следуемой инактивированной сывороткой крови или плаз­мой. В лунку на пластине из плексигласа (или на обычное стекло) наносят 3 капли сыворотки и добавляют 1 каплю кардиолипинового антигена. Смесь тщательно перемешивают и учитывают результаты. Положительная реакция характеризу­ется образованием и выпадением хлопьев разной величины; при отрицательном результате наблюдается равномерная лег­кая опалесценция. Положительная реакция микропреципита­ции позволяет поставить предварительный диагноз и направить пациента на дальнейшее обследование.

Реакцию Вассермана ставят одновременно с двумя антигенами: 1) специфическим, содержащим антиген возбуди­теля — разрушенные ультразвуком трепонемы; 2) неспецифи­ческим — кардиолипиновым. Исследуемую сыворотку разводят в соотношении 1:5 и ставят РСК по общепринятой методике. При положительной реакции наблюдается задержка гемоли­за, при отрицательной — происходит гемолиз эритроцитов, интенсивность реакции оценивается соответственно от (++++) До (-).

Первый период сифилиса является серонегативным и харак­теризуется отрицательной реакцией Вассермана. У 50 % боль­ных реакция становится положительной не ранее чем через 2—3 нед после появления твердого шанкра. Во II и III периоде сифилиса частота положительных реакций достигает 75—90 %. После успешно проведенного курса лечения реакция Вассер­мана становится отрицательной.

Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса мож­но ставить реакцию Вассермана, используя спинномозговую жидкость, с теми же антигенами, что и в реакции с сывороткой больного.

РИФ —реакция непрямой ИФ—является специфи­ческой при диагностике сифилиса. В качестве антигена ис­пользуют взвесь тканевых трепонем. Разработаны разные ме­тодики постановки реакции; обычно используют модифика­цию РИФ-200. Сыворотку больного инактивируют так же, как для реакции Вассермана, и разводят в соотношении 1:200. На предметные стекла наносят каплю антигена, высушивают и фиксируют 5 мин в ацетоне. Затем на препарат наносят сыво­ротку больного, через 30 мин промывают и высушивают. Сле­дующим этапом является обработка препарата флюоресцирую­щей сывороткой против иммуноглобулинов человека. Изучают препарат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая степень свечения трепонем.

Реакция иммобилизации трепонем также являет­ся специфической. Принцип реакции заключается в угнетении движения трепонем (иммобилизация) антителами сыворотки крови пациента в присутствии комплемента. Живую культуру

250

---

трепонем получают при культивировании в яичке кролика. Яичко зараженного животного измельчают в специальной сре­де, в которой трепонемы сохраняют подвижность. Ставят ре­акцию следующим образом: взвесь тканевых (подвижных) тре­понем смешивают в пробирке с исследуемой сывороткой и добавляют свежий комплемент. В одну контрольную пробирку вместо исследуемой сыворотки добавляют сыворотку здорового человека, в другую — вместо свежего комплемента добавляют инактивированный. После инкубации при 35 °С в анаэробных условиях (анаэростат) из всех пробирок готовят препарат "раз­давленная" капля и в темном поле определяют количество подвижных и неподвижных трепонем. Процент специфически иммобилизированных трепонем определяют по формуле:

Т -Т

Х= \ °хЮО, Ч

где Tfc — число подвижных трепонем в контроле (с инактиви-рованным комплементом), Т₀ -— число подвижных трепонем в опыте (с активным комплементом). Результат реакции считают положительным, если процент иммобилизации выше 50, сла­боположительным — от 31 до 50, сомнительным — от 21 до 30 и отрицательным — ниже 20. Для обнаружения специфических антител к T.pallidum используют и другие серологические ре­акции, в частности РИГА.

Необходимо отметить, что в широкой медицинской прак­тике при обследовании больных и здоровых лиц обычно ис­пользуют реакцию Вассермана и микропреципитации; РИТ, РИФ и другие специфические реакции применяют для уточ­нения диагноза и проводят в специализированных лаборато­риях.

• Микробиологическая диагностика мягкого шанкра

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из язвы (мягкого шанкра).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Проводят путем микро­скопии мазков, окрашенных по методу Грама и метиленовым синим. Наличие в мазках грамотрицательных бактерий, распо­лагающихся в виде длинных цепочек, позволяет подозревать наличие возбудителя — H.ducreyi.

Бактериологическое исследование. Проводят путем выделе­ния чистой культуры возбудителя. Материал засевают на кро­вяной агар или другие среды, содержащие дефибринированную кровь. На этих средах H.ducreyi через 48—72 ч образует мелкие круглые колонии, окруженные зоной гемолиза. Идентифика­цию выделенной культуры проводят по ферментации Сахаров

251

и по способности агглютинироваться сывороткой этого же больного.

Кожно-аллергическая проба. Ставят с антигеном из H.ducreyi для подтверждения диагноза.

• Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты

Антигены для реакции Вассермана:

специфический антиген из тканевых трепонем, разрушенных ультразвуком;

неспецифический кардиолипиновый антиген — высокоочищенный экстракт бычьего сердца, имеющий постоянный химический состав липидов, смешанных в определенной про­
порции с лецитином и холестерином.

Антигены разводят согласно инструкции и используют в рабочих-дозах, указанных на этикетках. Кардиолипиновый ан­тиген используют также и в реакции микропреципитации.

---

Антибиотики: пенициллин, цефотаксим, тетрациклины, эритромицин.

