Просматривать препарат начинают с левого верхнего выбранного в мазке поля зре­ния, постепенно передвигаясь вдоль продольной оси препарата до конца мазка, и затем вновь опускаясь вниз и двигаясь в противоположном направлении и т.д., про­ходя все поля зрения до границы мазка (рисунок 1).

324-2	Г ^
	\^ )

Рисунок 1. Линии просмотра мазка размером 1x2 см.

324 - порядковый номер из журнала ТБ 04; 2 - номер порции мокроты По окончании микроскопического исследования предметное стекло следует освободить от препаратодержателя;

а) снять предметное стекло со столика микроскопа;

б) сверить номер на стекле и направлении ТБ 05 и записать результат микроско-

пии в журнале ТБ 04;

в) для удаления иммерсионного масла опустить мазок на несколько секунд в
баночку с ксилолом, или в случае отсутствия ксилола, протереть мазок сухой
салфеткой;

г) очищенный от иммерсионного масла мазок поместить в коробку для последу-

ющего хранения

Туберкулезные бактерии - маленькие красные палочки, слегка изогнутые, более или менее зернистые, изолированные, парами, группами, хорошо видны на голубом фоне мазка. Подсчитать количество кислотоустойчивых бактерий (КУБ) и записать результат. Перед следующим мазком протереть иммерсионные линзы чистой салфеткой.

3.5.3 Результаты исследования

Число обнаруженных бактерий определяет тяжесть заболевания и опасность боль­ного для окружающих. Следовательно, исследование должно быть не только каче­ственным, но и количественным. Регистрация результатов с указанием числа обна­руженных КУБ проводится следующим образом:

Таблица 3 - Регистрация результатов микроскопического исследования

Нет КУБ	на 300 полей зрения	Отрицательный
1-9 КУБ	на 100 полей зрения	указать точное число
10-99 КУБ	на 100 полей зрения	+
1-10 КУБ	на 1 поле зрения	++
более 10 КУБ	на 1 поле зрения	+++

Отправка результатов исследования

Результаты исследования всех препаратов должны регистрироваться в лаборатор­ном журнале ТБ-04. Затем на основании записей в ТБ-04 результаты вносятся в форму ТБ-05, после чего ее отправляют в медицинское учреждение как можно быс­трее.3.5.4 Уничтожение исследованных мазков

---

Мазок с обнаруженными на нем КУБ помещают в специальный ящик и хранят в лаборатории для последующего контроля качества.

После проведенного контроля качества мазки с КУБ (+) подлежат вывозу на свалку после предварительного обеззараживания (погружение в дезраствор, кипячение, ав-ток лавирование).

Предметные стекла с отрицательными результатами мазков можно использовать повторно после обеззараживания при отсутствии механических повреждений (ско­лы, царапины и т.д.).

3.6 Люминесцентная микроскопия

Люминесцентная микроскопия использует подсветку от кварцевой или галогеновой лампы, либо от ртутной лампы высокого давления.

Преимущество люминесцентной микроскопии заключается в том, что мазки про­сматриваются при меньшем увеличении, тем самым охватывается большая область и как результат, времени на просмотр затрачивается значительно меньше. Недо­статком люминесцентной микроскопии является вероятность принятия кислото­упорных артефактов за кислотоустойчивые палочки. Поэтому рекомендуется про­верять все найденные сомнительные палочки под большим увеличением, а положи­тельные мазки подтверждать окрашиванием по методу Циля-Нильсена.

3.6.1 Приготовление реактивов

Аурамин О

• Аурамин 0,1 г

• 95% этиловый спирт 10 мл

• Растворите аурамин в спирте - раствор №1

Аурамин является канцерогенным веществом и поэтому следует избегать прямого контакта с порошком или раствором красителя.

Фенол

• Кристаллы фенола 3 г

• Дистиллированная вода 87 мл

• Растворите кристаллы фенола в воде - раствор №2

Смешайте растворы №1 и №2. Реактив хранится в прочно закрытой емкости из темного стекла в темноте, вдали от источников тепла. Раствор хранится при ком­натной температуре в течение 3 месяцев. Реактив может помутнеть во время хране­ния, но это не отражается на качестве окрашивания.

