ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 30.10.2019
Просмотров: 3990
Скачиваний: 33
гемолизирующие, дающие полное просветление среды) или у -
(дающие
визуально
необнаруживаемый
гемолиз)
виды
стрептококков. Основные возбудители болезней человека - |3-
гемолитические виды.
Выявление в мазке из уретрального гноя гонококка или в
мазке из осадка ликвора - менингококка
При выявлении в мазке из уретрального гноя гонококка или
в мазке из осадка ликвора - менингококка обнаруживают по
лиморфноядерные лейкоциты с незавершенным фагоцитозом: в
цитоплазме
лейкоцитов
содержатся
гонококки
либо
менингококки в виде мелких попарно расположенных кокков.
Занятие № 20
КИШЕЧНАЯ ПАЛОЧКА. ШИГЕЛЛЫ. САЛЬМОНЕЛЛЫ
Микробиологическая диагностика колиэнтеритов,
бактериальной дизентерии, сальмонеллезов
Практические навыки, приобретаемые на занятии
1. Приготовление фиксированного мазка (повторение навыка для
его закрепления).
2. Окраска фиксированного мазка по Граму (повторение навыка
для его закрепления).
3.Микроскопирование
окрашенного
мазка
с
помощью
иммерсионной микроскопии (повторение навыка для его
закрепления).
4. Идентификация по мазку палочковидной бактерии (повторение
навыка для его закрепления).
5 .Проведение и учёт пластинчатой реакции агглютинации на
стекле (повторение навыка для его закрепления).
6. Проведение и учёт объёмной реакции агглютинации для
определения титра антител (повторение навыка для его
закрепления).
7. Засев патологического материала на пластинчатый МПА
петлей с целью получения отдельных колоний (повторение
навыка для его закрепления).
8. Пересев части колонии на скошенный МПА (повторение
68
iiiim.iKa для его закрепления).
'>
Дп(|)ференциация лактозопозитивных и лактозонегативных
HojroHHH на дифференциально-диагностических средах (Эндо,
Пепина, Плоскирева).
I п 11ммунопрепараты (повторение навыка для его закрепления).
При
идентификации по мазку
большинство эн т^б акгери й
представлены короткими грамотрицательными палочками с
|.||
1
руглёнными концами, без определенного расположения в
M.
1 1
ке.
М ходе проведения культурального метода патологический
M.iu-риал используют для
получения чистой культуры —
шилнрованного роста (отдельных колоний),
при этом для
111.14 пления
лактозопозитивных
энтеробактерий
используют
|||(|и|)сренциально-диагностические
среды
(Эндо,
Левина,
Иноскирева).
Дапее
осуществляют
накопление
чистой
•>\'||.|уры
на скошенном МПА (либо средах Рессела, Клиглера
и III Олькеницкого), а также ставятся
реакции пластинчатой
•н I ликгинации с чистой культурой возбудителя: при диагностике
ч
111
-рихозов, шигеллёзов и сальманеллёзов — пластинчатая РА с
иининалентными сыворотками (например, к К и О антигенам), в
| ч|прых определяют принадлежность культуры к ОК-группе, а
чи-м определяют принадлежность к О-группе в РА с прогретой
и|
11
|
100°С
культурой
(для
разрушения
К-Аг)
и
I II
1
Ч)()прованными О-антисыворотками.
Для
серологической диагностики
брюшного
тифа и
||(|м|||(1юв наиболее часто применяют
объёмную реакцию
•иииогинации
для определения титра антител в сывЪротке
• 'чш.цого или бактерионосителя, разработанную французским
I'li.iMOM Ж. Видалем,
реакцию Видаля,
в которой в качестве
ииии-па используются монодиагностикумы, приготовленные с
и.
1 1 0
)
11
.чонанием антигенов конкретного возбудителя.
