ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 31.10.2019
Просмотров: 5027
Скачиваний: 1
Быстрый
плазмареагиновый
тест
(RPR-
тест
)
относится
к
макро
-
скопическим
нетрепонемным
флокуляционным
тестам
. J. Portnoy
и
соав
-
торы
предложили
его
в
1957
г
.
для
массового
быстрого
скрининга
образ
-
цов
сыворотки
или
плазмы
в
полевых
условиях
.
Реакция
проводится
на
пластиковых
планшетах
с
впечатанными
кружочками
.
В
1961
г
.
эти
же
авторы
предложили
вариант
RPR-
теста
на
специальных
картонных
карточ
-
ках
с
выдавленными
круглыми
плоскими
неглубокими
лунками
диаметром
18
мм
.
Капля
исследуемого
образца
(
неразведенная
плазма
или
сыворотка
крови
)
смешивается
в
лунке
с
каплей
стабилизированного
стандартного
кардиолипинового
антигена
,
в
который
добавлены
частицы
мелкодисперс
-
ного
угля
(RPR-
антиген
).
Затем
в
течение
8
мин
планшету
вращают
на
ор
-
битальном
ротаторе
со
скоростью
100
об
./
мин
,
чем
достигается
стандарти
-
зация
условий
равномерного
перемещения
нанесенных
реагентов
.
В
состав
набора
входят
положительный
и
отрицательный
контроли
.
Учет
результа
-
тов
проводится
при
хорошем
освещении
,
когда
еще
не
высохла
поверх
-
ность
кружка
.
При
образовании
комплексов
антиген
-
антитело
мелкодис
-
персные
частицы
угля
попадают
в
образовавшуюся
сеть
и
коагулируют
.
Результаты
RPR-
теста
: «
положительный
» —
при
обнаружении
средних
и
больших
агрегатов
, «
слабоположительный
» —
выявляются
редкие
небольшие
агрегаты
, «
отрицательный
» —
ровная
серая
поверхность
без
видимых
агрегатов
.
При
положительных
результатах
рекомендуется
ис
-
следовать
RPR-
тест
в
полуколичественной
постановке
(
разведения
от
1:2
до
1:1024).
Специфичность
RPR-
теста
составляет
98 %,
чувствительность
при
первичном
сифилисе
составляет
86 %,
при
вторичном
— 100 %,
при
скрытом
раннем
— 98 %,
при
позднем
сифилисе
— 73 %.
Важным
услови
-
ем
является
то
,
что
все
производимые
в
мире
RPR-
наборы
являются
стан
-
дартизированными
,
что
делает
их
результаты
сопоставимыми
.
Вместе
с
тем
положительные
результаты
RPR-
теста
не
могут
безоговорочно
трак
-
товаться
как
наличие
сифилитической
инфекции
в
организме
исследуемого
пациента
без
подтверждения
трепонемными
тестами
. RPR-
тест
не
приго
-
ден
для
исследования
спинномозговой
жидкости
.
VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) —
микрофлокуляцион
-
ный
тест
—
ставится
с
инактивированной
сывороткой
крови
(
или
спин
-
номозговой
жидкостью
)
на
стеклянных
пластинках
с
лунками
.
Исследуе
-
мая
сыворотка
и
антиген
смешиваются
в
лунке
механическим
вращением
.
Образующийся
комплекс
«
кардиолипиновый
антиген
-
антитело
»
выявляет
-
ся
в
виде
стержневидных
структур
под
микроскопом
(
одинаковые
объек
-
тив
и
окуляр
×10).
При
качественной
постановке
VDRL
у
1–2 %
больных
вторичным
сифилисом
возможен
ложноотрицательный
результат
(
фено
-
мен
прозоны
).
Количественная
модификация
постановки
реакции
VDRL
позволяет
проводить
оценку
эффективности
лечения
(
после
лечения
идет
снижение
титров
антител
вплоть
до
серонегативации
).
Специфичность
76
VDRL —
около
98 %.
Чувствительность
реакции
при
первичном
сифилисе
составляет
78 %,
при
вторичном
— 100 %,
при
раннем
скрытом
— 95 %,
при
позднем
сифилисе
— 71 %.
2.12.2.1.
Трепонемные
(
подтверждающие
диагноз
сифилиса
)
серологические
тесты
Специфические
серологические
тесты
называются
трепонемными
потому
,
что
они
предполагают
применение
антигенов
трепонемного
происхождения
.
К
ним
относятся
:
1.
Реакция
связывания
комплемента
(
реакция
Вассермана
)
с
трепо
-
немным
антигеном
(
РСКт
).
