Файл: yablonskii_v_a_praktichne_akusherstvo_ginekologiya_ta_bioteh.pdf
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 02.12.2019
Просмотров: 6928
Скачиваний: 1
60
мі
кожного
плідника
(
рис
. 26).
Патологічні
зміни
сперміїв
можуть
бути
первинними
та
вторинними
.
То
-
му
Блом
пропонує
при
оцінці
морфо
-
логії
сперміїв
класифікувати
їх
на
три
види
:
нормальні
,
з
первинними
пато
-
логічними
змінами
та
з
вторинними
змінами
.
До
первинних
змін
відносять
зміни
розміру
та
форми
головки
,
тіла
й
хвостика
та
їх
забарвлення
.
Це
гіга
-
нтські
спермії
,
карликові
,
з
круглою
,
грушоподібною
або
врізаною
голов
-
кою
,
без
головок
,
двоголові
,
безхвості
тощо
.
Вони
спостерігаються
при
роз
-
ладах
сперміогенезу
в
сім
’
яниках
,
за
-
пальних
процесах
у
них
,
при
авітамі
-
нозах
,
порушеннях
терморегулюючої
функції
мошонки
.
Вторинні
зміни
сперміїв
(
спермії
із
закрученими
та
обламаними
хвос
-
тиками
,
з
відокремленими
ковпачка
-
ми
,
безхвості
,
з
проксимальною
про
-
топлазматичною
краплею
)
виника
-
ють
при
розладах
процесу
їх
дозрі
-
вання
,
ураженнях
придатків
сім
’
яни
-
ків
та
сім
’
явивідних
шляхів
,
додатко
-
вих
статевих
залоз
,
при
порушенні
режиму
використання
плідників
,
а
також
способу
взяття
сперми
й
від
подальшого
поводження
з
нею
.
Вторинні
зміни
можуть
ви
-
никати
також
у
процесі
виготовлення
препарату
внаслідок
механіч
-
ної
дії
на
спермії
.
Свіжовзяту
сперму
для
зручності
підрахунку
сперміїв
розріджують
1 %-
м
розчином
натрію
хлориду
:
барана
у
20 – 30
разів
,
бугая
в
10 – 15,
жеребця
і
кнура
в
2 – 3
рази
або
зовсім
не
розріджують
.
Для
цього
до
краплі
сперми
очною
піпеткою
додають
відповідну
кількість
1 %-
го
розчину
натрію
хлориду
і
обережно
перемішують
.
Беруть
невелику
краплю
відповідно
розрідженої
сперми
,
нано
-
сять
її
на
кінець
знежиреного
й
сухого
предметного
скельця
і
,
нахи
-
ливши
його
,
дають
можливість
краплі
стекти
або
роблять
з
неї
то
-
ненький
мазок
.
Висушують
його
на
повітрі
протягом
1 – 2
хв
і
фік
-
сують
96 %-
м
спиртом
-
ректифікатом
,
який
наносять
на
1 – 2
хв
.
Спо
-
ліскують
дистильованою
водою
і
фарбують
розчином
азур
-
еозину
чи
метиленового
синього
3 – 5
хв
.
Змивають
фарбу
водою
,
висушують
мазок
і
розглядають
його
під
мікроскопом
при
збільшенні
в
600
ра
-
зів
.
У
кожному
полі
зору
підраховують
і
записують
кількість
нор
-
Рис
. 26.
Нормальні
і
патологічні
спермії
:
1
—
нормальні
;
2
—
гігантські
та
карли
-
кові
;
3
—
з
деформацією
головки
;
4
—
з
надломом
шийки
;
5
—
окремі
головки
(
нормальні
за
формою
)
та
безхвості
спермії
;
6
—
з
закручуванням
хвостика
;
7
—
з
протоплазматичною
краплею
та
потовщенням
;
8
—
інші
патологічні
форми
(
за
Г
.
В
.
