Культуральный метод выделения МБТ следует использовать:

• у всех впервые выявленных больных до начала лечения для контроля над
  первичной лекарственной устойчивостью к противотуберкулезным препара­
  там

• у больных без конверсии положительного результата микроскопии по окон­
  чании интенсивной фазы (I и II категории)

• у больных с неблагоприятным исходом, прервавших лечение, и, возможно,
  выделяющих устойчивые штаммы

• для диагностики случаев легочного туберкулеза с отрицательным результа­
  том микроскопии и при сложных дифференциально-диагностических случаях

• для диагностики внелегочного туберкулеза

Результаты культурального исследования

Интенсивность роста обозначают по 4-х балльной системе:

Таблица 4 - Оценка результатов культурального исследования

---

Таблица 5 - Критерии устойчивости микобактерий туберкулёза к ПТП

ПТП 1ряда	Микобактерий, устойчивые при росте на среде, содержащей препарат в концентрации (в мкг/мл)
1. Изониазид 2. Рифампицин З.Этамбутол 4. Стрептомицин	1 2 3 4

Таблица 6 - Активность чистых лекарств

( мкг активной субстанции на мг веса продукта)

Лекарства	мкг активной субстанции на 1 мг
Изониазид	1.000 (100%)
Дигидрострептомицин сульфат	750-850 (75-85%)
Этамбутол гидрохлорид	890 (89%)
Рифампицин	1.000 (100%)

Активность лекарства варьирует от одной партии/серии лекарств к другой. Эти важ­ные сведения обычно приводятся на этикетках контейнеров лекарств, упаковках или их можно получить от компании-изготовителя.

3.8.1.2 Метод пропорций на плотных средах для определения чувствительности к основным ПТП

Метод пропорций широко используется в мире. Для выполнения этого метода ис­пользуется среда Левенштейна-Йенсена (Л-Й), и устойчивость тестируемых штам­мов определяется отношением числа колоний выросших на среде с лекарствами к числу колоний, выросших на среде без лекарств.

Этот показатель позволяет определить наличие устойчивых мутантов в общей попу­ляции жизнеспособных колониеобразующих единиц. Для получения подсчитывае­мого числа колоний, выросших на среде Л-Й, рекомендуется посев 2 разведений. Преимущество данного метода в том, что в исследовании используется стандарт­ный инокулят и можно подсчитать число колоний, выросших на Л-Й.

Приготовление питательной среды с лекарствами

Большую важность для получения точных результатов ТЛЧ представляет приготов­ление среды, содержащей лекарственный препарат. Ниже приведены критические концентрации лекарственных препаратов в среде Л-Й: Изониазид 0,2 мкг/мл Стрептомицин 4 мкг/мл Рифампицин 40 мкг/мл Этамбутол 2 мкг/мл

При приготовлении среды с препаратами необходимо учитывать активность препа­рата, которая может варьировать от одной партии/серии лекарств к другой и в зави­симости от его производителя. Эти сведения приводятся на этикетках контейнеров, упаковках или предоставляются компанией-изготовителем.

33

---

Изониазид:

Содержание активного вещества 1000 мкг/мл

1) Приготовление растворов лекарственных препаратов:

1. 20 мг изониазида растворить в 10 мл дистиллированной воды - полученный
   раствор имеет концентрацию 2000 мкг/мл

2. 1 мл приготовленного раствора (2000мкг/мл) растворить в 9 мл дистиллиро­
   ванной воды; полученный раствор имеет концентрацию 200 мкг/мл

3. 1 мл раствора (200 мкг/мл) растворить в 9 мл дистиллированной воды - полу­
   ченный рабочий раствор имеет концентрацию 20 мкг/мл

2. 2 мл рабочего раствора (20 мкг/мл) добавить к 200 мл среды Л-Й

3. Питательную среду с лекарственным препаратом разлить в пробирки по 6 мл

4. Свертывание среды проводится при 900 С в течение 50 мин.