Обесцвечивающий раствор:

• Концентрированная соляная кислота 0,5 мл

• 70% этиловый спирт (можно технический для перманганата калия и акриди­
  нового оранжевого) - 100 мл.

Осторожно добавьте концентрированную соляную кислоту к 70% этиловому спир­ту. Всегда медленно добавляйте кислоту в спирт, не наоборот. Смесь может на­греться. Приготовленный реактив хранится во флаконе из темного стекла. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Соляно-кислый спирт 3,0%:

- Концентрированная соляная кислота 3 мл

- 95% этиловый спирт (можно технического качества) 97 мл
Осторожно добавьте концентрированную соляную кислоту к 95% этиловому спир-

28

---

ту. Всегда медленно добавляйте кислоту в спирт, не наоборот. Смесь может на­греться. Приготовленный реактив хранится во флаконе из темного стекла. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Фоновое окрашивание

В качестве красителей возможно использование перманганата калия, акридинового оранжевого; 0,25% водного раствора метиленового синего и кислого фуксина.

Перманганат калия

• Перманганат калия 0,5 г

• Дистиллированная вода 100 мл

Растворите перманганат калия в дистиллированной воде. Приготовленный реактив хранится в хорошо укупоренном флаконе из темного стекла. Раствор может хра­ниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Акридиновый оранжевый

• Безводный двухзамещенный фосфат натрия 0,01 г

• Дистиллированная вода 100 мл

• Акридиновый оранжевый 0,01 г

• Растворите фосфат в дистиллированной воде, затем добавьте акридиновый
  оранжевый и растворите.

Приготовленный реактив хранится во флаконе из темного стекла в темноте и вдали от источников тепла. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Кислый фуксин

• Кислый фуксин 1гр

• Дистиллированная вода 300 мл

• Концентрированная уксусная кислота 10мл

• Растворите кислый фуксин в дистиллированной воде, добавьте уксусной кис­
  лоты. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

Метиленовый синий (0,25% водный раствор)

• Метиленовый синий 0,25 г

• Дистиллированная вода 100 мл

• Растворите аурамин в спирте - раствор № 1

Растворите метиленовый синий в дистиллированной воде. Раствор может храниться при комнатной температуре до 3 месяцев.

На всех флаконах с реактивами написать название реактива, дату приготовления и срок хранения.

3.6.2 Методика окраски

Поместите пронумерованные мазки на мостик в количестве, удобном и безопас­ном для работы (максимум 12). Убедитесь, что мазки не соприкасаются друг с дру­гом.

1. Залейте все предметное стекло раствором аурамина О и оставьте на 15 минут
   для прокрашивания. Убедитесь, что раствор остался на предметных стеклах.
   Не нагревайте и не используйте фильтровальную бумагу

1. Промойте мазки дистиллированной водой и удалите жидкость

2. Залейте обесцвечивающим раствором или 3,0% солянокислым спиртом на 3-
   5 минут;

29

4. Промойте дистиллированной водой и удалите оставшуюся жидкость

5. Залейте мазки одним из приготовленных растворов: перманганата калия, ак­
   ридинового оранжевого на 2 минуты, кислого фуксина и 0,25% водным ра­
   створом метиленового синего на 3-5 минут и оставьте для прокрашивания

6. Промойте мазки дистиллированной водой

7. Оставьте мазки высыхать на воздухе, ни в коем случае не промокайте их филь­
   тровальной бумагой и т. д.

8. Просматривайте мазки как можно скорее после приготовления.

Предосторожности во время окрашивания:

1. Не сокращайте время экспозиции с раствором солянокислого спирта или сер­
   ной кислоты.

2. Избегайте приготовления слишком толстых мазков. Это может воспрепят­
   ствовать качественному контакту с обесцвечивающим реактивом, а фоновый
   краситель может полностью затушить присутствие кислотоупорных бакте­
   рий. Толстые мазки могут отслаиваться, что приведет к потере материала и
   возможному переносу его на другие мазки. Слишком интенсивное фоновое
   окрашивание может маскировать присутствие кислотоупорных палочек

3. Мазки, окрашенные люминесцентными реактивами, следует просмотреть в
   течение 24 часов после приготовления

4. При люминесцентной микроскопии микобактерии выглядят в виде светящих­
   ся палочек. Фон мазка зависит от используемого красителя: бледно-желтый
   фон определяется перманганатом калия, оранжевый фон - акридиновым оран­
   жевым, малиново-красный до черного фона - кислым фуксином, темный фон
   - метиленовым синим.