11ри
проведении
эпидемиологического
обследования
И
111
|)«
1
К()
применяется
метод фаготипирования
выделенных
"И II.IX культур возбудителя брюшного тифа. Поскольку фаготип
чи.ии-ия одним из наиболее постоянных признаков патогенных
ми poopi aHHSMQB, совпадение фаготипов культур возбудителя,
■S'.I
1
. пенного в очаге инфекции у разных лиц или из разных
69
на
их
объектов
окружающей
среды,
указывает
эпидемиологическую связь и позволяет;
> установить или исключить предполагаемый источник инфекции,
проследить эпидемиологические связи,
> отличить местные случаи заболевания от «привозных»,
> отличить спорадические случаи заболеваний от эпидемических.
Например, для фаготипирования S. typhi используют наборы
типовых брюшнотифозных бактериофагов - Vi-бактериофагов
применение которых позволяет протипировать до 90-100/о
штаммов возбудителя, находящегося в патогенной форме (т.е.
имеющих капсулу или Vi-антиген).
Дифференциация лактозопозитивны х и лактозонегативны х
колоний на диф ф еренциально-диагностических средах
(Эндо, Л евина, П лоскирева)
При росте энтеробактерий, способных метаболизировать
лактозу, на
среде Эндо
(исходный цвет среды бледно-розовый)
цвет среды вокруг колоний и сами колонии приобретают темно
бордовую
окраску.
На
среде
Л евина^
колонии
лактозоположительных
бактерий
имеют
синии
цвет
с
металлическим блеском, а цвет самой среды - красновато
фиолетовый.
Среда П лоскирева
имеет розовато-желтоватый
цвет, а колонии энтеробактерий, утилизирующих лактозу,
приобретают бруснично-красную окраску.
Лактозонегативные
энтеробактерии
(не
способные
утилизировать
лактозу)
на
всех
трех
дифференциально
диагностических средах образуют бесцветные колонии.
Занятие № 21
УСЛО ВН О -ПА ТО ГЕН Н Ы Е ЭН ТЕРО БАКТЕРИ И .
ПСЕВДОМ О НАДЫ . К А М П И Л О БАК ТЕРЫ . ГЕЛИ К О БАК ТЕР
М икробиологическая диагностика клебсиеллезов,
иерсениозов, протейных заболеваний, синегнойной
инфекции, кампило- и геликобактериоза
Практические навыки, приобретаемые на занятии
1. Засев скошенного агара по Щукевичу.
70
' Микроскопия мазка с использованием иммерсионной системы
(моторение навыка для его закрепления),
t 11 н о т ификация по мазку капсульных бактерий (повторение
iiiim.iKa для его закрепления).
I 11ммупопрепараты (повторение навыка для его закрепления).
11а плотных средах при точечном посеве (только в одном
t
1
|
1
оп) ограниченном участке на поверхности среды) жгутиковые
ииикижмые формы протея характеризуются сплошным ростом,
н
|111
котором поверхность среды очень быстро покрывается
1
итниным налетом без образования изолированных колоний.
I HiKtfl рост называют
феноменом «роения»,
при котором
ирипсходит образование концентрически расходящихся от центра
!■ мсрп(|)ерии зон роста.
Засев скош енного агара по Щ укевичу
Мс год Щукевича используют для идентификации протея по
п,и||
1
ми
1
о
феномена
«роения»
(повышенной
подвижности).
Iliv 'in m c
повышенной
подвижности
протея
проводят
■
Ч
1
';
1
ук)|цим образом:
»■ Мачериал, содержащий бактерии, засевают в пробирки со
скошенным МПА. Предварительно стерилизуя петлю и края
прс)бирки с культурой протея, делают забор материала, края
иробирки прожигают, пробирку закрывают и ставят в
ппагив. Вносят петлю с культурой в конденсат у основания
скошенного МПА, стараясь не касаться краев пробирки и
иоисрхности агара, стерилизуют в пламени спиртовки края
пробирки, закрывают ее и ставят в термостат.
» I Iri'jHO также стерилизуют, прожигая в пламени спиртовки.
г
1
1
рс)
1
'сй обладает феноменом «роения», при этом колонии
КПК бы расползаются, быстро покрывая всю поверхность
скошенного агара даже там, где посев не проводили.
Добавление к МПА фенола ингибирует «роение», и рост
(тк гсрий происходит локально только в месте посева - у
• ниоиакия скошенного агара. Пробирка с фенолом служит
кширолем и в нее делается засев культуры протея по
.
