ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 08.09.2021
Просмотров: 6513
Скачиваний: 255
Экспресс-методы диагностики. Биохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. Метод позволяет обнаружить наличие видоспецифических нуклеиновых кислот микобактерий непосредственно в клиническом образце после обогащения. Исследование занимает около 4 ч. Существующие коммерческие тест-системы позволяют выявить в образце (мокроте, плевральном экссудате, пунктате лимфатических узлов и др.) присутствие МТС — бактерий комплекса М.tuberculosis (М.tuberculosis, M.bovis/BCG, M.africanum) и надежно дифференцировать их от нетуберкулезных микобактерий. Последнее имеет принципиальное значение для раннего эмпирического назначения этиотропной терапии, поскольку нетуберкулезные микобактерии, включая МЛ С, существенно отличаются от МТС по чувствительности к антимикробным препаратам.
Чувствительность метода приближается к 100 % только для образцов, в которых микобактерии были обнаружены бакте-риоскопическим методом, в других случаях она не превышает 90 %. Нельзя также исключить вероятность ложноположитель-ных результатов. Специфичность ПЦР по различным оценкам составляет 70—100 %. Таким образом, по чувствительности метод ПЦР сопоставим с бактериологическим исследованием, однако позволяет получить результат в течение 24 ч от момента получения материала.
Результаты ПЦР-диагностики рекомендуется интерпретировать в зависимости от данных бактериоскопического исследования. Получение положительного ответа бактериоскопичес-ким методом и ПЦР позволяет диагностировать туберкулез и рекомендовать немедленное назначение противотуберкулезных препаратов по классической схеме. Отрицательный результат ПЦР при наличии кислотоустойчивых микобактерии в мазках позволяет исключить присутствие МТС и рекомендовать назначение антимикробных препаратов, активных в отношении нетуберкулезных микобактерии. В других ситуациях рекомендуется ожидать результатов бактериологического исследования.
Серодиагностика. Антитела к антигенам возбудителя в крови пациентов можно обнаружить с помощью РСК, РИГА и других серологических реакций. Необходимо иметь в виду, что положительные результаты отмечаются не только при активном туберкулезном процессе в организме, но также при инфицировании М.tuberculosis и вакцинации, поэтому существенного диагностического значения не имеют.
Кожно-аллергическая проба. Ставится с туберкулином — очищенной белковой фракцией, полученной из фильтрата бульонной культуры М.tuberculosis. Используется для оценки течения туберкулезного процесса, определения эффективности вакцинации и отбора контингентов для ревакцинации против туберкулеза. Туберкулин вводят внутрикожно в строго определенной дозировке (реакция Манту). Результаты (появление гиперемии и образование папулы в положительном случае) учитывают через 24—48 ч (см. рис. 10.4.1).
• Микробиологическая диагностика проказы
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: соскоб слизистой оболочки носа, кожные лепрозные узлы, пунктат лимфатических узлов, мокрота и др.
243
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование. Является основным методом лабораторной диагностики проказы, так как M.leprae на питательных средах не культивируется. В мазках, приготовленных из материала и окрашенных по методу Циля—Нильсена, микобактерии располагаются скоплениями в виде пачек сигар или наподобие шаров.
Кожно-аллергическая проба (реакция Мицуды) ставится с лепромином. Учитывают реакцию через 24—48 ч по образованию инфильтрата на месте введения. Аллергическая реакция диагностического значения не имеет и применяется для характеристики клинического течения болезни.
• Микробиологическая диагностика актиномикоза
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты ткани и пунктаты из глубоких очагов поражения, гнойное отделяемое^ экссудат, мокрота, промывные воды бронхов, моча.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование. Подозрительные плотные комочки из патологического материала переносят на предметные стекла в каплю 10—20 % раствора гидрокарбоната натрия, слегка подогревают и готовят препарат "раздавленная" капля, который исследуют под микроскопом с объективами 8х и 40х. В положительном случае в препарате обнаруживают актиномицеты в виде друз — характерных зернистых образований с плотным гиалиновым центром, окруженным лучистыми нитевидными клетками. Наряду с друзами встречаются отдельные грамположительные неравномерно окрашивающиеся ветвистые бактерии (см. рис. 2.3.1). Друзы также могут быть обнаружены в гистологических срезах биоптатов органов, окрашенных стандартными (гематоксилин-эозин) или специальными (окраска Брауна—Брена и др.) методами.
