ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.11.2019
Просмотров: 3829
Скачиваний: 1
определяются единичные микобактерии в каждом поле зрения или единичные в
препарате);
(3+) – более 100 КОЕ – «обильное» бактериовыделение (бактериоскопически
определяктся 10 и более микобактерий в каждом поле зрения).
Положительный ответ дают только после микроскопии мазка из выросших
колоний, окрашенных по Цилю-Нильсену. В мазках обнаруживаются интенсивно
окрашенные красные палочки, лежащие одиночно или скоплениями, переплетаясь
в виле «кос» (благодаря наличию корд-фактора), в длительно растущих культурах
видны
темные
зерна.
Заключение об отрицательном результате при выделении туберкулезной палочки
из питательного материала можно сделать лишь после трехмесячного
культивирования.
Культивирование на жидких питательных средах Исследуемым материалом в
данном случае являются: мокрота, БАС, промывные воды и ликвор без
геморрагических
и
гнойных
примесей.
При культивировании на жидких питательных средах положительный результат
может быть получен через 7–14 дней, отрицательный выдается через 42 дня.
Чувствительность к туберкулостатическим препаратам определяется обязательно
как
на
твердых,
так
и
на
жидких
питательных
средах.
Окончательная идентификация микобактериозов возможна только с твердых
питательных сред
74. Генетические методы диагностики туберкулеза Развитие и совершенствование
молекулярно-диагности- ческих методов создает новые возможности для
быстрого выявления микобактерий в клинических образцах. Наибольшее
распространение получил метод полимеразной цепной реакции, позволяющий
проводить идентификацию МБТ в диагностическом материале за 5–6 часов
(включая обработку материала), обладает высокой специфичностью и
чувствительностью (в диапазоне от 1–10 клеток в образце), используется также
для идентификации бактерий, выращенных на среде. Исключительное значение
метод ПЦР имеет в подтверждении туберкулезной этиологии при плевритах,
менингитах, туберкулезе мочеполовой системы, туберкулезе лимфоузлов,
поскольку результативность бактериологической диагностики в выше указанных
случаях низкая.
75. Микробиологическая диагностика актиномикоза Актиномикозы – это
хронические гнойные гранулематозные поражения различных органов, которые
вызываются:
− порядок Actinomycetales, семейство Actinomycetaceae, род Actinomyces
−
A.israelii
в
большинстве
случаев
− реже A. naeslundii, A. odontolyticus, A. bovis, A. viscosus. Материалом для
исследования являются гной из свищей, мокрота, моча, спинномозговая жидкость,
пунктат из размягчающихся инфильтратов, биопсированные ткани. Гной и
мокрота могут быть различной консистенции, иногда обладают гнилостным
запахом.Микроскопический
метод
Обнаруживают друзы A. israelii в экссудате или гнойном отделяемом из очагов
поражения, которые могут достигать значительных размеров, образуя гранулы
размером в среднем 0,3–2 мм. Друзы актиномицетов имеют плотную, каменистую
консистенцию и скрипят, как песок, при надавливании на покровное стекло. Они
отбираются из биологического материала в чашках Петри препаровальными
иглами или бактериологической петлей под лупой или при малом увеличении
микроскопа. Подобные комочки переносят на предметное стекло в каплю 10–20%
раствора КОН или NaOH, слегка подогревают или без подогревания помещают в
каплю спирта и глицерина, покрывают покровным стеклом и микроскопируют
(метод «раздавленной» капли). При малом увеличении микроскопа друза
представляет собой лучистое образование с плотным гомогенным центром,
окруженное множественными разрастаниями. Под большим увеличением
микроскопа видны скопления густо переплетенных гиф. От них, наподобие лучей,
отходят
гифы
с
утолщениями
на
концах.
Друзы актиномицетов исследуют и в окрашенных препаратах. При окраске по
Романовскому-Гимзе они видны как агрегаты мицелия, имеющие вид округлых
или овальных базофильных масс с эозинофильными включениями на
поверхности. В препаратах, окрашенных по Граму, нити актиномицетов
представляются, как правило, грамположительными фиолетовыми, реже
розоватыми. По Цилю-Нильсену нити актиномицетов окрашиваются в синий
цвет. Крупные друзы окрашиваются с трудом и часто смываются при повторном
промывании препарата, поэтому находки друз в мазках, окрашенных по Граму или
Цилю-Нильсену,
непостоянны.