1
торитму,^рписанному выше.
71
При
диагностике
инфекций,
вызванных
бактериями,
принадлежащими к роду
Klebsiella,
в мазках, приготовленных из
патологического материала, бактерии располагаются чаще всего
попарно и
окружены ярко выраженной капсулой,
которая видна
в виде неокрашенного ореола вокруг клеток.
Занятие № 22
ВИБРИОНЫ. БРУЦЕЛЛЫ. ФРАНЦИСЕЛЛЫ.
YERSINIA PESTIS. БАЦИЛЛЫ
Микробиологическая диагностика холеры, бруцеллеза,
туляремии, чумы, сибирской язвы
Практические навыки, приобретаемые на занятии
1. Пересев из пробирки в пробирку (повторение навыка для его
закрепления).
2. Идентификация по мазку бацилл (повторение навыка для его
закрепления).
3. Иммунопрепараты (повторение навыка для его закрепления).
Пересев из пробирки в пробирку
Посев испражнений на щелочную пептонную воду для
идентификации холерного вибриона
> Испражнения засевают в пробирки с 1% щелочной пептонной
водой (селективная среда), предварительно стерилизуя петлю в
пламени спиртовки до забора материала и после засева.
> П ри этом края пробирок с испражнениями фламбируют в
пламени спиртовки до и после взятия материала, а края
пробирок с питательной средой - до и после засева.
> Засев можно производить, одновременно удерживая обе
пробирки (с патологическим материалом и с питательной
средой) в одной руке (рис.27). При этом обе пробирки
открывают и закрывают одновременно, прожигая края
обеих пробирок в пламени до и после засева.
> Пробирки с посевами ставят в термостат на 6-8 часов при 37°С.
> Холерный вибрион при выращивании в 1% щелочной пептонной
воде через 6-8 часов образует нежную плёнку на поверхности
среды.
72
1‘иг.27. Техника пересева из пробирки в пробирку: стерилизация
петли и краев пробирок до забора материала (а)
и после посева (б)
Идентификация по мазку бацилл
При использовании бактериоскопического метода диагностики
..... ..
идентифицируют в мазках, окрашенных по Цилю-Нильсену.
11|'и мом возбудитель сибирской язвы
В. anthracis
и возбудитель
..... . |Ч'
1
Х гоксикоинфекций
В. сегеш
выявляются в виде крупных
• ис.|мн()держащих палочек (в мазке видны синие палочки и
►
I'l'iii.u- споры), образующих цепочки, причем концы клеток
|'||И
1
Ч
1
|Я
1
обрезанными под прямым углом. Единственным
|и iM'iiicM является капсула, которая обнаруживается только у
•и ч|ж и теля сибирской язвы, причем капсула в мазке выявляется
.......
у бактерий, выделенных из патологического материала,
"
1
ИЧ
1 0
у
больных животных
или
человека,
либо
при
73
выращивании возбудителя на средах, содержащих нативную
сыворотку.
Применение методов микробиологической диагностики
особо опасных инфекций, которые включают исследования
живой культуры возбудителя, возможно только в условиях
работы в реж имных лабораториях, приспособленных для
исследования возбудителей ООИ.
Микробиологическая
диагностика
холеры
включает
бактериоскопический, бактериологический, серологический и
молекулярно-генетический методы.
Патологическим
материалом
для
проведения
микробиологической диагностики служат испражнения, рвотные
массы, желчь, секционный материал (фрагменты тонкой кишки и
желчного пузыря), вода, пищевые продукты и др. При
проведении исследований
материал следует доставлять в
лабораторию не позже 2 часов после забора (так как возбудитель
быстро погибает, особенно в испражнениях). При невозможности
срочной доставки образцы помещают в транспортные среды (1%
пептонная вода с pH 8,2-8,6).
При микроскопии следует помнить, что по морфологии
клетки холерного вибриона в мазках, приготовленных из
колоний, выращенных на питательных средах, представляют
собой палочки с одним изгибом, однако в клиническом материале
для бактерий характерен полиморфизм. Вибрионы хорощо
окрашиваются анилиновыми красителями, поэтому для их
окраски
обычно
используют
водный
фуксин.