2.
Реакция
иммобилизации
бледных
трепонем
—
РИБТ
,
в
зарубежной
литературе
она
идет
под
названием
TPI (Treponema pallidum immobilization
test).
3.
Реакция
иммунофлюоресценции
(
РИФ
),
в
зарубежной
литературе
называется
FTA (Fluorescent treponemal antibody).
Она
применяется
в
не
-
скольких
модификациях
:
РИФ
-200 (FTA-200);
РИФ
-
абс
(FTA-abs; FTA-abs
double staining; FTA-abs IgM;
РИФ
-
абс
-IgM; 19S-IgM-FTA-abs);
РИФц
—
реакция
иммунофлюоресценции
с
цельной
кровью
.
4.
Реакция
пассивной
гемагглютинации
—
РПГА
,
в
зарубежной
лите
-
ратуре
известна
под
названием
TPHA (Treponema pallidum haemagglutina-
tion assay).
5.
Иммуноферментный
анализ
—
ИФА
,
за
рубежом
называется
ELISA — Enzymelynked immunosorbent assay).
6.
Иммуноблотинг
,
в
зарубежной
литературе
называется
Western Blot.
Реакция
Вассермана
с
трепонемным
антигеном
.
В
качестве
антигена
используется
обработанный
ультразвуком
трепонемный
антиген
,
получен
-
ный
из
нескольких
штаммов
культуральной
бледной
трепонемы
.
Она
вхо
-
дит
в
состав
комплекса
стандартных
серологических
реакций
на
сифилис
(
КСР
).
Имеются
модификации
постановки
реакции
Вассермана
в
качест
-
венном
и
количественном
вариантах
,
на
холоде
,
со
спинномозговой
жидко
-
стью
.
Специфичность
реакции
равна
98 %,
чувствительность
— 80 % [69].
За
рубежом
реакция
Вассермана
с
трепонемальным
антигеном
уже
давно
не
применяется
в
клинической
лабораторной
практике
и
не
входит
в
список
стандартных
тестов
,
рекомендованных
Всемирной
Организацией
Здравоохранения
.
Реакция
иммобилизации
бледных
трепонем
(
РИБТ
).
Была
предло
-
жена
R. W. Nelson
и
M. M. Mayer
в
1949
г
.
и
являлась
фактически
первым
специфическим
тестом
для
диагностики
сифилиса
.
В
качестве
антигена
в
реакции
используются
живые
бледные
трепонемы
штамма
Никольса
,
полученные
из
7–10-
дневного
кроличьего
орхита
.
Реакция
выявляет
анти
-
тела
-
иммобилизины
,
которые
относятся
к
поздним
антитрепонемным
анти
-
77
телам
.
Принцип
реакции
заключается
в
потере
подвижности
бледных
трепонем
в
присутствии
специфических
антитрепонемных
антител
в
ис
-
следуемой
сыворотке
и
активного
комплемента
в
анаэробных
условиях
.
Реакция
ставится
с
инактивированными
прогреванием
сыворотками
или
с
образцами
сывороток
,
высушенных
на
вощеной
бумаге
(
сухие
капли
).
Для
оценки
результатов
реакции
рассчитывается
процент
иммобилизации
бледных
трепонем
,
т
.
е
.
соотношение
подвижных
и
неподвижных
трепо
-
нем
в
опыте
(
с
активным
комплементом
)
и
контроле
(
с
неактивным
ком
-
плементом
)
по
формуле
:
100,
М
С
–
М
ции
иммобилиза
%
×
=
где
М
—
количество
подвижных
трепонем
в
контроле
;
С
—
количество
подвижных
трепонем
в
опыте
.
Если
процент
неподвижных
трепонем
не
превышает
20 %,
реакция
оценивается
как
отрицательная
,
при
21–30 %
иммобилизации
—
сомни
-
тельная
, 31–50 % —
слабоположительная
, 51–100 % —
положительная
.
РИБТ
мало
пригодна
для
диагностики
ранних
проявлений
сифилиса
,
так
как
иммобилизины
появляются
в
крови
позже
реагинов
.
В
то
же
время
при
вторичном
,
позднем
сифилисе
,
нейросифилисе
,
врожденном
сифилисе
положительный
результат
РИБТ
регистрируется
в
95–100 %
случаев
.
Спе
-
цифичность
РИБТ
,
по
данным
литературы
,
равна
99 %,
чувствительность
колеблется
от
79
до
94 %.