Культуральный
метод
Выделение чистых культур актиномицетов проводят на кровяном и сывороточном
агаре, среде Сабуро или Чапека. Посевы актиномицетов инкубируют в аэробных
и анаэробных условиях в течение 1–2 недель. На плотных питательных средах
колонии небольшие, часто расположены в толще агара. Могут быть гладкими или
шероховатыми, с поверхности питательных сред снимаются с трудом. На
кровяном агаре с 1% глюкозой в анаэробных условиях дают слабый гемолиз. В
жидких питательных средах актиномицеты растут в виде зернышек, пушинок или
морщинистых пленок. Метод завершается идентификацией возбудителя и
определением
антибиотикограммы.
Для
получения
культур
актиномицетов
необходимо:
1)
асептическое
взятие
материала;
2)
центрифугирование;
3)
промывание
осадка
стерильным
физиологическим
раствором;
4) выращивание как в аэробных, так и в анаэробных условиях.
Засев и выращивание на разных уровнях высокого (15 см) столбика агаровых сред,
особенно сахарных, позволяет высевать актиномицеты разной степени аэробиоза.
Иммунологические
исследования
При этом проводится кожная проба с актинолизатом и оценка ответа
иммунокомпетентных клеток на актинолизат in vitro.
76. Микробиологическая диагностика нокардиоза Наиболее частым возбудителем
нокардиоза
является
Nocardia
asteroides.
Нокардии
весьма
широко
распространены в природе. Местом их обитания является почва. Клиническое
сходство болезни с туберкулезом, актиномикозом и септико- пиемическими
заболеваниями нуждается в лабораторных обоснованиях природы болезни.
Материал для исследования: мокрота и промывные воды бронхов, гной из
абсцессов и эмпием, содержимое плевральной полости и суставов,
спинномозговая жидкость и кровь, а также биопсированные кусочки из очагов
поражения
и
соответствующий
трупный
материал.
Диагностика основана на совокупности клинико-рентгено- логических данных и
подтверждается обнаружением возбудителя в исследуемом материале.
Микроскопический
метод
В окрашенных мазках патологического материала нокардии выявляются как
полиморфные несептированные палочки, тонкие нити с различной
интенсивностью окраски. При микроскопии культуры из молодых (1–2-дневных)
колоний можно видеть короткие, иногда ветвящиеся нити, распадающиеся на
палочковидные и овоидные элементы, целиком или частично фиолетовые при
окраске по Граму или красные при окраске по Цилю-Нильсену.
Культуральный
метод
Проводят обработку мокроты и гноя с целью их разжижения и частичного
подавления сопутствующей флоры, применяя слабые растворы щелочи и
трифосфата натрия (10%) при встряхивании в течение 30 минут. Затем после
центрифугирования
осадок
промывают
физиологическим
раствором,
нейтрализуют соляной кислотой до рН=7,0 и засевают на общепринятые плотные
и жидкие питательные среды, применяемые для выращивания актиномицетов
(мясо- пептонные или амино-пептидные агаровые среды с глюкозой, на среду
Сабуро), культивируют в течение 2–3 недель при 30–37°С в аэробных условиях.
Колонии на плотных средах мягкие, вначале гладкие, позднее исчерченные и
шероховатые, иногда крошковатой консистенции, легко отделяются от субстрата.
Оттенки их широко варьируются от кремового до желтого, оранжевого или
кирпично-красного.
N. asteroides желатин не разжижает, не выделяет уреазу, не усваивает мочевину,
не ассимилирует галактозу, мальтозу и ксилозу. Большинство свежевыделенных
культур патогенны для морских свинок и кроликов (при внутрибрюшинном
введении, особенно в смеси с муцином, вызывают заболевание).
Гистологическое
исследование
Для окраски гистологических срезов из очагов поражения пользуются методом
Грама-Вейгерта. Нокардии в срезах встречаются в виде тонких нитей и палочек
различной
длины.
Серологические
исследования
Для диагностики нокардиоза используются реакции агглютинации, преципитации
и связывания комплемента, а также аллергические кожные пробы. Антигенами
для реакции агглютинации служат вакцины из культур возбудителей
(аутоштаммы), для реакции преципитации – солевые белковые извлечения, а для
реакции связывания комплемента и аллергических проб – полисахаридные
антигены. Положительные реакции более отчетливыми получаются на 4-й неделе
болезни. Специфическая иммунолюминесценция для выявления нокардий в
патологическом материале и в пробах из внешней среды является экспресс-
методом идентификации нокардий.