Важным
диагностическим признаком является подвижность бактерий, которую
выявляют методом висячей или раздавленной капли.
Для
культивирования и выделения чистой культуры
производят высев патологического материала на щелочной МПА,
либо
дифференциально-диагностическую
среду
(например,
TCBS-arap). На щелочных агаризованных средах возбудитель
образует небольшие круглые дисковидные по форме прозрачные
голубоватые S-колонии. На агаре с тиосульфатом, цитратом,
солями желчных кислот и сахарозой (TCBS-arap) холерный
вибрион образует жёлтые колонии, поскольку ферментирует
сахарозу. При выращивании в жидких средах, например, в 1%
пептонной воде (pH 8.8-9.0) холерный вибрион растёт, опережая
74
1
М
1
|)осги роста бактерии кишечной группы, и образует
1
HMD юлубоватую плёнку и муть. 1%
пептонная вода
(НгО
с
«rfbiiijciiHCM пептона) является селективной средой, а также
ч» "ill накопления для возбудителя холеры.
.........сйшую
диагностику
холеры
проводят,
изучая
.........
свойства возбудителя. Например, выявляют
II
1
II ишюсть
выделенной
чистой
культуры
бактерий
|< “
1
1
,т;|иливать нитраты в нитриты и образовывать индол —
н
1
И|
11
ио-индоловая проба (проба холер-рот). Изучают также
.......... ..
к 1-й группе Хейберга: по наличию способности
•|и рмппнровать маннозу и сахарозу и отсутствию ферментации
(риникпы.
Серологические свойства изучают,
анализируя
..... .
структуру
холерного
вибриона
с
помощью
' и имощмх агглютинирующих сывороток; О — сывороток (для
III пи ш-ния
принадлежности
возбудителя
к серологической
I |п миг), < )R (для выявления OR антигена в стадии диссоциации),
I liiiiiiii и ( )гава (для выявления серотипа).
Ипжмое диагностическое значение имеет фаготипирование с
M|MiMciu-imcM холерных диагностических бактериофагов. Все
iijo iii т и т е л и
V.
с/го/егае лизируются бактериофагом IV группы,
1 1 1
м(||
1
И от
.1
биовара Эль-Тор - фагами группы V.
11о|будитель бруцеллеза Brucella melitensis
представляет
....... .
I рамотрицательные мелкие коккобактерии - очень
f '-(НИhill- палочки с закруглёнными концами, которые в мазках
I' |> шипи акугся беспорядочно.
Микробиологическая диагностика бруцеллеза
включает
ь.териологические,
серологические
и
аллергологические
-......
Применение культурального метода для выделения
■им mil
культуры
и
диагностики
бруцеллеза
связано
с
•п|.. Ц
1
'л с т
1
ыми
трудностями,
поскольку
бруцеллы
• I» 1м1М(|1сльны к питательным средам. Они могут расти на средах
■
Н|Н
1
И
| . 1 0
барана, на сывороточном или печеночном агаре (агар
•
niiutiiia). Кроме того, для бруцелл характерен медленный
|t.*. (
особенно
в
первых
генерациях
-
при
высевах
((■
1
ИИ |
11
-дс
1
венно из патологического материала они растут от 2
' • I недель. Колонии бруцелл на твёрдых средах обычно имеют
фирму: мелкие, выпуклые, гладкие и вначале прозрачные,
75
затем с возрастом они мутнеют и приобретают перламутровый
оттенок. В процессе S- R-дцссоциации бруцеллы формируют
шероховатые R-колрнии.
Патологическим
материалом для
бактериологических исследований служат; кровь, моча, грудное
молоко, аспираты костного мозга
И
биопсийный материал
печени. Учитьшая то, что основным местом пребывания
возбудителя
в
организму
являются
клетки
гемо-
и
лимфопоэтинеской систем, в первую очередь исследуют гемо- и
миелокультуры.
