Файл: Методичн_ рекомендац_ї 3 частина.doc

2. Теоретичні питання до заняття:

• Методи вивчення вірусів, їх оцінка.

• Особливості взяття, обробки та транспортування матеріалу для вірусологічних досліджень.

• Методика підготовки вірусовмісного матеріалу та техніка інфікування чутливих до вірусів систем.

• Методи культивування вірусів, їх оцінка.

• Реакції вірусної гемаглютинації і гемадсорбції. Механізм, практичне значення, використання, діагностична цінність.

• Цитопатична дія вірусів (ЦПД). Класифікація ЦПД вірусів.

3. Практичні завдання, які виконуються на занятті:

1. Поставити реакцію гемаглютинації (РГА) з метою виявлення вірусу в алантоїдній рідині курячого ембріону, визначити титр вірусу.

2. Виявити вірусну репродукцію в клітинних культурах за цитопатогенною дією (ЦПД), бляшкоутворенням, «кольоровою» пробою, реакцією гемадсорбції.

3. Вивчити різні види ЦПД вірусів.

4. Зміст теми:

На практичному занятті студенти знайомляться з методами виявлення вірусів у різних чутливих системах (клітинних культурах, курячих ембріонах, чутливих лабораторних тваринах); вчаться виявляти вірус в культурі клітин за цитопатичною дією; вивчають різні види ЦПД у культурі клітин; знайомляться з методикою постановки реакцій бляшкоутворення під агаровим та бентонітовим покриттям; вивчають вірусні бляшки у культурі клітин під агаровим та бентонітовим покриттям; здійснюють облік “кольорової проби”, що поставлена з метою індикації вірусів у культурі клітин; здійснюють облік реакції гемадсорбції, що поставлена з метою індикації вірусів у культурі клітин;здійснюють облік реакції гемаглютинації, що поставлена з метою індикації вірусів у хоріоналантоїсній рідині курячого ембріону. Виконані завдання студенти записують у протокол та підписують його у викладача.

Рекомендації для оформлення протоколу. Методи індикації вірусів

1. Виявлення цитопатичної дії вірусів (ЦПД) у культурі клітин.

ЦПД – це дегенеративні зміни в клітинах, що проявляються в результаті репродукції в них вірусів

2. Поява внутрішньоядерних включень, що виявляють при забарвленні за Романовським-Гімзе, при люмінесцентній мікроскопії, електронній мікроскопії.

3. Бляшкоутворення під бентонітовим покриттям.

4. Реакція гемаглютинації (рга).

5. Реакція гемадсорбції.

6. Кольорова проба. В результаті життєдіяльності клітин в поживному середовищі (ПС) накопичуються кислі продукти, які призводять до відповідної зміни рН середовища (жовтий). При зараженні культури клітин цитопатогенними вірусами пригнічується метаболізм клітин та рН середовища не змінюється (середовище лишається червоним).

7. Виявлення розмноження вірусів в курячих ембріонах.

Завдання 1. Навчитись виявляти вірусну репродукцію в культурах клітин за цитопатичною дією.

Студенти оцінюють моношар культури клітин, інфікованої на попередньому занятті, виявляють цитопатичну дію, аналізують її та замальовують у протоколах.

Завдання 2. На демонстраційних препаратах вивчити різні види ЦПД вірусів.

Завдання 3. Здійснити облік реакції гемаглютинації з метою виявлення вірусів грипу в хоріоналантоїсній рідині.

РГА – це склеювання еритроцитів під дією вірусів.

Розведення вірусовмісної рідини.

1. Ке- контроль еритроцитів.

7. Питання для самоконтролю.

• Після інфікування клітинних культур з наступним ін6кубуванням пробірок в термостаті спостерігається помутніння середовища підтримки. Про що це свідчить?

• Які біологічні ознаки характерні для репродукції вірусу в курячому ембріоні?

• Як і коли можна використати реакцію гемаглютинації (РГА ) для індикації вірусів?

• Які ознаки репродукції вірусу при культивуванні вірусу в лабораторних тваринах?

• Культивуючи вірус кору в культурі клітин можна виявити великі багатоядерні клітини. Як можна назвати такі зміни в уражених клітинах? Які ще типи ЦПД можуть викликати віруси в культурі клітин?

• Чи можуть розмножуватись віруси в культурі клітин без появи ЦПД? Якщо так, то яким чином можна виявити репродукцію таких вірусів?

Практичне заняття №18 Тема: «Серологічні реакції, які використовуються у вірусології»

1. Актуальність теми.

Серологічна ідентифікація вірусних антигенів за допомогою стандартних діагностичних сироваток та серологічна діагностика вірусних захворювань на основі виявлення антитіл у досліджуваних сироватках за допомогою стандартних антигенів - діагностикумів є основними напрямками досліджень у практичних вірусологічних та імунологічних лабораторіях. Через це знання та розуміння суті серологічних досліджень, принципів і особливостей постановки серологічних реакцій є запорукою ефективності лабораторної діагностики вірусних захворювань і, відповідно, ефективності їх лікування. Наведені дані свідчать про актуальність теми даного практичного заняття та спрямовані на формування позитивної мотивації її вивчення.

2. Конкретні цілі:

• Засвоїти закономірності імунітету при вірусних інфекціях.

• Оволодіти основними методами постановки серологічних реакцій, які використовуються у вірусології.

3. Базові знання, вміння, навички, необхідні для вивчення теми (міждисциплінарна інтеграція). Дивись практичне заняття №16.

4. Завдання для самостійної праці під час підготовки до заняття.

4.1. Перелік основних термінів, параметрів, характеристик, які повинен засвоїти студент при підготовці до заняття.