Паршутіним
та
ін
., 1970)
61
мальних
і
патологічних
сперміїв
,
при
цьому
загальна
кількість
тих
й
інших
має
становити
не
менше
500.
Кількість
патологічних
спер
-
міїв
визначають
за
формулою
ПС
= (
П
×
100) : (
П
+
Н
),
де
П
—
кількість
підрахованих
патологічних
форм
сперміїв
;
Н
—
кількість
нормальних
сперміїв
, %;
С
—
спермії
.
2.3.4.
Визначення
інтенсивності
дихання
сперміїв
за
швидкістю
знебарвлення
метиленового
синього
Оснащення
заняття
:
свіжовзята
сперма
, 0,01 %-
й
розчин
метиленового
синього
на
0,9 %-
му
розчині
натрію
хлориду
,
скляні
капіляри
з
діаметром
каналу
0,8 – 1
мм
і
довжиною
6 – 8
см
,
пісочний
годинник
,
предметні
скельця
,
очні
піпетки
,
фільтрувальний
білий
папір
.
Метод
ґрунтується
на
здатності
метиленового
синього
приєдну
-
вати
водень
,
який
відокремлюється
від
окислюваного
субстрату
в
процесі
дихання
і
відновлюється
у
безбарвну
лейкоформу
.
Процес
відбувається
за
участю
ферментів
дегідрогеназ
,
тому
цей
метод
ще
називають
методом
визначення
дегідрогеназної
активності
.
Беруть
10
мл
0,01 %-
го
розчину
метиленового
синього
,
приготов
-
леного
заздалегідь
на
0,9 %-
му
розчині
натрію
хлориду
і
настояного
протягом
3
днів
,
і
додають
до
90
мл
0,9 %-
го
розчину
натрію
хлори
-
ду
,
старанно
змішуючи
.
На
чисте
предметне
скло
,
підігріте
до
30 – 37 °
С
,
за
допомогою
очної
піпетки
наносять
одну
краплю
свіжовзятої
сперми
бугая
,
до
-
дають
до
неї
краплю
розчину
метиленового
синього
.
Змішують
крап
-
лі
,
набирають
суміш
у
канал
скляної
трубки
,
надівши
для
цього
на
один
її
кінець
гумову
трубку
.
Стовпчик
суміші
в
каналі
трубки
по
-
винен
бути
завдовжки
близько
2
см
і
без
бульбашок
повітря
.
Кла
-
дуть
трубку
зі
спермою
на
аркуш
білого
паперу
й
визначають
за
допомогою
секундоміра
час
,
за
який
голубий
стовпчик
знебар
-
вився
,
на
кінцях
його
можуть
за
-
лишитися
голубі
смужки
.
Зістав
-
ляють
одержані
результати
з
на
-
веденими
у
табл
. 4
даними
.
2.3.5.
Визначення
концентрації
сперміїв
Місце
проведення
заняття
:
лабораторія
кафедри
.
Мета
заняття
:
оволодіти
наявними
методиками
визначення
концентрації
спермі
-
їв
у
спермі
.
Оснащення
заняття
:
нерозріджена
сперма
,
змішувачі
еритроцитарні
та
лейкоци
-
тарні
,
лічильні
камери
,
фотоелектроколориметр
,
мікроскопи
, 70 %-
та
96 %-
й
спирт
,
0,5, 0,9
та
3 %-
ні
водні
розчини
натрію
хлориду
,
гумова
груша
чи
кулі
Річардсона
,
4.
Оцінка
якості
сперми
за
тривалістю
знебарвлення
метиленового
синього
,
хв
Якість
сперми
Бугая
Барана
Добра
5 – 10
3 – 7
Середня
11 – 30
8 – 12
Погана
Понад
30
Понад
12
62
стандарти
для
визначення
концентрації
сперміїв
у
спермі
жеребця
,
стерильні
мар
-
леві
серветки
,
фільтрувальний
папір
,
Короткі
методичні
вказівки
.
