ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 31.10.2019
Просмотров: 2997
Скачиваний: 1
66
Дата: ________________
ЗАНЯТИЕ № 26
РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИПОПРОТЕИНОВ НИЗКОЙ
ПЛОТНОСТИ (ЛПНП) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. ЛПНП (β-липо-
протеины) содержат в своем составе 40% холестерина, транспорти-
руют этот стероид в сыворотке крови. Количество ЛПНП изменяется
при нарушении метаболизма холестерина в организме.
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА. ЛПНП обра-
зуют с гепарином комплекс, который при добавлении хлорида каль-
ция выпадает в осадок. Степень помутнения раствора пропорцио-
нальна содержанию ЛПНП в сыворотке крови и определяется нефе-
лометрически.
ХОД РАБОТЫ: взять одну пробирку.
ПРОБА
отмерить
ОПЫТ
Раствор СаСl
2
0,27 %
Сыворотка крови
Гепарин, 1 %
2 мл
0,2 мл
Перемешать.
ФЭК, λ = 630 нм, кювета 5 мм,
определить Е
1
против Н
2
О.
Перелить раствор в пробирку.
0,04 мл
Перемешать.
Инкубация ровно 4 минуты
Определить в тех же условиях
Е
2
против Н
2
О.
РЕЗУЛЬТАТ: Е
1
= ;
Е
2
= .
67
РАСЧЕТ: концентрация ЛПНП = (Е
2
– Е
1
) х 100 = г/л.
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Нормальное содержание ЛПНП в сыворотке крови: 2 - 4 г/л
Увеличение концентрации ЛПНП наблюдается при атеро-
склерозе, сахарном диабете, гипотиреозе, механической желту-
хе, острых гепатитах, хронических заболеваниях печени, ожи-
рении, гиперкортицизме, гиперлипопротеинемии II типа.
ВЫВОД:
68
Дата
______________
ЗАНЯТИЕ № 27
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА
ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ ЛИПИДОВ»
Задания для самостоятельной работы:
1.
Составить метаболическую карту липидного обмена.
2.
На карте отметить:
2.1. Диагностически значимые субстраты (общие липиды, триа-
цилглицеролы, холестерол, липопротеины, кетоновые тела).
2.2. Ферменты, исследуемые с целью диагностики (липаза, липо-
протеинлипаза).
2.3. Регуляторные ферменты β-окисления, синтеза жирных
кислот и холестерола, липолиза.
2.4. Витаминзависимые ферменты.
3. Решение и обсуждение ситуационных задач.
69
Дата: _______________
ЗАНЯТИЕ № 29
РАБОТА № 26. АКТИВНОСТЬ АЛАНИНАМИНО-
ТРАНСФЕРАЗЫ (АлАТ) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Аминотрансферазы
- ферменты, катализирующие перенос аминогруппы с аминокислот на
кетокислоты. В качестве кофермента ферменты содержат производ-
ное витамина В
6
- пиридоксальфосфат и пиридоксаминфосфат. Ак-
тивность аминотрансфераз отражает состояние аминокислотного об-
мена в печени, сердечной мышце, почках, скелетной мускулатуре и
других органах.
ПРИНЦИП МЕТОДА: аланинаминотрансфераза катализирует ре-
акцию:
аланин + 2-кетоглутаровая
+ пировиноградная
кислота
кислота
При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгидразина фермента-
тивный процесс останавливается и образуется динитрофенилгидразон
пирувата:
Это соединение в щелочной среде дает коричнево-красное окра-
шивание. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количест-
ву образовавшейся пировиноградной кислоты. По количеству ПК су-
дят об активности фермента (метод Райтмана-Френкеля).
АлАТ
В
6
глутаминовая
кислота
70
ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки.
ПРОБА
отмерить
О П Ы Т
КОНТРОЛЬ
СУБСТРАТ
ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ РАСТВОР
СЫВОРОТКА КРОВИ
0,25 мл
--
0,05 мл
0,25 мл
0,05 мл
--
Инкубируют в термостате 30 минут при 37
о
С
2,4-Динитрофенилгидразин
0,25 мл
0,25 мл
Перемешать, оставить на 20 минут при комнатной температуре.
NaOH
2,5 мл
2,5 мл
Перемешать и через 10 минут измерить Ех опыта на колориметре
против контрольного раствора.
Длина волны 500-530 нм; кювета 10 мм.
РЕЗУЛЬТАТ:
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Активность аланинаминотрансферазы в сыворотке крови
в норме: 0,1 - 0,68 ммоль/л/час.
Повышение активности фермента наблюдается при некрозе кле-
ток печени любой этиологии, вирусных и хронических гепатитах, ме-
ханической желтухе, травмах мышц, миозите, миокардите, инфаркте
миокарда, дистрофии, миопатии.
ВЫВОД: