональна кон-

центрации холестерина в пробе.   

 
ХОД РАБОТЫ:  взять три пробирки. 
  
                     Проба                      
 
Отмерить 

Опыт 

Стандарт 

Контроль 

Сыворотка крови 

0,02 мл 

- 

- 

Стандарт 

- 

0.02 мл 

- 

Дист. вода 

- 

- 

0,02 мл 

Рабочий реактив 

2,0 мл 

2,0 мл 

2,0 мл 

холестеролэстераза 

холестеролоксидаза 

Продукт окисления 
      холестерина 

Хинониминовый  

краситель  

(восстановленный) 

бесцветный 

 пероксидаза

Хинониминовый 

краситель 

(окисленный) 

окрашенный 

Холестерин + О

2

+ Н

2

О

2

. 

 Жирные  
кислоты.

     Эфиры 
холестерина  
 

Холестерин +  

 Н

2

О

2

 +

+ 2Н

2

О. 

+ Н

2

О 

65 

Пробы перемешать и инкубировать 15 минут при температуре 20 

– 25

0

С или 10 минут при 37

0

С. 

Фотометрия против контроля при   = 490-520 нм, кювета 5 мм. 
 
РЕЗУЛЬТАТ:    Е

о

 = 

                           Е

ст 

= 

                           С

ст

 = 5,17 ммоль/л   

   
 
РАСЧЁТ:                   
   
 

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 

Содержание общего холестерина в крови у взрослых  составляет 

3,6 – 5,2 ммоль/л.  

Повышение  концентрации  холестерина  в  крови  (

гиперхолесте-

ринемия

)  наблюдается  при  атеросклерозе,  сахарном  диабете,  меха-

нической  желтухе,  нефрозе,  гипотиреозе,  гиперлипопротеинемии  II-
IV типа. Понижение холестерина в крови (

гипохолестеринемия

) на-

блюдается  при  гипертиреозе,  голодании,  анемии,  туберкулезе,  рако-
вой  кахексии,  лихорадочных  состояниях,  паренхиматозной  желтухе, 
циррозе печени. 

  
 
ВЫВОД:  
 

Ест

Еоп 

Соп =

· 

5,17 

=          ммоль/л.