Якість
сперми
не
є
постійною
,
а
значно
змінюється
залежно
від
умов
годівлі
та
утримання
плідників
,
догляду
за
ними
,
режиму
їх
ста
-
тевого
використання
,
стану
здоров
’
я
плідника
і
навіть
сезону
року
,
тому
вивченню
її
надають
важливого
значення
.
Окомірна
мікроскопічна
оцінка
сперми
дає
лише
при
-
близне
уявлення
про
кількість
сперміїв
в
1
мл
сперми
.
Проте
для
встановлення
раціо
-
нального
ступеня
розрідження
та
оптимальної
дози
сперми
при
осіменінні
самок
необхідно
точно
знати
концентрацію
у
ній
сперміїв
.
Визначення
концентрації
сперміїв
у
спермі
за
допомогою
лічи
-
льної
камери
Горяєва
.
Лічильна
камера
Горяєва
має
вигляд
товсто
-
го
,
відшліфованого
предметного
скла
,
у
середній
частині
якого
роз
-
міщено
три
поперечні
пластинки
.
На
середній
пластинці
,
опущеній
на
0,1
мм
нижче
бічних
(
опірних
)
пластинок
,
вигравійовано
дві
квадратні
сітки
,
розділені
на
225
великих
квадратів
,
з
яких
25,
у
свою
чергу
,
розділені
на
16
малих
—
всього
400
малих
квадратів
площею
1/400
мм
кожний
.
Після
притирання
до
опірних
пластинок
шліфованого
накривного
скельця
над
сіткою
утворюється
камера
.
Для
зручності
підрахунку
сперму
слід
розрідити
і
позбавити
спермії
рухливості
.
Сперму
змішують
у
змішувачі
(
меланжері
)
з
3 %-
м
роз
-
чином
натрію
хлориду
.
Сперму
бугая
та
барана
змішують
у
ерит
-
роцитарному
змішувачі
(
з
червоною
крупинкою
в
кулястому
розши
-
ренні
та
поділками
на
піпетці
0,5; 1
і
101),
сперму
жеребця
і
кну
-
ра
—
у
лейкоцитарному
(
з
білою
крупинкою
та
поділками
на
піпетці
0,5; 1
та
11).
На
опірні
пластинки
чистої
лічильної
камери
кладуть
накривне
скельце
і
,
притискаючи
його
великими
пальцями
по
краях
,
прити
-
рають
його
до
пластинок
до
появи
райдужних
кілець
.
У
чистий
су
-
хий
знежирений
еритроцитарний
змішувач
(
для
сперми
жеребця
та
кнура
лейкоцитарний
змішувач
)
набирають
сперму
бугая
до
мітки
1,0
або
сперму
барана
,
кнура
чи
жеребця
до
мітки
0,5,
швидко
вити
-
рають
кінець
піпетки
ватою
і
набирають
3 %-
й
розчин
натрію
хло
-
риду
до
верхньої
позначки
(101
чи
11).
В
результаті
сперма
барана
буде
розріджена
у
200
разів
,
бугая
—
в
100,
кнура
та
жеребця
—
у
20
разів
,
а
спермії
загинуть
під
дією
гіпертонічного
розчину
натрію
хлориду
,
що
полегшить
їх
підрахунок
.
Кінці
змішувача
затискають
між
великим
і
вказівним
пальцями
і
струшують
протягом
2 – 3
хв
.
Видаляють
перші
чотири
краплі
рідини
із
змішувача
на
вату
,
оскіль
-
ки
в
них
немає
сперміїв
,
а
п
’
яту
краплю
наносять
збоку
на
сітку
ка
-
мери
під
накривне
скло
.
Крапля
повинна
рівномірно
заповнити
простір
камери
і
не
мати
бульбашок
повітря
.
Залишки
сперми
вити
-
рають
марлевою
серветкою
.