Тема 15.2. ВОЗБУДИТЕЛИ ГОНОРЕИ, УРОГЕНИТАЛЬНОГО ХЛАМИДИОЗА, МИКОПЛАЗМОЗА И УРЕАПЛАЗМОЗА

План

Программа

Биологические свойства возбудителей гонореи, урогенитального хламидиоза и уреаплазмоза; их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемио­логия вызываемых заболеваний.

Лабораторная диагностика.

Диагностические и лечебные препараты.

Демонстрация

Neisseria gonorrhoeae — в мазках из чистой культуры и уретрального гноя, окраска по методу Грама.

Chlamydia trachomatis — в мазках со слизистой оболоч­ки мочеиспускательного канала (иммунофлюоресцентный метод или окраска по методу Романовского-Гимзы).

"Пестрый" ряд для определения биохимических свойств N. gonorrhoeae.

Колонии Mycoplasma hominis на питательной среде (или фотографии этих колоний).

ИФА для серодиагностики урогенитальных инфекций, вызванных хламидиями и микоплазмами.

Диагностические и лечебные препараты.

252

а Задание студентам

Указать материал для исследования.

Микроскопировать и зарисовать мазок из уретрально­го гноя, окрашенный по методу Грама, сделать заклю­чение.

Зарисовать демонстрируемый мазок со слизистой обо­лочки мочеиспускательного канала. Сделать заключе­ние.

Оценить результаты ИФА при урогенитальных инфек­циях, вызванных хламидиями и микоплазмами. Сде­лать заключение.

Дать краткую характеристику демонстрируемым диа­гностическим и лечебным препаратам.

а Методические указания

• Микробиологическая диагностика гонореи

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гнойное отделяемое, мазки со слизистых оболочек мочеполовых органов и прямой кишки, суставной и перитонеальный экссудат, отделяемое конъюнктивы глаза при бленнорее.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Материал для исследова­ния должен быть максимально быстро доставлен в лаборато­рию во избежание аутолиза гонококков, которые очень чувст­вительны к изменению температуры и охлаждению. Из мате­риала готовят мазки, окрашивают их по методу Грама, а также метиленовым синим (схема 15.2.1). При положительном ре­зультате в мазках обнаруживают грамотрицательные диплокок­ки бобовидной формы, находящиеся внутри лейкоцитов (рис. 15.2.1; на вклейке). Положительный бактериоскопический диа­гноз ставится в основном при острой форме гонореи до при­менения антибиотиков. При хронической гонорее бактерио-скопическое исследование часто дает отрицательный результат, так как в этих случаях возбудители могут иметь атипичную форму в виде шаров или, наоборот, очень мелких образований. Кроме того, в препарате обнаруживают разнообразную посто­роннюю микрофлору, лейкоциты, эпителиальные и другие кле­точные элементы.

Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными питательными средами — КДС, сывороточным агаром и др. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением казеина, дрожжевого экстракта и сыворот­ки крови. Посевы инкубируют при 37 "С в атмосфере с повы­шенным содержанием СО₂ (не менее 3 %) в течение 24—72 ч. Гонококки образуют круглые прозрачные колонии, напоми­нающие капли росы в отличие от более мутных колоний стреп-

---

253

---

тококков или пигментированных колоний стафилококков, ко­торые также могут расти на этих средах. Подозрительные ко­лонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по саха-ролитическим свойствам на средах "пестрого" ряда (полужид­кий агар с сывороткой и углеводом) или с помощью микро­тест-систем. Гонококки ферментируют только глюкозу с обра­зованием кислоты.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Антигены возбудителя могут быть обнаружены в исследуемом материале с помощью чувствительных иммунологических методов (иммуноблотинг и ДР-).

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз. ДНК возбуди­теля в материале может быть обнаружена также методом гиб­ридизации со специфическим ДНК-зондом.

• Микробиологическая диагностика урогенитального хлами-диоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мазки со слизистой оболочки мочеиспускательного канала, выделения из шейки матки, соскобы, отпечатки и др.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Препараты, содержащие клет­ки, окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В положи­тельном случае в клетках эпителия обнаруживают цитоплазма-тические включения — микроколонии возбудителя, которые могут содержать как ретикулярные (сетчатые) тельца, так и элементарные тельца. Внеклеточные элементарные тельца таким способом не выявляются. Микроскопия окрашенных препаратов имеет ориентировочное значение.

Бактериологическое исследование. Чистую культуру хлами-дий из исследуемого материала выделяют путем заражения культур клеток McCoy, HeLa и других линий. После инкубации в течение 48 ч определяют включения возбудителя в клетках иммунофлюоресцентным методом. Выделение хламидий в культуре клеток имеет важное диагностическое значение, по­зволяет выявить жизнеспособные хламидий и определить их чувствительность к антимикробным препаратам.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Иммуно­химические исследования. Метод ИФ позволяет обна-ружить антигены хламидий в зараженных клетках. Препараты 'из исследуемого материала обрабатывают мечеными МКАТ. В люминесцентном микроскопе хорошо видны ярко-зеленые скопления элементарных и ретикулярных телец (внутриклеточ­ные микроколонии), контрастно выделяющиеся на краснова­то-коричневом фоне эпителиальных клеток.

Антигены возбудителя в исследуемом материале могут быть выявлены с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА и др.).

---

Смотрите также файлы

• ГИПЕРТЕНЗИЯ, Эклампсия.doc

• ДИВ.doc

• ВЗРП.doc

• Внутриутробная задержка развития плода.doc

• Антенатальный 20уход_24Nov[1].doc