ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 08.09.2021
Просмотров: 6503
Скачиваний: 255
характера роста на специальных средах, биохимических свойств (ферментация рамнозы, адонита) и других признаков.
Биопроба. Проводят для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Наиболее чувствительными лабораторными животными являются морские свинки. Материал вводят подкожно или внутрибрюшинно в том случае, если он не загрязнен другими бактериями. При контаминации посторонней микрофлорой материал втирают морской свинке в выбритый участок кожи в области живота. После гибели животных (на 3—7-й день в зависимости от способа введения материала) делают вскрытие, отмечают патологические изменения органов и проводят бактериологическое исследование по схеме 16.1.1.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Иммунофлюоресцентный метод позволяет обнаружить присутствие антигенов возбудителя как в патологическом материале, так и в объектах окружающей среды (вода, почва), а также в пищевых продуктах и эктопаразитах. С этой целью используют люминесцентную ви-доспецифическую противочумную сыворотку, люминесцентные противокапсульную и противосоматическую сыворотки. РИГА применяют для обнаружения антигенов возбудителя чумы в исследуемом материале с помощью стандартной противочумной сыворотки, антитела которой нагружены на эритроциты.
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
• Микробиологическая диагностика туляремии
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: гной из бубонов, пунктат лимфатических узлов, мокрота, кровь, патолого-ана-томический материал.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование (схема 16.1.2). Из исследуемого материала готовят мазки, окрашивают по методу Грама и метиленовым синим. Для F.lularensis характерен выраженный полиморфизм. В чистой культуре они представляют собой очень мелкие (0,3—0,5 мкм) кокки (рис. 16.1.2; на вклейке). В мазках из органов преобладают палочковидные формы. Спор не образуют, грамотрицательны, иногда выражена биполярная окраска. В биоптатах тканей и мазках F.tularensis могут располагаться как вне, так и внутри клеток. Бактерии слабо окрашиваются по методу Грама и плохо выявляются в материале
при обычных методах микроскопии. Для обнаружения используют преимущественно метод иммунофлюоресценции (см. ниже).
Бактериологическое исследование. Применяют для выделения чистой культуры F.tularensis. Бактериологическую диагностику осуществляют в специальных лабораториях. Выделение возбудителя проводят на свернутой яично-желточной среде, глюкозоцистиновом кровяном агаре и других богатых питательных средах сложного состава. Для подавления роста сопутствующей микрофлоры в среды добавляют пенициллин. Вирулентные штаммы образуют S-формы колоний — мелкие, гладкие, беловатого цвета с голубоватым оттенком. Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бактериальных клеток, характеру роста, биохимическим, антигенным свойствам и с помощью молекулярно-биологических методов. Биохимические свойства F.tularensis выявляют на специальной плотной среде с ограниченным содержанием белка. Бактерии содержат оболочечный антиген, с которым связаны их вирулентные и иммуногенные свойства, и О-соматический антиген. По антигенным свойствам близки к бруцеллам.
Биопроба. Наиболее чувствительными животными являются белые мыши и морские свинки, которые погибают при подкожном введении единичных бактерий.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Метод ИФ позволяет обнаружить присутствие антигенов бактерий в патологическом материале. Используют люминесцентную противотуляремийную сыворотку. В положительном случае в препарате видны светящиеся микроорганизмы. Антигены возбудителя в материале от больного могут быть обнаружены с помощью ИФА.
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика. Ставят реакцию агглютинации с туляре-мийным диагностикумом. Относительно позднее появление антител-агглютининов в крови (на 2-й неделе болезни) затрудняет применение этой реакции для ранней диагностики, однако их длительное сохранение делает возможной ретроспективную диагностику. Диагностический титр реакции 1:100. Обязательно прослеживается нарастание титра агглютинации (в парных сыворотках). Более чувствительным методом серодиагностики туляремии является РНГА, которая бывает положительной в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Титры антител в сыворотке в разгар заболевания достигают 1:1280— 1:2560 и выше. Используют также ИФА.
Для ускоренной диагностики применяют кровяно-капельную реакцию: кровь из пальца больного наносят на обезжиренное предметное стекло, добавляют каплю дистиллированной воды (для лизиса эритроцитов), вносят каплю диагности-кума и смешивают стеклянной палочкой. При наличии в крови агглютининов в диагностическом титре (1:100 и выше) в капле немедленно наступает агглютинация диагностикума; при титрах ниже диагностических агглютинация происходит через 2—3 мин.
Кожно-аллергическая проба. Для диагностики применяют внутрикожную и накожную пробы со специфическим аллергеном — тулярином. Пробы высокочувствительны и дают положительные результаты у больных начиная с 3—5-го дня болезни. Положительные результаты регистрируются также у переболевших и вакцинированных, поэтому оценка реакции должна проводиться с осторожностью.
• Микробиологическая диагностика бруцеллеза МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериологическое исследование (схема 16.1.3). Для получения гемокультуры 5—10 мл крови, взятой из локтевой вены больного, засевают в два флакона с 50—100 мл печеночного бульона. Один из них (для выделения культуры B.melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выделения первичной культуры B.abortus) — в атмосфере с 10 % СО2. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно, поэтому посевы выдерживают в термостате не менее месяца. В то же время рост лабораторных культур наблюдается через 1—2 сут. На агаре бруцеллы образуют бесцветные с перламутровым блеском колонии, в бульоне — помутнение и слизистый бсадок. В мазках, окрашенных по методу Грама, обнаруживаются мелкие (от 0,3—0,5 до 1,5 мкм) грамотрицательные кок-ковидные или более удлиненные формы (рис. 16.1.3; на вклейке). Они неподвижны, спор не образуют.