Заправлену
камеру
кладуть
на
столик
мікроскопа
в
точно
гори
-
зонтальному
положенні
,
наводять
мікроскоп
і
підбирають
оптима
-
льне
освітлення
,
опускаючи
конденсор
,
змінюючи
просвіт
діафраг
-
ми
чи
повертаючи
дзеркало
.
Спочатку
знаходять
сітку
камери
під
малим
збільшенням
мікроскопа
,
а
після
цього
переводять
на
збіль
-
63
шення
у
400
разів
(
при
цьому
в
полі
зору
поміститься
один
великий
квадрат
сітки
камери
)
і
починають
підрахунок
сперміїв
.
Необхідно
підрахувати
їх
кількість
у
5
великих
або
у
80
малих
квадратах
,
роз
-
міщених
по
діагоналі
.
При
підрахунку
сперміїв
беруть
до
уваги
лише
їхні
го
-
лівки
і
в
кожному
малому
квадраті
раху
-
ють
спермії
,
розміщені
всередині
квад
-
рата
,
а
також
ті
,
що
лежать
головками
на
лівій
і
верхній
лініях
квадрата
(
рис
. 27).
Кількість
підрахованих
у
кожному
вели
-
кому
квадраті
сперміїв
записують
окремо
,
а
потім
підсумовують
.
Концентрацію
спе
-
рміїв
визначають
за
формулою
С
= (
Н
×
Д
×
400
×
1000) :
Np,
або
С
= (
Н
×
Д
×
4000
×
1000) : 80,
де
С
—
концентрація
сперміїв
;
Н
—
кількість
сперміїв
у
80
малих
квадратах
;
Д
—
ступінь
розрідження
сперми
у
змішувачі
(20; 100
чи
200); 400 —
число
для
переведення
у
квадратні
міліметри
; 4000 —
число
для
переведення
в
кубічні
міліметри
(
об
’
єм
одного
малого
ква
-
драта
становить
1/4000
мм
3
); 1000 —
число
для
переведення
в
мілі
-
літри
(
в
1
мл
міститься
1000
мм
3
);
N —
кількість
малих
квадратів
,
у
яких
здійснюють
підрахунок
;
р
—
глибина
камери
,
яка
становить
0,1
мм
.
Нехай
,
наприклад
,
при
визначенні
концентрації
сперміїв
у
спе
-
рмі
бугая
у
80
малих
квадратах
було
підраховано
220
сперміїв
.
Спе
-
рму
було
розріджено
в
меланжері
у
100
разів
.
Тоді
С
= (220
×
×
100
×
400
×
100) : 80
×
0,1 = 1 100 000 000
сперміїв
в
1
мл
.
Якщо
глибина
камери
дорівнює
0,1
мм
,
то
концентрацію
сперміїв
можна
визначити
за
спрощеними
формулами
,
поділивши
кількість
підрахованих
у
80
малих
квадратах
сперміїв
на
200 —
для
сперми
бугая
,
на
100 —
для
сперми
барана
і
на
1000 —
для
сперми
кнура
або
жеребця
.
Після
виконання
завдання
треба
ретельно
помити
лічильні
ка
-
мери
й
накривні
скельця
спочатку
простою
,
а
потім
дистильованою
водою
і
витерти
насухо
марлевою
серветкою
.
Із
змішувача
видаля
-
ють
залишки
сперми
,
миють
його
послідовно
дистильованою
водою
,
потім
96 %-
м
спиртом
і
ефіром
,
висушують
,
продуваючи
через
них
повітря
із
гумової
груші
чи
кулі
Річардсона
.
Визначення
концентрації
сперміїв
за
допомогою
фотоелектроко
-
лориметра
ФЕК
-
М
(
рис
. 28).
Перш
ніж
приступити
до
роботи
з
при
-
ладом
,
старанно
вивчають
інструкцію
,
яка
до
нього
додається
.
