Файл: chastnaya_sanitarnaya_mikrobiologia.docx

КР ставят с цельным свежим или консервированным формалином молоком коров и антигеном – взвесью убитых бруцелл, окрашенных в синий цвет гематоксилином. При наличии в молоке специфических антител происходит агрегация антигена, образовавшийся комплекс адсорбируется сливками молока и поднимается с ними вверх, образуя четкое, окрашенное кольцо. Проводится реакция в уленгутовских пробирках, в которые вносят по 0,05 мл антигена, добавляют 1 мл молока и содержимое тщательно смешивают, выдерживают при 37-38 ⁰С в течение 1 ч. Результаты учитывают визуально и оценивают в крестах: +++ — четко выраженное синее кольцо в верхней части молока, остальная часть молока белая; ++ – достаточно выраженное синее кольцо, столбик молока синеватого цвета. Пробы, давшие реакцию с оценкой три и два креста, считают положительными. Эта реакция показательна для проверки благополучия стад (ферм) по бруцеллезу крупного рогатого скота и молока на рынках.

Для выявления бруцелл непосредственно в патологическом материале, а также в объектах окружающей среды предложен прямой метод иммунофлюоресценции (РИФ); непрямой метод позволяет обнаружить антитела в сыворотке крови больных, переболевших или вакцинированных животных.

Аллергический метод. Для аллергической диагностики бруцеллеза овец, коз и свиней используют бруцеллин ВИЭВ, изготовляемый из неагглютиногенного и авирулентного штамма В. abortus В-1. У овец и коз применяют пальцебральную пробу, свиньям препарат вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина развивается воспалительная реакция.

Специфическая профилактика. Противобруцеллезный иммунитет формируется медленно в две фазы: первая фаза – инфекционный, или нестерильный, иммунитет; вторая – постинфекционный, или стерильный, иммунитет. Нестерильный иммунитет обусловлен присутствием возбудителя в организме.

В сыворотке крови больных животных накапливаются вначале IgM, затем IgG, а также неполные (IgA и IgG) антитела. Роль антител в механизме защиты при бруцеллезе неэффективна: присутствие их в организме не препятствует бактериемии. Но они имеют большое диагностическое значение. В первой фазе отмечается угнетение макрофагальной реакции и фагоциты не способны переваривать бруцелл, что и приводит к диссеминации возбудителя по всему организму.

Иммунитет при бруцеллезе клеточный и обеспечивается Т-системой лимфоцитов. Для бруцеллеза характерно развитие гиперчувствительности замедленного типа (аллергия). Инфекционный иммунитет переходит в постинфекционный постепенно и сопровождается освобождением организма от возбудителя, в результате чего может наступить самовыздоровление.

Для специфической профилактики бруцеллеза предложены живые вакцины. Применяют живую вакцину из штамма 19 В. abortus. Этот штамм выделили в 1923 г., в процессе десятилетнего пассирования культуры на картофельном агаре, т.е. был селекционирован иммуногенный мутант. Вакцинация профилактирует аборты и распространение бруцеллеза в стаде, однако сопровождается длительной серопозитивностью привитых животных, что не вполне удовлетворяет практику.

У нас в стране кроме указанной вакцины широко применяют сухую живую вакцину из слабоагглютиногенного штамма 82 . abortus против бруцеллеза крупного рогатого скота; живую вакцину из штамма Рев-1 бруцелл вида мелитензис – против бруцелеза мелкого рогатого скота. Во ВГНКИ разработана инактивироанная адъювант-вакцина из штамма В. abortus KB 17/100, которая создает напряженный иммунитет у крупного рогатого скота, не обладает реактогенными и абортогенными свойствами, не вызывая при этом образования S-аглютининов у вакцинированных животных, что важно для серологической диагностики.

Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. Туши от убоя животных всех видов с клиническими признаками или патологоанатомическими изменениями бруцеллезного характера обезвреживают проваркой.

Санитарную оценку мяса и других продуктов убоя животных, не имеющих клинических признаков и патологоанатомических изменений, свойственных бруцеллезному процессу, но дающим положительные реакции на бруцеллез, проводят в соответствии с действующей инструкцией по борьбе с данным заболеванием (с учетом вида животных и видовой принадлежности бруцелл). Кость при обвалке мяса всех видов животных с клиническими или патологическими признаками бруцеллеза направляют на вытопку пищевых жиров или производство сухих животных кормов.

