ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 31.10.2019
Просмотров: 2990
Скачиваний: 1
31
32
Дата: _______________
ЗАНЯТИЕ № 9
РАБОТА № 1. ГИДРОЛИЗ НУКЛЕОПРОТЕИДОВ ДРОЖЖЕЙ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Кислотный гидро-
лиз используется для изучения химического состава нуклеопротеи-
дов.
ПРИНЦИП МЕТОДА:
СХЕМА ГИДРОЛИЗА НУКЛЕОПРОТЕИДОВ
НУКЛЕОПРОТЕИДЫ (дрожжи)
H
2
SO
4
10%
100
o
C
БЕЛОК НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ
(протамины или гистоны) (ДНК, РНК)
ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ
ПОЛИПЕПТИДЫ ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ
ТРИ-, ДИПЕПТИДЫ
СВОБОДНЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ МОНОНУКЛЕОТИДЫ
НУКЛЕОЗИДЫ ФОСФОРНАЯ
КИСЛОТА
ПУРИНОВЫЕ ДЕЗОКСИРИБОЗА
ИЛИ ПИРИМИДИНОВЫЕ ИЛИ РИБОЗА
АЗОТИСТЫЕ ОСНОВАНИЯ
Продукты гидролиза открывают специфическими реакциями: по-
липептиды – биуретовой реакцией; пуриновые основания – серебря-
33
ной пробой (серебряные соли пуринов образуют светло-коричневый
осадок), пентозы – пробой Троммера (возникает красное окрашива-
ние вследствие окисления рибозы), фосфорную кислоту – молибде-
новой пробой (образуется фосфорномолибденовокислый аммоний –
желтый кристаллический осадок).
ХОД РАБОТЫ: взять колбу, внести 5 г дрожжей + 40 мл 10%-го
раствора H
2
SO
4
, закрыть пробкой со стеклянной трубкой и поставить
для кипения (100
о
С) на 60 минут.
Через час охладить и отфильтровать.
В фильтрате открыть продукты гидролиза.
Взять четыре пробирки и в каждой выполнить реакцию:
ОТМЕРИТЬ
ОПЫТ
1.
БИУРЕТОВАЯ
РЕАКЦИЯ
Гидролизат
NaOH 10%
CuSO
4
1 %
5 капель
10 капель
1 - 2 капли
Возникает фиолетовое окрашивание
2.
СЕРЕБРЯНАЯ
ПРОБА НА ПУРИНЫ
Гидролизат
(NH4)OH конц.
AgNO
3
1 %
10 капель
1 каплю
5 капель
Оставить на 5 мин.
Образуется светло-
коричневый осадок.
3. ПРОБА ТРОММЕРА
НА РИБОЗУ И
ДЕЗОКСИРИБОЗУ
Гидролизат
NaOH 30 %
CuSO
4
7 %
5 капель
10 капель
3 капли
Нагреть до начала кипения. Выпадает красный осадок Cu
2
O или жел-
тый CuOH
4. МОЛИБДЕНОВАЯ
ПРОБА НА
ФОСФОРНУЮ КИСЛОТУ
Молибденовый
реактив
Гидролизат
20 капель
5 капель
Кипятить несколько минут, получается окра-
ска лимонно-желтого цвета.
34
РЕЗУЛЬТАТ:
ВЫВОД:
35
Дата: _______________
ЗАНЯТИЕ № 10
РАБОТА № 1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ В МОЧЕ
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Мочевая кислота
образуется из пуриновых оснований (аденин, гуанин). Выделение мо-
чевой кислоты с мочой зависит от содержания пуринов в пище и от
состояния обмена нуклеиновых кислот в организме. Мочевая кислота
в виде кислого урата натрия входит в состав подагрических отложе-
ний в сухожилиях, хрящах, слизистых оболочках суставных сумок.
Метаболит существует в виде 2-х таутомерных форм.
ПРИНЦИП МЕТОДА. Мочевая кислота окисляется кислородом
при каталитическом действии фермента уриказы с образованием пе-
рекиси водорода и аллантоина. Образующаяся перекись водорода под
действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашен-
ного продукта, определяемого фотометрически.
ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки.
Отмерить
Стандарт
Опыт
Сыворотка крови или раз-
веденная моча
-
0,02
Калибровочный раствор
375 мкмоль/л
0,025
-
Рабочий реагент
1
1
Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 10 мин
при температуре 37
о
С. Длина волны 500-520 нм (490 нм, ФЭК), кюве-
та 0,5 см. Измеряют оптическую плотность опытной пробы против
воды. Стабильность окраски 15 минут.
ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТА:
С
пр
= С
ст
х Е
on
/E
ст
(мкмоль/л)