Бактериологическое исследование. Материал засевают на несколько питательных сред (тиогликолевую среду, кровяной агар, сердечно-мозговой агар, агар Сабуро и др.). Посевы инкубируют в анаэробных и аэробных условиях с добавлением 5 % СО2. Через 18—24 ч на плотных питательных средах образуются микроколонии, а через 1—2 нед — зрелые колонии. Характерным признаком является "паукообразная" структура микроколонии с многочисленными ветвящимися нитями по периферии. Зрелые колонии могут быть плоскими, морщинистыми, бугристыми или пленчатыми. Характер колонии и морфология клеток во многих случаях позволяет отнести исследуемую культуру к роду Actinomyces. Окончательная идентификация культуры до вида проводится на основании биохимических и антигенных свойств. Для идентификации используют также методы ГЖХ.
244
Экспресс-методы диагностики. Иммунохимические исследования. Метод ИФ: для обнаружения возбудителя в патологическом материале фиксированные мазки обрабатывают специфическими флюоресцирующими антителами к антигенам актиномицетов. Свечение бактерий в образце свидетельствует о положительном результате.
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз. Метаболиты возбудителя могут быть обнаружены в материале методом ГЖХ.
Серодиагностика. Ставится РСК с сывороткой крови больного и антигеном, представляющим собой поливалентный ак-тинолизат. Положительная реакция наблюдается у 80 % больных людей.
Кожно-аллергическая проба. Ставится с экстрактом из актиномицетов.
• Диагностические, профилактические и лечебные препараты
Туберкулин сухой очищенный (PPD). Получен из фильтрата бульонной культуры микобактерий путем добавления химических веществ, осаждающих белок, с последующей очисткой и лиофилизацией. Применяют для постановки кожно-аллерги-ческой пробы.
Вакцина BCG. Живая лиофильно высушенная культура ави-рулентного штамма M.bovis BCG, полученного французскими учеными Кальметтом и Гереном. Применяется внутрикожно для активной специфической профилактики туберкулеза.
Лепромин. Гомогенизированная взвесь лепрозного узелка, инактивированного нагреванием. Применяют для постановки кожно-аллергической пробы при лепре.
Актинолизат. Фильтрат бульонной культуры спонтанно ли-зированных штаммов актиномицетов. Применяют для специфической иммунотерапии и в качестве антигена для постановки РСК.
Актиномицетная поливалентная убитая вакцина. Готовится из спороносных штаммов актиномицетов. Применяют с лечебной целью.
Антибиотики. Для лечения туберкулеза: стрептомицин, ПАСК, производные ГИНК (тубазид, фтивазид, метазид и др.), этионамид, этамбутол, пиразинамид, рифампицин, цик-лосерин, канамицин, фторхинолоны и др. Обычно используют комбинации препаратов (не менее трех препаратов различных групп) с учетом чувствительности М.tuberculosis и клинической характеристики заболевания.
245
|
Микроорганизмы Заболевание (или синдром) Treponema pallidium Сифилис Neisseria gonorrhoeae Гонорея, бленнорея Haemophilus ducreyi Мягкий шанкр Chlamydia trachomatis серовары L1, Венерическая лимфогранулема L2,L3 Chlamydia trachomatis серовары D, Урогенитальный хламидиоз Е, F, G, И, I, J, К Calymmatobacterium granulomatis Паховая гранулема Mycoplasma hominis Урогенитальный микоплазмоз Ureaplasma urealyticum Уреаплазмоз Gardnerella vaginalis Гарднереллез (вагиноз, вагинит) Mobiluncus spp. Бактериальный (анаэробный) вагиноз |
ражением других органов возможен для вирусов иммунодефицита человека, гепатита В, цитомегаловирусной инфекции. Микробиологическая диагностика урогенитальных инфекций, вызванных простейшими, грибами и вирусами, излагается в соответствующих главах Руководства.
Тема 15.1. ВОЗБУДИТЕЛИ СИФИЛИСА И МЯГКОГО ШАНКРА
План
Программа
Биологические свойства возбудителей сифилиса и мягкого шанкра, их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.
Микробиологическая диагностика.
Диагностические, профилактические и лечебные препараты.
а Демонстрация
Treponema pallidum — мазок из отделяемого твердого шанкра, окраска T.pallidum методом серебрения (или микрофотография в темном поле).
Haemophilus ducreyi — мазок из отделяемого мягкого шанкра, окраска по методу Грама и метиленовым синим.
Диагностические и лечебные препараты.
Задание студентам
Указать материал для исследования.
Зарисовать демонстрируемые препараты возбудителей сифилиса и мягкого шанкра.
Серодиагностика сифилиса:
учесть результаты реакции Вассермана. Сделать заключение.
учесть результаты реакции микропреципитации.
Сделать заключение.
оценить результаты реакции иммобилизации трепонем (РИТ). Сделать заключение.
4. Дать краткую характеристику диагностическим и лечебным препаратам.
Методические указания
• Микробиологическая диагностика сифилиса
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое шанкра (I период заболевания); аспират из высыпных элементов, пунк-тат регионарных лимфатических узлов (II период); кровь (II, III, IV период); спинномозговая жидкость (IV период заболевания).
247