79. Герпесвирусы широко распространены в человеческой популяции (более 90%
всего населения планеты инфицировано одним или несколькими серотипами
вируса простого герпеса), способны поражать практически все органы и системы
организма хозяина, вызывая латентную, острую и хроническую формы инфекции.
В настоящее время известно 8 антигенных серотипов вирусов герпеса.
Заболевания,
ассоциированные
с
типом
герпесвирусов
Тип вируса Заболевания Вирус простого герпеса 1 типа орофарингеальный герпес
(десны и слизистые оболочки рта), лабиальный герпес, герпес кожи,
офтальмогерпес, генитальный герпес, герпетический энцефалит, пневмониты
Вирус простого герпеса 2 типа неонатальный герпес, генитальный герпес,
диссеминированный герпес Вирус Varicella zoster (вирус опоясывающего лишая)
ветряная оспа, опоясывающий герпес Вирус Эпштейн-Барр инфекционный
мононуклеоз, назофарингеальная карцинома, лимфома Беркитта, В-клеточная
лимфома,
синдром хронической
усталости
и
иммунной
депрессии
Цитомегаловирус
врожденные
повреждения
ЦНС,
ретинопатии,
интерстициальный пневмонит, гепатит, энтероколит при СПИДе, цитомегалия
при иммунодефиците и трансплантации органов Вирус герпеса человека 6 типа
внезапная экзантема (эритема новорожденных), синдром хронической усталости
и иммунной депрессии Вирус герпеса человека 7 типа внезапная экзантема
(эритема новорожденных), синдром хронической усталости и иммунной
депрессии Вирус герпеса человека 8 типа саркома Kапоши у ВИЧ-отрицательных
людей, саркома Kапоши у ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом
Материал для исследования берется в зависимости от локализации поражений:
содержимое везикул, соскоб клеток, спинномозговая жидкость, аспират из
бронхов, биоптат, кровь, моча, слюна, слезная жидкость, отделяемое канала
шейки
матки,
влагалища,
уретры,
прямой
кишки.
Диагностика
герпесвирусной
инфекции
осуществляется
с
помощью
классического вирусовыделения на чувствительных клеточных культурах
(герпесвирусы вызывают ЦПД с образованием гигантских многоядерных клеток),
а
также
иммунофлюоресцентным,
серологическими
и
молекулярно-
биологическими методами, что позволяет диагностировать всю группу
герпесвирусов, включая ВГЧ-6, ВГЧ-7 и ВГЧ-8 типы. В качестве экспресс-
диагностики применяют пробу Цанка: мазок- отпечаток из везикул окрашивают
по Романовскому-Гимзе и обнаруживают в нём гигантские многоядерные клетки
с
внутриядерными
включениями.
Обнаружение вирусов методом ПЦР в пробе соскоба эпителия свидетельствует об
острой фазе инфекции. Во время латентной фазы (ремиссии) вирусы простого
герпеса персистируют в нервных ганглиях и отсутствуют в эпителиальных
клетках, а значит, не выявляются методом ПЦР в соскобе. Клинических
проявлений инфекции при этом нет или наблюдаются остаточные проявления
(пузырьки могут заселяться неспецифической микрофлорой). Таким образом,
если вирусы не обнаружены методом ПЦР в соскобе эпителия, то это либо
латентная фаза герпесвирусной инфекции, либо отсутствие вирусов в организме.
Установить, есть ли носительство, можно с помощью серологических методов,
например
ИФА
(определение
IgG).
Выявление IgM и низкоавидных IgG, при отсутствии высокоавидных IgG
свидетельствует
о
первичном
инфекционном
процессе.
Активация
герпесвирусной инфекции у носителей сопровождается нарастанием титров IgG,
однако количественный показатель IgG не всегда обладает диагностической
ценностью, даже в динамике.
80.
диагностической
ценностью,
даже
в
динамике.
Диагностика цитомегаловирусной инфекции Основным методом диагностики
является ПЦР. Биологическим материалом при этом могут быть: кровь, ликвор,
моча, слюна, мокрота, грудное молоко, соскобы (урогенитальные, из зева),
сперма, лаваж, а также биоптаты. Во время беременности адекватной пробой для
ПЦР-исследования
является
соскоб
из
цервикального
канала.
Культивирование: вирус репродуцируется только в клетках человека. Обладает
сродством к клеткам слюнных желез и почек, где образует крупные
внутриядерные включения.