Недостатки
реакции
:
РИБТ
требует
работы
с
живыми
патогенными
бледными
трепонемами
,
постановка
ее
сложна
,
трудоемка
и
дорогостояща
,
требует
наличия
вивария
и
высококвалифицированного
персонала
.
Нет
возможности
стандартизировать
этот
серологический
метод
.
Реакция
неприменима
на
фоне
проводимой
антисифилитической
терапии
,
может
давать
ложноположительные
результаты
у
больных
злокачественными
опухолями
,
диабетом
,
лепрой
,
аутоиммунными
заболеваниями
,
пневмони
-
ей
,
тяжелой
сердечно
-
сосудистой
патологией
.
Поэтому
в
большинстве
зарубежных
стран
уже
почти
40
лет
РИБТ
практически
используется
не
для
диагностических
целей
,
а
только
в
научно
-
исследовательской
работе
.
Реакция
иммунофлюоресценции
(
РИФ
).
Впервые
предложена
в
1957
г
. Deacon
и
соавт
.
В
качестве
антигена
используется
взвесь
живых
патогенных
бледных
трепонем
штамма
Никольс
из
орхита
кролика
,
которая
высушивается
на
предметном
стекле
и
фиксируется
ацетоном
.
Принцип
метода
:
фиксированный
на
предметном
стекле
антиген
обрабатывается
испытуемой
сывороткой
,
после
промывания
обрабатывается
люминес
-
центной
сывороткой
против
иммуноглобулинов
человека
,
меченной
флюорохромом
.
При
этом
образующийся
флюоресцирующий
комплекс
(
античеловеческий
глобулин
+
флюоресцеин
тиоизоционат
)
связывается
с
человеческим
глобулином
на
поверхности
бледной
трепонемы
,
обеспе
-
78
чивая
свечение
бледной
трепонемы
под
люминесцентным
микроскопом
.
Оценка
результатов
реакции
проводится
по
степени
свечения
препарата
:
4+, 3+, 2+,
отрицательный
результат
(
отсутствие
свечения
или
уровень
фона
— 1+).
На
практике
для
серодиагностики
сифилиса
используется
несколько
модификаций
реакции
иммунофлюоресценции
:
1.
РИФ
-200
—
исследуемая
сыворотка
разводится
в
200
раз
для
уменьшения
количества
ложноположительных
результатов
.
Это
обеспечи
-
вает
высокую
специфичность
реакции
,
но
чувствительность
ее
несколько
падает
.
2.
РИФ
-
ц
—
реакция
ставится
с
использованием
цельной
спинномоз
-
говой
жидкости
для
выявления
специфических
поражений
ЦНС
.
3.
РИФ
-
абс
—
реакция
иммунофлюоресценции
с
абсорбцией
.
Груп
-
повые
антитела
удаляются
из
исследуемой
сыворотки
с
помощью
разру
-
шенных
ультразвуком
культуральных
трепонем
,
что
существенно
повыша
-
ет
специфичность
реакции
.
Поскольку
исследуемая
сыворотка
использует
-
ся
в
разведении
1:5,
то
РИФ
-
абс
отличается
высокой
чувствительностью
,
и
ее
называют
«
золотым
стандартом
»
серодиагностики
сифилиса
.
РИФ
-
абс
рекомендуется
для
ранней
серодиагностики
сифилиса
,
так
как
она
стано
-
вится
положительной
уже
на
третьей
неделе
после
заражения
,
т
.
е
.
за
несколько
дней
до
появления
шанкра
или
одновременно
с
ним
.
4.
Реакция
РИФ
-
абс
-IgM
предложена
для
выявления
ранних
противо
-
трепонемных
антител
класса
IgM.
Известно
,
что
крупные
молекулы
IgM
не
могут
проходить
через
здоровую
плаценту
.
Следовательно
,
антитела
класса
М
против
бледной
трепонемы
могут
появиться
в
организме
ребенка
или
вследствие
нарушения
барьерной
функции
плаценты
или
же
они
вы
-
рабатываются
организмом
ребенка
,
больного
сифилисом
.
Антитела
класса
IgM
появляются
в
крови
больного
сифилисом
уже
в
первые
недели
болез
-
ни
,
а
антитела
класса
IgG
появляются
позже
.
Раздельное
определение
антител
обоих
классов
оказывается
исключительно
полезным
при
диагно
-
стике
врожденного
сифилиса
у
детей
,
так
как
наличие
у
ребенка
на
первом
месяце
жизни
антител
класса
IgM
будет
указывать
,
что
они
образованы
организмом
больного
сифилисом
ребенка
,
в
то
время
как
выявление
только
антител
IgG
будет
говорить
о
материнском
происхождении
последних
.
