Файл: chastnaya_sanitarnaya_mikrobiologia.docx

2. Возбудитель паратуберкулеза

Паратуберкулез, или паратуберкулезный энтерит, – хроническая болезнь крупного рогатого скота (реже овец), характеризующаяся сначала периодическим, затем постоянным расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта. Больное животное погибает от прогрессирующего истощения.

На вскрытии характерно утолщение слизистой оболочки в тощей и подвздошной кишках, напоминающее извилины мозга или гофрированной трубки, а также увеличение мезентериальных лимфатических узлов.

Паратуберкулез крупного рогатого скота, овец и коз зарегистрирован во многих странах земного шара и наносит значительный экономический ущерб, особенно племенным и молочным хозяйствам.

Паратуберкулез впервые установил К. Г. Боль (1927), инфекция была занесена в СССР с импортным племенным скотом.

Морфология. Возбудитель Mycobakterium paratuberculosae (бактерия Johne, названа по имени автора, открывшего микроб в 1895 г.) – самая маленькая микобактерия из всей кислотоустойчивой группы микробов; длина ее 0,5-1,5 мкм, ширина 0,2-0,5 мкм, окрашивается по Циль-Нильсену и Граму. В патологическом материале (комки слизи, пораженные части слизистой кишечника) бактерии характерно располагаются в виде глыбок, кучек, редко одиночно или группами по 2-4 клетки. В окрашенных препаратах глыбки видны даже при небольшом увеличении микроскопа.

Культивирование. Получение первичных культур микобактерий паратуберкулеза связано со значительными трудностями. Решающим моментом при выращивании культур является введение в питательную среду материала из убитых туберкулезных или вытяжки из других кислотоустойчивых бактерий – тимофеевой травы (Мус. phlei). В обычных питательных средах микроб не в состоянии ассимилировать необходимые для своего роста вещества, которые имеются в упомянутых экстрактах. Данкин предложил такую благоприятную среду из следующих ингредиентов: бактерийная масса микобактерий тимофеевой травы, печеночный экстракт, глицерин, свежее яйцо и спиртовой раствор краски генцианвиолет.

Особое значение приобрела среда Вишневского, содержащая аспарагин, щавелевокислый аммоний, сернокислый магний, сернокислое железо, глицерин.

Для роста культур благоприятна температура 38 ⁰С. Первые признаки роста с момента посева появляются через 6 недель, иногда – через 7 месяцев. На плотных средах (яичные среды Петраньяни, Гельберта, Левенштейна, агаризированная среда Сотона) вначале вырастают изолированные серовато-желто-белые маленькие колонии, в дальнейшем приобретающие вид сосочков. С течением времени появляется складчатое наложение.

На жидких средах (Данкина, Вишневского, Дорсета, Бокэ, Генлея) образуется нежная беловато-сероватая пленка, которая через 3-4 месяцев культивирования увеличивается в объеме и осаждается на дно пробирки.

Антигенная структура. У микобактерий паратуберкулеза изучена недостаточно. Установлено лишь антигенное родство с Мус. avium.

Устойчивость. Возбудитель паратуберкулеза довольно устойчив к воздействию физико-химических и биологических факторов. В почве и навозе он сохраняется до 10-12 месяцев, в кормах и воде непроточных водоемов – 8-10 месяцев, в моче – 7 суток. Солнечный свет убивает его через 10 месяцев. В молоке, в закрытых сосудах, при нагревании до 63 ⁰С гибнет через 30 минут, при 65 ⁰С – через 25 и при 85 ⁰С – в течение 1-5 минут.

Из дезинфектантов рекомендуют использовать 10 % и 20 % растворы хлорной извести, 5 % растворы формалина, лизола, феносмолина, фенолятов натрия.

Антибиотики, синтетические противотуберкулезные соединения, противомикробные препараты, сульфаниламиды лишь частично угнетают рост микобактерий паратуберкулеза.

Патогенность. Микобактерии паратуберкулеза поражают крупный рогатый скот (особенно молодняк), буйволов, верблюдов, овец и коз. Лошади, мулы и свиньи паратуберкулезом не болеют.

В качестве лабораторных животных служат кролики, хомяки, мыши. Морские свинки, куры используются для сенсибилизации при изучении аллергии и стандартизации изготавливаемых аллергенов. В течение многих месяцев у инфицированных животных отсутствуют характерные клинические признаки и патологические изменения. Полагают, что в патогенезе инфекции большое значение имеет предшествующая сенсибилизация организма бактериями Ионе. Инкубационный период исключительно продолжительный – от нескольких месяцев до двух лет и более. Паратуберкулез представляет собой алиментарную инфекцию. Поскольку возбудитель выделяется с калом больных животных, заражение происходит через инфицированные корма, воду, подстилку, пастбище.