Серологические реакции
значительно чаще используют в
диагностике. Этот метод применяют либо для обнаружения
антигенов возбудителя, либо для выявления антител к нему. Для
быстрого
выявления
антигенов
возбудителя
в
мазках
непосредственно из клинического материала в качестве экспресс-
диагностики применяют РИФ с антисыворотками, меченными
флюоресцеинами. Для обнаружения бруцеллезных антигенов
можно также ставить РНГА с использованием эритроцитов,
нагруженных
моноклональными
антителами
к
родоспецифическому антигену бруцелл, а также ИФА.
Выявление антител в сыворотке больного проводят с
использованием ускоренного метода: пластинчатой реакции
агглютинации
(реакции Хеддлсона).
Более информативной
является развернутая реакция агглютинации
(реакция Райта),
которая позволяет вычислить титр агглютинирующих антител к
возбудителю в сыворотке пациента. При хроническом бруцеллезе
выявляют неполные антитела в
реакции Кумбса.
Кроме того, для обнаружения антител к бруцеллам,
например, в молоке животного, больного бруцеллёзом, ставят
реакцию кольцепреципитации
(кольцевая проба Банга).
Для
этого в молоко вносят убитую культуру бруцелл, окрашенных
гематоксилином. При наличии в молоке специфических антител к
возбудителю
происходит
реакция
преципитации,
бактерии
связьшаются с антителами и образуют преципитат в виде кольца
преципитации,
которое
приобретает
тёмно-синий
цвет.
При
отсутствии антител молоко равномерно окрашивается в синий цвет.
Кожно-аллергическая проба
(проба Бюрне)
ставиться с
бруцеллином - фильтратом убитой нагреванием бульонной культуры
76
' (".Ml ||
1
| Проба позволяет выявить инфекционную аллергию (ГЗТ),
........
||.г
1
И
11
вается при бруцеллезе.
11<>|Г|удигель
туляремии
F.
tularensis
-
мелкие
iim ИИ унированные
(капсула
слабо
выражена)
■
I '|м и ||
111
ц;ггельные палочки. В мазках из чистой культуры
■"мииируюг кокковидные формы, в мазках из патологического
ч (И
- коккобактерии.
1..||> юриологический метод в диагностике туляремии не
и...... .
широкого применения в связи с трудностями выделения
ИИ mil кул
1
луры непосредственно из патологического материала,
и
и mil я X обычной лаборатории для диагностики применяют
• |и. ич ичоские реакции, а также кожно-аллергическую пробу с
1
,
1
и||
1
пи
1
м (проба бывает положительной уже с 3—5 дня болезни).
........ .
педели заболевания ставиться развернутая реакция
и ( ш и т м ц п и ;
с
использованием
в
качестве
антигена
■, и
( ( |1
миИпого
диагностикума
вьывляют
специфические
и)м.|И
1
им упяремийные антитела в сыворотке больного. Наиболее
I.
(IMI rein.пой серологической реакцией считается РНГА с
и(|н миНпым эритроцитарным диагностикумом в качестве
..... и
1 11.1
Реакцию ставят в полистероловых планшетах.
11<||Г|у;|н’1'ель чумы
Y. pestis -
короткая овоидная (яйцевидная)
1 1
"'ми
1
риплгсльная палочка с биполярной окраской (концы
......... !■ окрашиваются более интенсивно, чем центральная
•
II I
П.ишчие биполярного окрашивания при окраске метиленовой
ИММ
1
.Ц мпчков, приготовленных из патологического материала,
....... и и
иажным дифференциальным признаком и позволяет
...... ........
11
|ч;дварительный анализ.
Принципы
микробиологической
диагностики
чумы
1
И
1
ЧИ
1 0 1
бактериоскопические
(выявление
биполярного
• I {читк.ишя),
бактериологические,
аллергические
и
"ИМ ииимсские методы.
Мии-ришюм для исследований служат: пунктат из бубона
мм(( п о отделяемое), мокрота, кровь, при кишечной форме —
.. K|,ii I М
1
-ПИЯ. Для культивирования бактерий чумы используют
. ■
I
111.11
тпател.ьные среды. Селективной средой является среда
I
t «|.ии KOI<»,
содержащая
гемолизированную
кровь
и
77