Стрептомицин:

Содержание активного вещества 780 - 800 мкг/мг

Процедура приготовления среды с 4 мкг/мл (чистое вещество 780мкг/мг)

1. Приготовление раствора лекарственного препарата: 5,1 мг S растворить в 10 мл
   дистиллированной воды - полученный раствор имеет концентрацию 400 мкг/мл

2. 2 мл полученного раствора добавить к 200 мл среды Л-Й

3. Питательную среду с лекарственным препаратом разлить в пробирки по 6 мл

4. Свертывание среды проводится при 900 С в течение 50 мин

Рифампицин:

Содержание активного вещества 1,000 мкг/мл

1. Приготовление раствора лекарственного препарата: 40 мг R растворить в 10 мл
   пропиленгликоля, встряхивая на водяной бане при 700С - полученный раствор име­
   ет концентрацию 400 мкг/мл

2. 2 мл полученного раствора добавить к 200 мл среды Л-Й

3. Питательную среду с лекарственным препаратом разлить в пробирки по 6 мл

4. Свертывание среды проводится при 900 С в течение 50 мин

Этамбутол:

Содержание активного вещества 1,000 мкг/мл Приготовление раствора лекарственного препарата:

1. 20 мг Е растворить в 10 мл дистиллированной воды - полученный раствор имеет
   концентрацию 2000 мкг/мл

2. Добавить 1 мл полученного раствора (2000 мкг/мл) к 9 мл дистиллированной
   воды - полученный рабочий раствор имеет концентрацию 200 мкг/мл

3. 2 мл рабочего раствор добавить к 200 мл среды Л-Й

4. Питательную среду с лекарственным препаратом разлить в пробирки по 6 мл

5. Свертывание среды проводится при 900 С в течение 50 мин

Приготовление бактериальной суспензии

Выросшую культуру микобактерий снимают с питательной среды Л-Й с помощью металлической петли и помещают в пробирку с 5-6 стеклянными бусами. При ис­пользовании металлической петли в пробирку внести предварительно 2 капли сте­рильной дистиллированной воды. Пробирку с бактериальной массой гомогенизиру­ют в течение 1-2 минут на встряхивателе "Vortex", затем добавляют 7 мл дистилли­рованной воды и снова осторожно встряхивают до образования однородного ра­створа

Полученную суспензию оставляют на 1-3 минуты до осаждения крупных частиц. Затем гомогенную взвесь (верхнюю часть суспензии) собирают и переносят в сте-

34

---

• Лаборатории должны использовать методики утвержденные МЗ РК

• Детальное описание каждой методики, применяемой в лаборатории, должно
  храниться в доступном месте

• Все лабораторные журналы и картотеку следует хранить не менее 5 лет

3.9.1.2 Лабораторное оборудование:

• Оборудование должно использоваться в соответствии с требованиями и спе­
  цификациями производителя

• Руководство по эксплуатации оборудования следует держать в доступном месте

• В паспорта к оборудованию регулярно вносятся даты сервисного обслужива­
  ния

• Оборудование должно регулярно проверяться специалистом

3.9.1.2.1 Биологический шкаф безопасности:

• Место установки БШБ должно находиться вдали от входа в лабораторию и
  располагаться в стороне от проходов (движение воздуха от проходящих мимо
  людей может нарушать воздушный занавес). Этот занавес весьма хрупкий и
  открытые окна или оборудование, создающее движение воздуха (центрифуги)
  не следует располагать вблизи БШБ.

• Особое внимание следует уделять эксплуатации и своевременной замене филь­
  тров.

• Работа в БШБ требует ежедневной проверки скорости воздушного потока
  (22,86 м/с для БШБ I класса и 22,86- 30,48 м/с для БШБ II класса) и показате­
  лей манометра давления воздуха, поступающего на фильтр. В случае мини­
  мального превышения отмеченного уровня необходимо заменить фильтр.

3.9.1.2.2 Центрифуги

Каждые 6 месяцев необходимо проверять щетки в электродвигателях.

3.9.1.2.3 Инкубатор

Регистрировать температуру в термостате ежедневно. Необходимо проверять разни­цу температур внутри термостата на различных уровнях.