Патогенез. После попадания возбудителя болезни в пищеварительный канал он проникает через поврежденный эпителий в строму ворсинок тонких кишок и фагоцитируется ретикулярными клетками. Однако при фагоцитозе микобактерии не перевариваются (из-за наличия в оболочке стеариновых кислот и других воскоподобных веществ), а размножаются в них. В результате этого фагоциты сильно увеличиваются в размере и объединяются в кле­точные скопления. Внутриклеточное размножение микробов разрушает клетки тканей, а освободившиеся микробы заново фагоцитируются. Возникают крупные скопления микробов и пораженных макрофагов, вызывая атрофию клеток ворсинок кишечной стенки и брыжеечных лимфоузлов и характерное пролиферативное воспаление. Это приводит к нарушению ферментативной, секреторной и всасывающей функции кишечника, а также минерального, солевого и водного обмена, в результате чего происходит интоксикация и истощение организма. У молодняка может возникать бактериемия.

Эпизоотологические данные. Паратуберкулез крупного рогатого скота, овец и коз зарегистрирован во многих странах мира и наносит значительный экономический ущерб, особенно племенным и молочным хозяйствам. В нашей стране паратуберкулез впервые установил К. Г. Боль (1927), инфекция была занесена с импортным племенным скотом. Паратуберкулезом болеют преимущественно крупный рогатый скот и овцы, реже – буйволы, верблюды и очень редко – козы, олени, яки. Лошади, мулы и свиньи паратуберкулезом не болеют. К паратуберкулезу восприимчив молодняк с 4-5 месячного возраста. Однако в связи с продолжительным инкубационным периодом и латентным течением клинически больные животные обнаруживаются чаще после 1-2 отела.

Источник возбудителя – больные животные и бактерионосители, постоянно выделяющие возбудителя с фекалиями (через 3-5 месяцев после заражения), мочой, плодными водами, молозивом, молоком. Микробовыделителями являются не только клинически больные животные, но и переболевшие бессимптомно, то есть животные, реагирующие по РСК и на аллерген. Факторы передачи возбудителя – контаминированные возбудителем вода, подстилка, почва около неблагополучной фермы, пастбища, предметы ухода. Заражение происходит алиментарным путем – с водой, кормом. Телята и ягнята заражаются в основном через молоко, молозиво при выпойке или сосании вымени. Имеются данные о внутриутробном заражении телят – вертикальная передача возбудителя болезни (Э. М. Нымм, 1984; И. А. Бакулов, В. А. Ведерников с соавт., 1997). Факторы, способствующие возникновению и распространению болезни – неполноценное кормление (большое количество кислых кормов, минеральное голодание), неудовлетворительные условия содержания (переохлаждение, перегревание), глистная инвазия.

Болезнь возникает в любое время года, проявляется спорадически, в виде небольших вспышек. Паратуберкулез чаще регистрируют в местностях с кислыми, заболоченными, засоленными почвами, где корма бедны солями кальция и фосфора. Единичные случаи паратуберкулеза описаны у жвачных животных в зоопарках. Летальность может достигать 10-25 %.

Предубойная диагностика. Обнаруживают вялость, животные много лежат, худеют (несмотря на сохранение аппетита), кожа грубеет, шерсть взъерошивается, поносы чередуются с нормальными испражнениями, снижается удой. Основной признак болезни – профузный понос; при этом фекальные массы водянистые, зеленоватого или коричневого цвета (с примесью слизи и крови, пузырьков газа), зловонного запаха. Температура тела остается в пределах нормы. В межчелюстном пространстве, в области подгрудка и нижней части живота появляются отеки. Вследствие длительного поноса наступает сильное обезвоживание организма, в результате глаза западают в орбиту, объем мышц уменьшается, особенно тазового пояса и задних конечностей. Иногда наблюдается паралич сфинктера ануса; каловые массы выделяются непроизвольно и струей. Задняя часть тела животного запачкана испражнениями. У коров прекращается секреция молока.

У овец паратуберкулез чаще всего протекает скрыто или со стертыми клиническими признаками. Появляются те же признаки, что и у крупного рогатого скота, но фекалии не жидкие и водянистые, а тестообразные и без запаха.