Для быстрой идентификации бруцелл ставят РА со специфическими агглютинирующими сыворотками на стекле и определяют чувствительность к специфическому фагу. Все виды бруцелл не ферментируют углеводы. Их дифференцируют по образованию ^S, чувствительности к СОз, способности окрашиваться анилиновыми красителями (основным фуксином и тионином) и другим признакам. Используют также молекуляр-но-биологические методы.
Биопроба. Применяют для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой или содержащего небольшое количество бруцелл. Исследуемый материал вводят морским свинкам или белым мышам подкожно в паховую область. Мышей вскрывают через 20 дней после за-
|
Ингредиент Количество материала, мл квадрат 1 квадрат 2 квадрат 3 квадрат 4 квадрат 5 контроль контроль сыво- диагнос-ротки тикума Сыворотка 0,04 0,02 0,01 0,02 — Диагностику™ 0,03 0,03 0,03 — 0,03 Изотонический — — — 0,03 0,03 раствор хлорида натрия |
заболевания процент положительных серологических реакций (РА, РИГА и РСК) начинает снижаться и большее диагностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса, поэтому комплексный серо-аллергический метод является наиболее надежным в диагностике бруцеллеза.
Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне). На ладонную поверхность предплечья внутрикожно вводят 0,1 мл бруцелли-на. При наличии ГЗТ уже через 6—8 ч могут появиться гиперемия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 ч (см. рис. 10.4.1). Реакция обладает высокой чувствительностью и появляется не только у больных и переболевших, но и у вакцинированных людей, в связи с чем ее диагностическая оценка должна производиться с осторожностью.
• Микробиологическая диагностика сибирской язвы
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: экссудат из очага поражения (сибиреязвенного карбункула), мокрота, фекалии, кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование (схема 16.1.4). Изучение окрашенных по методу Грама мазков из патологического материала (экссудат, мокрота) позволяет обнаружить возбудителя, представляющего собой грамположительную крупную (1—2 х 6—10 мкм) неподвижную стрептобациллу. В организме больных и на белковой питательной среде микроорганизмы образуют капсулу (рис. 16.1.4; на вклейке), в неблагоприятных условиях (почве) — споры (см. рис. 2.2).
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на чашки с питательным и кровяным агаром, а также в пробирку с питательным бульоном. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18—20 ч. В бульоне культура B.anthracis растет в виде хлопьевидного осадка; на агаре вирулентные штаммы образуют колонии R-формы, имеющие под малым увеличением микроскопа вид львиной гривы или головы медузы. Авиру-лентные или слабовирулентные бактерии образуют S-формы колоний.
Для идентификации возбудителя изучают биохимические свойства и ряд других признаков (гемолитическую активность, способность к образованию L-форм и др.). B.anthracis обладает сахаролитическими свойствами, медленно разжижает желатин (в виде елочки верхушкой вниз), лишен гемолитической активности. Под действием пенициллина образует сфероплас-ты, имеющие вид жемчужин. Это явление используется для дифференциации B.anthracis от непатогенных бацилл. Применяют также молекулярно-биологические методы идентификации.
Биопроба. Исследуемый материал вводят подкожно белым мышам, морским свинкам или кроликам. Павших животных вскрывают, готовят мазки из крови и внутренних органов, делают посевы для выделения чистой культуры возбудителя. Капсульные формы B.anthracis в экссудате, полученном через 5—18 ч после заражения животного, можно обнаружить методом иммунофлюоресценции (см. ниже).
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Мазки из экссудата обрабатывают противокапсульной сибиреязвенной антисывороткой, а затем флюоресцирующей антикроличьей сывороткой, меченной родамином. В препаратах, содержащих капсульные бациллы, наблюдается желто-зеленое свечение возбудителя.
Антигены B.anthracis (секретируемые белки — "протектив-ный антиген" и токсины) в исследуемом материале из очага инфекции могут быть обнаружены с помощью чувствительных серологических реакций (ИФА и др.).
Реакцию термокольцепреципитации Асколи для исследования трупного материала ставят при необходимости диагностировать сибирскую язву у павших животных или у людей, умерших от неизвестной болезни, напоминающей висцеральную форму сибирской язвы, а также для определения зараженности сырья (кожа, мех, шерсть). Образцы исследуемого материала измельчают и кипятят в пробирке с изотоническим раствором хлорида натрия в течение 5—10 мин, после чего фильтруют до полной прозрачности. Преципитирующую сибиреязвенную сыворотку получают путем гипериммунизации лошадей убитой культурой B.anthracis. Испытуемый термоэкстракт осторожно наслаивают на поверхность сыворотки в преципитационной пробирке. В положительном случае через 1—2 мин в месте соприкосновения появляется белое кольцо преципитации, что свидетельствует о присутствии в материале антигенов возбудителя. Контрольный термоэкстракт готовят из того же материала, взятого от здорового животного (см. табл. 10.1.1).
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Кожно-аллергическая проба. Ставится на внутренней поверхности предплечья — внутрикожно вводят 0,1 мл антраксина. При положительной реакции через 24 ч появляются гиперемия и инфильтрат. Положительная реакция регистрируется у 90 % больных сибирской язвой, начиная со 2-й недели заболевания, и сохраняется у переболевших в течение всей жизни, в связи с чем ее диагностическая оценка должна производиться с осторожностью.
