ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 31.10.2019
Просмотров: 2992
Скачиваний: 1
71
Дата: _______________
ЗАНЯТИЕ № 30
РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВИНЫ В СЫВОРОТКЕ
КРОВИ
(ДИАЦЕТИЛМОНООКСИМНЫЙ МЕТОД)
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Мочевина - про-
дукт, образующийся в печени при обезвреживании аммиака. Моче-
вина - основной конечный продукт обмена белков. Примерно 50 %
небелкового, остаточного азота крови приходится на долю мочевины.
ПРИНЦИП МЕТОДА: мочевина образует с диацетилмоноокси-
мом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов
трехвалентного железа комплексное соединение красного цвета, по
интенсивности окраски которого определяют ее концентрацию.
ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт, стандарт, контроль.
ОТМЕРИТЬ
ОПЫТ
СТАНДАРТ
КОНТРОЛЬ
Рабочий раствор
Сыворотка крови
Дистилл. вода
Стандартный раствор моче-
вины(16,65 ммоль/л)
2,0 мл
0,1 мл
-
-
2,0 мл
-
-
0,1 мл
2,0 мл
-
0,1 мл
-
Все пробирки поместить в водяную баню при температуре 100
о
С
в течение 5 минут.
Охладить и произвести измерение экстинкции против контроля
при 500-560 нм; кювета 10 мм. Измерения проводят в пределах 15
минут.
72
РЕЗУЛЬТАТ:
КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ: рассчитывают по формуле:
А
1
Х = ----- х 16,65 = ммоль/л
А
2
где Х - концентрация мочевины, ммоль/л.
А
1
- экстинкция опытной пробы (Ео).
А
2
- экстинкция стандартной пробы (Е ст.).
РАСЧЁТ:
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Нормальное содержание мочевины в сыворотке крови у взрослых
2,5 - 8,3 ммоль/л; в моче 333 - 582 ммоль/сут.
Незначительное повышение концентрации мочевины в сыворотке
крови наблюдается при избыточном питании белковыми продукта-
ми, при старении.
Значительное увеличение концентрации мочевины в сыворотке
крови (уремия) наблюдается при почечной недостаточности, обез-
воживании (рвота, понос), шоке, усиленном распаде белков, сепсисе.
Пониженное содержание мочевины в сыворотке крови отмечает-
ся при паренхиматозном гепатите, циррозе (резкое снижение мочеви-
нообразовательной функции печени), эклампсии, во время беремен-
ности.
Пониженное содержание мочевины в моче отмечается при неф-
рите, ацидозе, паренхиматозной желтухе, циррозе печени
ВЫВОД:
73
Дата ________________
ЗАНЯТИЕ № 31
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА
ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ АМИНОКИСЛОТ. ОБМЕН
НУКЛЕОТИДОВ»
Задания для самостоятельной работы:
1.
Составить метаболическую карту аминокислотного обмена.
2.
На карте отметить:
2.1. Источники аминокислот в тканях.
2.2. Пути превращения аминокислот в тканях.
2.3. Тканевое обезвреживание аммиака.
2.4. Биосинтез мочевины.
2.5. Аминокислоты, распад которых приводит к образованию
Ацетил-КоА.
2.6. Субстраты ЦТК, являющиеся конечными продуктами
распада аминокислот.
2.7. Конечные продукты распада аминокислот и нуклеотидов
и их нормы в крови.
3.
Решение и обсуждение ситуационных задач.
74
Дата: ________________
ЗАНЯТИЕ № 32
РАБОТА № 1. КАЧЕСТВЕННОЕ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА
(ПО МЕТОДУ ЙЕНДРАШИКА)
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. При разрушении
эритроцитов (у человека через 100-120 дней) в клетках ретикулоэндо-
телиальной системы костного мозга, селезенки, печени происходит
распад гемоглобина. Конечным продуктом распада гема является не-
прямой билирубин, который поступает в кровь и транспортируется
альбуминами в печень, где происходит его обезвреживание с образо-
ванием прямого билирубина.
В сыворотке крови имеется два вида билирубина. Основная фор-
ма - это непрямой (свободный) билирубин, который не связан с глю-
куроновой кислотой и дает непрямую диазореакцию. В крови содер-
жится незначительное количество прямого (связанного) билирубина -
этот билирубин связан с глюкуронатом и дает прямую диазореакцию.
Сумма обоих пигментов дает общий билирубин.
Нарушение обмена билирубина сопровождается развитием жел-
тухи. В связи с этим раздельное количественное определение общего,
прямого и непрямого билирубина в сыворотке крови имеет значение
для дифференциальной диагностики различных типов желтух.
ПРИНЦИП МЕТОДА: Диазореактив дает с прямым билирубином
розовое окрашивание. Непрямой билирубин переводят в растворимое
состояние добавлением к сыворотке кофеинового реактива, после
этого общий билирубин определяется диазореакцией. Интенсивность
окраски прямо пропорциональна концентрации билирубина в пробе.
75
ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт 1, 2 и контроль.
ОТМЕРИТЬ
ОПЫТ1
ОПЫТ2
КОНТРОЛЬ
ПРЯМОЙ
БИЛИРУБИН
ОБЩИЙ
БИЛИРУБИН
СЫВОРОТКА
КРОВИ
NaCl 0,9%
ДИАЗОРЕАКТИВ
КОФЕИНОВЫЙ
РЕАКТИВ
0,5 мл
1,75 мл
0,25 мл
-
0,5 мл
-
0,25 мл
1,75 мл
0,5 мл
0,25 мл
-
1,75 мл
Содержимое пробирок перемешать и инкубировать
при температуре 18
о
С.
ОПЫТ
1
- фотометрия через 10 минут
против контроля
ОПЫТ
2
- фотометрия через 20 минут
Длина волны: 530-550 нм, кювета 5 мм.
РЕЗУЛЬТАТ:
КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ находят по калибровочному графику.
По разнице между количеством общего и прямого билирубина опре-
деляют уровень непрямого билирубина.