Послеубойная диагностика. Патологические изменения при паратуберкулезе в основном локализуются в кишечнике, чаще всего – в тощей и подвздошной кишках, и в мезентериальных лимфоузлах. В пораженных участках стенки кишки утолщены в 5-20 раз, слизистая оболочка покрыта вязкой, густой, серовато-белого цвета слизью, собрана в плотные продольные и поперечные складки белого цвета, напоминающие завитки каракуля. Гребни складок часто гиперемированы и усеяны точечными или полосчатыми кровоизлияниями. Мезентериальные лимфоузлы увеличены, на разрезе влажные, имеются ограниченные желтовато-белые саркомоподобные узелки. Иногда обнаруживают дегенеративные изменения в печени, почках и сердце.

У овец бывает утолщение и ломкость стенок тонкого отдела кишечника слепой кишки и начала ободочной кишки. Лимфатические узлы тонкого отдела кишечника часто набухшие и иногда содержат единичные обызвествленные очажки.

В сомнительных случаях прибегают к бактериологическому исследованию. Материалом исследования могут быть фекалии, соскобы со слизистой оболочки пораженного участка кишечника и измененные лимфатические узлы. Из материала делают мазки на предметном стекле и окрашивают по Циль-Нильсену. Рекомендуется подвергать микроскопированию не менее 10 мазков с просмотром до 5000 полей зрения.

Лабораторная диагностика. Бактериологический диагноз является решающим, особенно в доклиническом периоде болезни. Его устанавливают в основном микроскопией испражнений больного животного. Из фекалий собирают комочки слизи или кровяные сгустки, размазывают их тонким слоем на предметном стекле и после фиксации на пламени окрашивают по Циль-Нильсену. Просмотру подлежат не менее 8-10 препаратов, ввиду того, что выделение с фекальными массами бактерий Ионе происходит периодически. При отрицательном результате необходимы повторные исследования через различные промежутки времени.

При исследовании фекалий и слизистой оболочки кишечника следует учитывать, что в препарате могут встречаться кроме бактерий Ионе и другие кислотоустойчивые микобактерии: возбудители туберкулеза или атипичные микобактерии. Для дифференциации высевают материал после обработки 5 % раствором серной кислоты на элективные и обычные питательные среды. Культуры атипичных микобактерии вырастают относительно быстро в течение первых 3 суток, иногда через 10 суток. Микобактерии туберкулеза, находящиеся в материале, отличаются от паратуберкулезных своим расположением, а также патогенностью для лабораторных животных.

Для посмертной диагностики от павшего или убитого животного в лабораторию направляют отдельные участки пораженного кишечника и увеличенные брыжеечные лимфатические узлы, консервированные в стерильном 30 % растворе глицерина. Кал пересылают в стерильной закрытой посуде (пробирках, флакончиках).

Биопроба на лабораторных животных микобактериями ясных результатов не дает, поэтому ее практически не используют.

Серодиагностика. При паратуберкулезе, особенно в период его клинического проявления, в сыворотке крови животных при помощи РСК можно обнаружить комплементсвязывающие антитела. В качестве антигена используют спиртовые, ацетоновые или эфирные экстракты бактерий Ионе, обработанные по специальным методикам. Особое диагностическое значение эта реакция приобретает в связи с тем, что она подтверждает клинические формы паратуберкулеза у 85 % исследуемых животных, т. е. в такой период, когда аллергическим методом зачастую невозможно подтвердить диагноз. Основной недостаток РСК – ее отрицательные результаты (в большинстве случаев) в доклинический период, а также неспецифические реакции у животных, больных туберкулезом, возбудители которого по антигенной структуре близки к бактерии Ионе.

Аллергическая диагностика. Паратуберкулезный скот реагирует на альттуберкулин для птиц в 80 % и на паратуберкулин (ионин) в 94 % случаев. Паратуберкулин, изготовленный Вишневским, представляет собой оригинальный препарат. Это фильтрат убитой кипячением 2-3 месячной культуры паратуберкулезных микобактерии, выращенной на специальной синтетической безбелковой среде. Кроме этого используют альттуберкулин для птиц и стандартный сухой очищенный (ППД) туберкулин для птиц. Крупный рогатый скот исследуют двойной внутрикожной аллергической пробой. Реакцию учитывают после первого введения через 48 ч с помощью измерения величины кожной складки кутиметром. Положительной реакцией считают появление на месте введения туберкулина разлитого отека без строгой конфигурации и границ, размерами приблизительно 35х45-100х120 мм и больше, напряженного в центре и тестоватой консистенции по краям, горячего на ощупь и болезненного при пальпации.

При сомнительной реакции – отек со слабо, выраженными воспалительными признаками, утолщение кожной складки составляет от 5 до 7 мм сверх нормы. Неспецифические ограниченные безболезненные утолщения участка кожи, если даже толщина складки превышает норму, за типичные аллергические реакции не признают. Реакцию, появившуюся ранее 48 ч после инъекции туберкулина, не учитывают.