Известны
2
модификации
этой
реакции
:
–
FTA-ABS-IgM,
основанная
на
использовании
во
второй
фазе
реак
-
ции
конъюгата
анти
-IgM (
меченные
флюоресцеином
антитела
к
IgM
чело
-
века
)
вместо
античеловеческого
флюоресцирующего
глобулина
;
–
российский
вариант
РИФ
-
абс
-IgM,
отличающийся
тем
,
что
к
иссле
-
дуемой
сыворотке
крови
добавляется
сорбент
,
удаляющий
IgG-
антитела
,
а
с
оставшимися
IgM-
антителами
ставится
РИФ
-
абс
.
Основными
показаниями
к
постановке
РИФ
-
абс
-IgM
являются
:
79
–
серодиагностика
врожденного
сифилиса
при
отсутствии
у
ребенка
манифестных
проявлений
врожденного
сифилиса
на
коже
и
слизистых
оболочках
;
–
дифференциальная
диагностика
реинфекции
и
клинико
-
серологи
-
ческого
или
серологического
рецидива
сифилиса
,
при
котором
РИФ
-
абс
-
IgM
будет
отрицательной
,
а
РИФ
-
абс
—
положительной
;
–
оценка
эффективности
терапии
раннего
приобретенного
или
врож
-
денного
сифилиса
:
после
адекватного
лечения
РИФ
-
абс
-IgM
становится
отрицательной
в
течение
ближайших
3–6
месяцев
.
Постановка
реакции
19S(IgM)-
РИФ
-
абс
предполагает
предварительное
разделение
c
помощью
гель
-
фильтрации
более
крупных
молекул
19S IgM
от
фракции
более
мелких
молекул
7S IgG.
Дальнейшее
исследование
в
реак
-
ции
РИФ
-
абс
сыворотки
крови
,
содержащей
только
фракцию
19S IgM,
устраняет
все
возможные
источники
ошибок
.
Но
техника
постановки
этой
реакции
сложная
и
трудоемкая
,
требует
специального
оборудования
и
под
-
готовки
специалистов
.
В
нашей
республике
эта
реакция
не
ставится
.
Из
всех
модификаций
РИФ
в
Республике
Беларусь
используются
РИФ
-200,
РИФ
-
абс
—
для
исследования
сыворотки
крови
,
РИФ
-
ц
—
для
исследования
спинномозговой
жидкости
,
начата
работа
по
внедрению
РИФ
-
абс
-IgM
на
уровне
областных
и
крупных
городских
диспансеров
для
диагностики
врожденного
сифилиса
,
ранних
форм
сифилиса
и
дифферен
-
циальной
диагностики
случаев
реинфекции
и
серорецидива
.
Чувствительность
РИФ
-200
и
РИФ
-
абс
оценивается
84–99 %,
а
специ
-
фичность
— 97–99 %.
Основными
показаниями
для
использования
РИФ
в
клинической
практике
являются
:
диагностика
скрытых
и
поздних
форм
сифилиса
,
выявление
ложноположительных
результатов
КСР
и
МРП
,
осо
-
бенно
у
беременных
и
соматических
больных
при
подозрении
на
сифилис
,
для
установления
ретроспективного
диагноза
заболевания
.
РИФ
-
абс
мало
информативна
при
оценке
результатов
лечения
:
у
85 %
больных
,
получив
-
ших
адекватную
противосифилитическую
терапию
,
положительные
результаты
РИФ
сохраняются
многие
годы
.
Реакция
пассивной
гемагглютинации
(
РПГА
).
Реакция
была
разра
-
ботана
T. Rathlev
в
1965–1967
гг
.
Антигеном
в
реакции
выступают
эритро
-
циты
барана
или
птиц
,
обработанные
вначале
формалином
,
затем
танином
и
сенсибилизированные
антигеном
бледной
трепонемы
(
штамм
Никольс
),
обработанным
ультразвуком
.
Принцип
реакции
состоит
в
том
,
что
при
до
-
бавлении
исследуемой
сыворотки
в
лунку
с
антигеном
может
образовы
-
ваться
комплекс
антиген
-
антитело
,
связанный
с
поверхностью
носителя
,
при
наличии
специфических
противотрепонемных
антител
в
сыворотке
.
Визуально
это
проявляется
склеиванием
эритроцитов
,
т
.
е
.
гемагглютина
-
цией
.
В
данном
случае
имеет
место
непрямая
,
или
пассивная
,
гемагглюти
-
нация
,
так
как
антиген
соединяется
с
носителем
(
эритроциты
барана
,
на
-
80