Файл: chastnaya_sanitarnaya_mikrobiologia.docx

Послеубойная диагностика. Патологоанатомические изменения в начальной стадии развития болезни обнаруживаются с трудом. В этом случае отсутствуют характерные изменения, которые наблюдаются в трупе.

У крупного рогатого скота важнейший патологоанатомический признак – образование в подкожной клетчатке кровянисто-студенистых инфильтратов (отеков) различных размеров. Подобные отеки чаще всего локализуются в области живота, лопаток, грудной части, на вымени, иногда в области средостения между листками плевры, в брыжейке, кишечнике, на слизистой оболочке полости рта, вокруг лимфоузлов в подчелюстном пространстве. В толще мышц шеи и подгрудка отмечают кровоизлияния. В местах отека в процесс вовлекаются регионарные лимфатические узлы. Они увеличены, отечны, гиперемированы, на разрезе кирпично-красного или темно-красного цвета, с наличием точечных или полосчатых (часто гнездных) кровоизлияний. Ткань вокруг пораженного лимфатического узла инфильтрирована. Селезенка сильно увеличена. Ее пульпа размягчена, соскоб с поверхности обильный, дегтеподобный. Печень дряблая, почки с многочисленными кровоизлияниями. При кишечной форме сибирской язвы у свиней чаще всего поражается двенадцатиперстная и тощая кишки. Слизистая оболочка гиперемирована, на фоне чего отмечаются округлые или продолговатые фокусы темно-красного цвета с покрытием пленками фибрина. В центре фокуса иногда образуются некротические очаги. Серозная оболочка кишечника с очагами кровоизлияния. Лимфатические узлы брыжейки имеют вид шнуров желтого или темно-коричневого цвета.

Атипичные формы сибирской язвы у крупного рогатого скота и особенно у свиней встречаются часто и затрудняют диагностику. Поэтому во всех сомнительных случаях необходимо проводить бактериологическое исследование.

Ставя диагноз на сибирскую язву, следует дифференцировать ее от эмфизематозного карбункула, пастереллеза и пироплазмоза. В случае заболевания животного эмфизематозным карбункулом отмечается более интенсивная инфильтрация и деструкция пораженной ткани с большим скоплением газов в отечной ткани. Отличительный признак поражения ткани при пастереллезе – отсутствие геморрагии и нормальный размер селезенки. Пироплазмоз не дает геморрагического воспаления в лимфоузлах, пульпа селезенки на разрезе плотная и не стекает, наблюдается общая желтушность.

Лабораторная диагностика. При подозрении на сибирскую язву запрещается вскрывать трупы павших животных. Для лабораторного исследования чаще всего направляют ухо павшего животного или толстые нефиксированные мазки крови из надреза сосуда на предметном стекле. При вынужденном убое или подозрении на сибирскую язву во время вскрытия осторожно отбирают кусочки селезенки, печени, измененные лимфоузлы, от трупов свиней – кусочки отечных тканей в области глотки и заглоточные лимфоузлы. Материал должен быть свежим: в разложив­шихся тканях бацилла антракса подвергается лизису. Направляют также пробы почвы, фуража, воды, шерсти и кожевенно-мехового сырья; объектами для серологического исследования в реакции преципитации служат пробы кожевенно-мехового сырья и разложившиеся ткани.

Исследование проводят по обычной схеме: бактериоскопия мазков, выделение и изучение свойств чистой культуры, биопроба на лабораторных животных, при необходимости серологические исследования – реакция преципитации и иммунофлюоресцентный анализ.

Бактериоскопия. Из патологического материала готовят мазки, часть которых красят по Граму и обязательно на наличие капсулы – по Михину, Ребигеру, Ольту и др. Важным диагностическим признаком является обнаружение типичных по морфологии капсульных палочек.

Посев на питательные среды. Исходный материал засевают в МПБ и на МПА (рН 7,2-7,6), посевы инкубируют при 37 ⁰С в течение 18-24 ч; при отсутствии роста выдерживают в термостате еще 2 суток. Культуры просматривают, определяют их типичность, готовят препараты, микроскопируют. В мазках из культур обнаруживают бескапсульные палочки, расположенные длинными цепочками, и споры.