Потім
з
’
єднують
фотоелектроколориметр
із
стабілізатором
і
гальвано
-
метром
і
перевіряють
справність
усього
приладу
.
Рис
. 27.
Послідовність
підра
-
хунку
сперміїв
у
лічильній
камері
64
За
допомогою
ФЕК
-
М
можна
легко
і
швидко
визначити
концен
-
трацію
сперміїв
.
Принцип
його
роботи
полягає
в
тому
,
що
при
про
-
пусканні
через
встановлену
в
прилад
кювету
зі
спермою
елект
-
ричних
променів
частина
їх
поглинається
сперміями
,
а
решта
про
-
ходить
через
кювету
і
потрапляє
на
фотоелемент
,
з
’
єднаний
з
галь
-
ванометром
.
При
цьому
через
гальванометр
проходить
електричний
струм
,
величина
якого
обернено
пропорційна
оптичній
густині
спер
-
ми
.
Чим
вища
каламутність
сперми
(
тобто
концентрація
у
ній
спер
-
міїв
),
тим
більше
ослаблюється
потік
світла
,
яке
проходить
крізь
неї
.
При
визначенні
концентрації
сперміїв
за
цим
методом
спочатку
по
-
трібно
побудувати
криву
оптичної
щільності
сперми
різної
кон
-
центрації
.
Для
цього
вибирають
найгустіший
еякулят
з
концентра
-
цією
сперміїв
понад
1
млрд
в
1
мл
і
,
використовуючи
3,5 %-
й
розчин
натрію
цитрату
,
виготовляють
серію
послідовних
розріджень
у
2, 4,
6, 8, 10
разів
і
т
.
д
.
У
кожній
з
цих
проб
двічі
визначають
концентра
-
цію
сперміїв
у
лічильній
камері
і
встановлюють
оптичну
щільність
на
ФЕК
.
Для
цього
у
пронумеровані
пеніцилінові
флакони
налива
-
ють
по
10
мл
3,5 %-
го
розчину
натрію
цитрату
,
набирають
у
мікро
-
піпетку
0,1
мл
сперми
певного
розрідження
,
видувають
її
у
відповід
-
ний
флакон
з
розчином
,
промивають
кілька
разів
розчином
і
рете
-
льно
змішують
.
Наливають
рідину
з
флакона
в
кювету
ФЕК
з
ро
-
бочою
довжиною
10
мм
і
ставлять
у
праве
гніздо
приладу
на
най
-
більшу
відстань
від
фотоелемента
.
В
ліве
гніздо
приладу
на
такій
самій
відстані
і
в
запасне
праве
гніздо
ставлять
таку
саму
кювету
з
розчином
натрію
цитрату
.
Вмикають
прилад
.
На
шляху
правого
пуч
-
ка
світла
стоїть
кювета
з
розрідженою
спермою
.
Вона
затримує
час
-
тину
світла
,
тому
на
правий
фотоелемент
падає
пучок
меншої
інтен
-
сивності
.
Стрілка
гальванометра
при
цьому
відхиляється
.
Для
ви
-
рівнювання
світлових
потоків
у
лівий
потік
вводять
фотометричний
клин
(
поки
стрілка
гальванометра
не
зупиниться
на
нулі
).
Тепер
,
Рис
. 28.
Фотоелектроколориметр
ФЕК
-
М
:
1 —
ліва
шкала
відлікового
барабана
;
2
—
гнізда
тримачів
;
3
—
права
шкала
оптичної
щільності
;
4
—
ручка
відлікового
барабана
;
5
—
ручка
світлофільтрів
;
6
—
ручка
нейтральних
клинів
;
7
—
ручка
ввімкнення
гальванометра
;
8
—
клеми
для
підключення
гальванометра
;
9
та
10
—
трима
-
чі
кювет
:
ЛВ
—
лівий
,
ПР
—
правий