---

3.7 Контроль качества бактериоскопических исследований

Программа контроля качества бактериоскопической лаборатории представляет со­бой систему, предназначенную для постоянного улучшения эффективности, повы­шения надежности работы этой службы, что позволит сделать бактериоскопию сред­ством выбора при диагностике и мониторинге. Компонентами программы являются:

• внутренний контроль качества

• внешний контроль качества

• улучшение качества

3.7.1 Внутренний контроль качества бактериоскопической лаборатории - это процесс эффективного и систематического отслеживания рутинной работы в лаборатории на регулярной основе. Функционирование этой программы гарантирует, что информа­ция, полученная в ходе исследований, точна, надежна и воспроизводима. Внутренний контроль качества это ответственность всего лабораторного персонала. Контроль должен быть направлен на следующее:

• размещение лаборатории

• оборудование

• сбор и доставка материала

• обработка материала

• методы

• реагенты

• выдача результатов

Ключевыми аспектами успешной программы внутреннего контроля качества являются:

• адекватно обученный, мотивированный и сплоченный персонал,

• разумный выбор методик,

30

• готовность признавать и исправлять ошибки,

• эффективная связь, меры, применимые ко всем туберкулезным бак лабора­
  ториям.

3.7.1.1 Использование контрольных (положительных и отрицательных) мазков:

- ежедневно вместе с текущими мазками необходимо включать контрольные
(заведомо положительный и отрицательный) мазки

3.7.1.2 Контроль качества растворов и реактивов:

• ежедневно контролировать качество растворов и реактивов: цвет, прозрач­
  ность и кристаллизация;

• на всех флаконах растворов и реактивов должны быть проставлены даты при­
  готовления;

• контролировать количество запасов реактивов на складе (должен быть 6 ме­
  сячный запас);

• контролировать оборот запасов на складе (первыми использовать те реактивы
  и красители, срок годности которых подходит к концу).

3.7.1.3 Контроль качества центровки светового источника бинокулярного микроскопа.

Оборудование должно регулярно (каждые 6 месяцев) контролироваться для гаран­тии точности и правильности его регулировки специалистом по медоборудованию.

3.7.2 Внешний контроль качества

Вешняя оценка качества (ВОК) по стандартам ВОЗ относится к целевой ретрос­пективной системе сравнения результатов из различных лабораторий посредством программ, организуемых внешними агентствами, такой как референс-лаборатория. Главная цель ВОК - достигнуть сопоставимости результатов различных лаборато­рий, в соответствии со стандартами. Выявленные недостатки позволят направить усилия на их устранение и улучшить качество.

Существуют три метода ВОК, которые используются для оценки работы лабораторий:

---

1. переконтроль мазков из периферийных лабораторий вышестоящей лабора­
   торией

1. панельное тестирование

2. мониторинговые визиты

3.7.3 Улучшение качества

Процесс, посредством которого различные аспекты работы лаборатории подверга­ются постоянному анализу для улучшения достоверности, эффективности и ис­пользования лабораторных данных. Ключевым компонентом этого процесса явля­ется сбор данных и их анализ, а также творческое решение возникающих проблем.

3.8 Культуральные методы выделения МВТ

Вопросы культурального исследования описаны в Методических рекомендациях НЦПТ МЗ РК "Культуральные методы выявления микобактерий туберкулеза и определения лекарственной чувствительности к противотуберкулезным препаратам 1-й линии", 2004г.

Культуральное или бактериологическое исследование (посев) применяется для под­тверждения диагноза "туберкулез" в случае отрицательного результата микроскопии мазка мокроты и внелегочного туберкулеза, а также для определения лекарствен­ной чувствительности МБТ.

31

---

Смотрите также файлы

• ТУБЕРКУЛ ЕЗ.doc

• РУКОВОДСТВО ПО ВНУТРЕННИМ БОЛЕЗНЯМ.doc

• Положение-каз. пр.131.doc

• прил. 3 к пр.218 с прил.1-3 гос.doc

• приказная 218 гос.doc