81.
Обследованию
на
папилломавирусную
инфекцию
подлежат:
1. Мужчины и женщины при имеющихся симптомах инфекционно-
воспалительных
процессов.
2.
При
наличии
факторов
риска
ВПЧ-инфекции.
3. При наличии экзофитных образований в аногенитальной области и полости рта.
4. Женщины, имеющие патологию шейки матки любой этиологии.
5. Мужчины и женщины, проходящие плановое обследование перед
планированием
беременности.
Методы
диагностики:
1)
визуальный
осмотр
очагов
предполагаемого
поражения;
2)
кольпоскопия;
3)
цитологическое
исследование;
4)
молекулярно-биологические
методы;
5)
гистологические
методы.
Комплекс обследования на ПВИ должен включать в себя обязательное проведение
тестов диагностики инфекционных заболеваний урогенитальной зоны
(генитальный герпес, хламидиоз, трихомониаз, гонорея, микоплазмоз,
уреаплазмоз, гарднереллез, а также неспецифических воспалительных
заболеваний). В обязательном порядке проводится исключение сифилиса,
гепатитов,
ВИЧ-инфекции.
Кольпоскопия (микроскопии шейки матки с увеличением до 30 раз) считается
незаменимым методом исследования состояний шейки матки при различных
течениях папилломавируса. Используются различные тесты (пробы с раствором
уксусной кислоты и Люголя), которые облегчают восприятие визуальной картины
того или иного заболевания. При помощи кольпоскопии выполняется прицельная
биопсия
тканей
шейки,
а
также
удаление
образований.
Молекулярно-биологические методы диагностики папилломавируса направлены
на обнаружение вирусной ДНК в соскобе из цервикального канала, уретры,
поверхности кожи и слизистой, а ткже с поверхности экзофитной кондиломы.
Метод ПЦР позволяет определить папилломавирус с большой точностью и
произвести типирование вируса. Для цитологического исследования у женщин
рекомендуется проводить забор материала с поверхности вульвы, влагалища, а
также шейки матки. Цитологическое исследование нужно проводить не ранее чем
через 2-е суток после последнего полового акта, а также не ранее чем через 2-е
суток после завершения лечения инфекционно-воспалительных заболеваний,
после проведения кольпоскопии, во время которой применялись растворы укуса и
Люголя. Исследование цитологических мазков считается эталонным и получило
название Pap-smear test. На современном этапе используется жидкостная
цитология, которая представляет собой забор материала в жидкий консервант.
Далее из одной пробы выполняется типирование методом ПЦР и цитологическое
исследование. Специфичным признаком наличия папилломавирусной инфекции
при
этом
является
определение
койлоцитов.
Гистологические методы диагностики папилломавируса позволяют оценить
морфологическую степень изменения тканей при наличии ПВИ. Показанием для
проведения
гистологического
исследования
считаются
определенные
кольпоскопические изменения.
82.
Диагностика
бешенства
− Диагноз «бешенство» ставится на основании анамнеза. Прижизненно
подтвердить бешенство очень нелегко. Обычно это делается постмортально:
− Обнаружение телец Бабеша-Негри при исследовании биоптатов головного мозга
(мазки, срезы из гиппокампа, пирамидальных клеток коры, клеток Пуркинье
мозжечка).
Окраска
по
Манну,
Туревичу,
Романовскому-Гимзе.
− Обнаружение антигена вируса бешенства в клетках с помощью ИФА.
− Постановка биологической пробы с интрацеребральным заражением
новорождённых мышей вирусом из взвеси мозговой ткани или подчелюстных
желёз.
Работа с инфицированным материалом должна проводиться с соблюдением всех
правил, предусмотренных для возбудителей особо опасных инфекций. Вследствие
отсутствия
прижизненной
лабораторной
диагностики
атипическая
паралитическая форма бешенства (когда нет гидрофобии и возбуждения) почти не
диагностируется.
В 2008 году был предложен метод ПЦР для прижизненного обнаружения L-
полимеразы вируса бешенства. Для исследования при этом используются
биоптаты задне-верхней поверхности шеи (именно там в нервных окончаниях,
окружающих волосяные фолликулы, находятся нуклеокапсиды вируса). Данный
метод показал очень высокую специфичность (около 98%) и чувствительность
(100%), причём с первого дня появления симптомов бешенства и до смерти,
независимо от дня взятия пробы.