Говяжьи и свиные уши и ноги, говяжьи губы и свиные хвосты предварительно перед проваркой должны быть ошпарены или опалены, бараньи и свиные головы опалены, желудки ошпарены. Вымя от коров, овец и коз, положительно реагирующих на бруцеллез, но не имеющих клинических признаков бруцеллеза и патологических изменений в туше и органах, выпускают после обезвреживания проваркой. При наличии же клинических признаков бруцеллеза или патологоанатомических изменений бруцеллезного происхождения вымя направляют на утилизацию.

Кишки, пищеводы и мочевые пузыри, полученные от животных, положительно реагирующих на бруцеллез, выдерживают в 1 % солевом растворе, содержащем 0,5 % соляной кислоты, в течение 48 ч при 15-20 ⁰С и жидкостном коэффициенте 1:2. При получении этих органов от убоя животных, имеющих клинические признаки бруцеллеза, их направляют на утилизацию.

Кровь от животных, клинически больных и положительно реагирующих при исследовании на бруцеллез, разрешается использовать на изготовление кормовой муки или технических продуктов.

Шкуры, рога и копыта, полученные от убоя всех видов животных, клинически больных бруцеллезом и реагирующих на бруцеллез, выпускают после дезинфекции.

Молоко от коров, положительно реагирующих на бруцеллез, перерабатывают на топленое молоко или кипятят в течение 5 минут, после чего используют только внутри хозяйства. Молоко, полученное от коров оздоравливаемого стада, запрещается направлять на рынок, в столовые и на маслозавод. Его обезвреживают путем пастеризации в хозяйстве при 70 ⁰С в течение 30 минут или при 85 ⁰С – 20 с. Если нет пастеризатора, то молоко кипятят, после чего вывозят на маслозавод или используют внутри хозяйства.

При поступлени на рынок молока полученное от коров, положительно реагирующих на бруцеллез, его проверяют кольцевой пробой. Если получена положительная или сомнительная реакция, то молоко в продажу не допускают. Его уничтожают в лаборатории ветсанэкспертизы рынка в присутствии владельца и сообщают об этом главному ветеринарному врачу района (города), откуда поступило молоко. Об уничтожении молока и молочных продуктов составляют акт в двух экземплярах, один из которых выдается владельцу, другой остается в документах лаборатории.

9. Возбудитель туляремии

Возбудитель туляремии – франциселлы – очень мелкие полиморфные бактерии. Входят в отдел Cracilicutes, секцию 4 (грамотрицательные аэробные палочки и кокки). Род Francisella представлен двумя видами, один из них – Francisella tularensis – патогенный. Этот вид вызывает природно-очаговую инфекционную болезнь животных – туляремию – характеризующуюся лихорадкой, параличами у молодняка, увеличением лимфатических узлов, абортами.

Бактерию туляремии выделили в 1912 г. Мак-Кой и Чепин при изучении чумоподобного заболевания у сусликов в округе Туляре (Калифорния). Род Francisella назван в честь Френсиса, впервые изучившего биологию этого микроба. Внутри вида F. tularensis различают три географические расы: голарктическую, среднеазиатскую и неарктическую, отличающиеся некоторыми биологическими особенностями.

Морфология. В окрашенных мазках возбудитель туляремии имеет кокковидную или палочковидную форму 0,3-0,7 мкм в длину и 0,2-0,4 мкм в ширину, встречаются более мелкие клетки (0,15 мкм и меньше), способные проходить через бактериальные фильтры. Кокковидные формы чаще находят в культурах, палочковидные – в организме животных. Для бактерии характерен полиморфизм, выявляемый при росте на питательных средах: в препаратах из культур наряду с типичными бактериями могут встречаться шаровидные и нитевидные формы.

Микроб неподвижен, спор не образует, имеет небольшую капсулу; в культурах продуцирует слизь, легко обнаруживаемую при изготовлении мазков.

Возбудитель окрашивается всеми анилиновыми красками, но заметно бледнее других бактерий, грамотрицательный. В мазках-отпечатках из органов павших животных хорошо красится по Романовскому-Гимзе, приобретая сиреневый цвет. В тканях бактерии биполярно не окрашиваются, чем и отличаются от пастерелл.