3.9.1.2.4 Свертыватель

Ежедневно проверять температуру. После каждой партии сред тщательно обрабаты­вать свертыватель.

3.9.1.2.5 Водяная баня

Контролировать температуру до и во время использования. Ежемесячно произво­дить тщательную обработку и чистку.

3.9.1.2.6 Холодильник (2-8°С):

Ежедневно контролировать температуру. Ежемесячно проводить обработку, каж­дые 3 месяца удалять лед из морозильной камеры.

3.9.1.2.7 Морозильник

Ежедневно проверять температуру, чистить раз в 6 месяцев.

3.9.1.2.9 Стеклянная лабораторная посуда

Не использовать потускневшую и треснувшую посуду. Стерильную посуду хранить не более 3 недель.

3.9.2 Диагностический материал и направление на анализ:

36

---

■--.о

• Анализы выполняются только при наличии заполненной формы направле­
  ния на исследование. Не допускать принятия материала без соответствующих
  письменных инструкций

• Направления должны доставляться отдельно от контейнеров с материалом.
  Направления, загрязненные материалом, должны быть подвергнуты автокла-
  вированию

• Не принимать направления без указания информации на контейнерах. Не
  принимать контейнеры, на которых невозможно разобрать надпись

• Протекающие контейнеры с материалом немедленно автоклавировать и на­
  править запрос на повторный анализ

• Оценить качество доставленного материала, и отметить, если это слюна

• При выдаче результатов в направлении необходимо указать красной ручкой,
  что исследованный материал - слюна (не стоит доверять отрицательному ре­
  зультату).

• Отметить дату поступления материала в лабораторию, а также любые задерж­
  ки при выдаче результатов, особенно в случае отрицательных и посевов с
  проростом

3.9.3 Реагенты и красители

На всех флаконах с реагентами должны быть проставлены даты получения и даты открытия нового флакона. Любой реактив неудовлетворительного качества немед­ленно выбрасывается и в списке имеющихся реагентов делается соответствующая запись. Необходимо контролировать оборот запасов на складе (первыми использо­вать те реактивы и красители, срок годности которых подходит к концу). Необходи­мо регистрировать дату приготовления свежеприготовленных реактивов и красите­лей на флаконах в соответствующем журнале.

3.9.4 Гомогенизация и деконтаминация:

• Одновременно обрабатывать то количество анализов, которое можно загру­
  зить в центрифугу

• Ежемесячно подсчитывать процент проростов при посеве клинического мате­
  риала (приемлемый уровень 2-3%). Менее 2% проростов говорит о чрезмер­
  ной жесткой обработке (значительная часть микобактерий гибнет). Если ла­
  боратория получает материал с задержкой, процент проростов может быть
  более 5%. В случае постоянного уровня проростов выше 3 %, убедитесь, что
  процедура деконтаминации адекватна

• Ежемесячно определять процент пациентов, обследованных с целью диагнос­
  тики до начала лечения, у которых микроскопия дала положительный ре­
  зультат, а посев - отрицательный (доля таких случаев не должна превышать
  3%)

3.9.4.1 Среды:

• Использовать свежие (не более 7 дней) яйца для приготовления среды Левен-
  штейна-Йенсена

• Контролировать температуру и время свертывания сред. Удалять пробирки,
  где изменился цвет среды или образовались пузырьки

• Проверять все среды на стерильность, помещая их в термостат при 37°С на 24
  часа

• Приготовленные среды хранить в холодильнике (без освещения) 4 недели,
  после чего неиспользованные среды выбрасываются

3.9.4.2 Тест на проверку ростовых качеств сред

37

---

Смотрите также файлы

• ТУБЕРКУЛ ЕЗ.doc

• РУКОВОДСТВО ПО ВНУТРЕННИМ БОЛЕЗНЯМ.doc

• Положение-каз. пр.131.doc

• прил. 3 к пр.218 с прил.1-3 гос.doc

• приказная 218 гос.doc