Культивирование. Бактерия не растет на универсальных питательных средах. Для ее культивирования применяют свернутую желточную среду Мак-Коя (60 % желтка куриных яиц и 40 % физиологического раствора). Используют также среду Френсиса (2,5 % мясопептонного агара, 0,1 % цистина, 1 % глюкозы и 5-10 % дефибринированной кроличьей крови), полужидкую желточную среду Дрожевкиной (10% куриного желтка и 90 % стерильного физиологического раствора), кровяной рыбно-дрожжевой агар с глюкозой и цистином и др.

Туляремийная бактерия – строгий аэроб, оптимум температур 36-37 ⁰C, рН среды 7,2-7,0. На свернутой желточной среде при обильном росте микробы растут в виде блестящего тонкого налета с извилистой («шагреневой») поверхностью; при скудном росте вырастают небольшие блестящие выпуклые колонии или группы колоний. На среде Френсиса культура имеет вид небольших (1-2 мм) круглых, выпуклых, гладких, блестящих, с ровными краями колоний беловатого цвета с голубоватым оттенком; рост отмечается через 2-3 суток. Колонии патогенных штаммов имеют S-форму. В жидких питательных средах туляремийный микроб растет значительно хуже (только на поверхности среды). Бактерии хорошо размножаются также в желточном мешке развивающегося куриного эмбриона.

Биохимические свойства. Бактерия туляремии не обладает выраженной биохимической активностью. Способность сбраживать углеводы и спирты ограничена и может быть достоверно выявлена лишь на специальных плотных средах с пониженным содержанием белка и с определенным рН. Среды Гисса для этой цели непригодны. Микроб ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, в ряде случаев – левулезу и маннозу; не сбраживает лактозу, сахарозу, рамнозу, маннит; образует сероводород и редуцирует тионин, метиленовый голубой, малахитовый зеленый.

Антигенная структура. Патогенные варианты возбудителя туляремии (S-форма) имеют два антигенных комплекса, локализованные на поверхности клетки. Первый из них – Vi-антиген – содержит липиды и белки, определяет вирулентность и иммуногенность микроба; второй – О-антиген – расположен в клеточной стенке и капсулоподобном слое бактерии, термостабильный гликопротеид. Оба эти комплекса обладают аллергенными и антигенными свойствами, индуцируют образование агглютинирующих, преципитирующих и комплементсвязывающих антител, а также гиперчувствительность замедленного типа. Функцию аллергена у этой бактерии выполняет полисахаридно-полипептидный комплекс. Vi-антиген патогенных вариантов возбудителя туляремии обладает сходством с аналогичным антигеном бруцелл.

Устойчивость. В воде или влажной почве при 4 ⁰С сохраняется без снижения вирулентности свыше 4 месяцев, в воде при 20-25 ⁰С – 10-15 суток, в зерне и соломе при температуре ниже 0 ⁰С – до 6 месяцев, при 8-12 ⁰С – 56 суток, при 20-30 ⁰С – не более 20 суток. В замороженном мясе возбудитель жизнеспособен до 93 суток, в молоке и сливках при 8-10 ⁰С – не менее 3 недель, в замороженном молоке – до 104 суток. В замороженных трупах животных, павших от туляремии, – свыше 3 месяцев, в их шкурах при 8-12 ⁰С – более месяца, при 32-33 ⁰С – 1 неделю. Микроб устойчив к высушиванию.

Особенно чувствителен к этиловому спирту (погибает через 0,5-1 минут). Чувствителен к дезинфектантам – лизолу, фенолу, креолину, но наиболее к хлорной извести. Неустойчив ко многим антибиотикам – стрептомицину, левомицетину, тетрациклину, неомицину, канамицину; устойчив к пенициллину.

Патогенность. Бактерия патогенна для зайцев, полевок, домовых мышей, сусликов, крыс. Сельскохозяйственные животные относительно устойчивы к туляремии, заболевают спорадически, болезнь часто протекает в скрытой форме. Наиболее восприимчивы ягнята и поросята, болеют лошади, ослы. У крупного рогатого скота болезнь сопровождается увеличением лимфатических узлов и маститом. Чувствительны буйволы, верблюды, северные олени. Взрослые овцы устойчивы к заболеванию, еще более резистентны козы. Восприимчивы кролики, болезнь у которых протекает без характерных признаков и может иметь сходство с псевдотуберкулезом и хронической формой пастереллеза. Из птиц восприимчивы куры, особенно цыплята. К заражению чувствительны морские свинки и белые мыши.