Биологическая проба. Заражают белых мышей, морских свинок, кроликов одновременно с посевом материала на питательные среды. Белым мышам вводят подкожно в заднюю часть спины (по 0,1-0,2 мл), морским свинкам и кроликам – под кожу в область живота (по 0,5-1,0 мл). Мыши погибают через 1-2 суток, морские свинки и кролики – через 2-4 суток. Павших животных вскрывают, делают мазки и посевы из крови, сердца, селезенки, печени и инфильтрата на месте инъекции исследуемого материала.

Идентификация бациллы антракса. В природе существует несколько видов аэробных споровых сибиреязвенноподобных сапрофитов: В. cereus, В. megaterium, B. mycoides и B. subtilis. Так как они по морфологии и культуральным признакам во многом сходны с бациллой антракса, то часто при лабораторной диагностике возникает необходимость решить вопрос: выделена ли культура возбудителя сибирской язвы или подобного ему сапрофита.

Идентификацию и дифференциацию культуры проводят на основании главных и дополнительных признаков. К главным относят патогенность, капсулообразование, определение подвижности, тест «жемчужного ожерелья», пробу со специфическим фагом, иммунофлюоресцентный тест, к дополнительным – тесты на отсутствие гемолиза и лицетиназной активности, образование фосфатазы.

Бацилла антракса патогенна для лабораторных животных. Сибиреязвенноподобные сапрофиты не вызывают их гибель, за исключением В. cereus, которая убивает белых мышей при внутрибрюшинном заражении. Массивную, с четкими контурами капсулу, в организме образует только возбудитель сибирской язвы.

Тест «жемчужного ожерелья», предложенный в 1953 г. Иенсеном и Клеемейером, основан на способности пенициллина угнетать синтез клеточной стенки бациллы антракса и образовывать сферопласты. Испытуемую трехчасовую бульонную культуру высевают на МПА в чашки Петри: в первой чашке содержится 0,5, во второй – 0,05 ЕД пенициллина в 1 мл среды, третья – контрольная. Посевы инкубируют 3 ч при 37 ⁰С. На агаре с пенициллином бацилла антракса растет в виде цепочек, состоящих из шарообразных клеток, напоминающих ожерелье из жемчуга. Сибиреязвенноподобные сапрофиты на агаре с пенициллином этого феномена не образуют.

Проба с бактериофагом (лизабельность фагом). Сибиреязвенный фаг, взаимодействуя с гомологичной культурой, вызывает ее лизис. Эту высокоспецифичную реакцию применяют для идентификации бациллы антракса, а также дифференциации ее от ложносибиреязвенных бацилл. В качестве индикатора в России выпускают фаг ВНИИВВиМ, грамма-фаг МВА.

Иммунофлюоресцентный тест. Идентификация возбудителя сибирской язвы при помощи флюоресцирующих антител – ориентировочный метод, который требует дополнительного изучения вирулентности, капсулообразования, фагочувствительности.

Подвижность устанавливается микроскопически или путем посева культуры уколом в столбик 0,3 % МПА. Неподвижные культуры растут только по ходу укола, подвижные – дают диффузный рост. Возбудитель сибирской язвы неподвижен, тогда как многие спорообразующие аэробные сапрофиты подвижны.

Гемолитическая активность не может быть надежным критерием дифференциации: как правило, бациллы антракса не гемолизируют эритроциты барана или же лизируют их очень медленно и незначительно, но этот признак у разных штаммов вариабелен.

Лецитиназная активность у возбудителя сибирской язвы низкая: медленно свертывает или вообще не свертывает желток куриного яйца. В. cereus интенсивно синтезирует лецитиназу и вызывает свертывание желтка через 6-10 ч. Не образует бацилла антракса и фосфатазу, в то время как сапрофитные споровые аэробы ее продуцируют.

Серологическое исследование. Для обнаружения сибиреязвенных антигенов применяют реакцию преципитации по Асколи. Эту реакцию используют для исследования на сибирскую язву кожевенного и мехового сырья, загнившего патологического материала, в котором происходит лизис бациллы антракса, а также дня исследования свежего патологического материала и серологической идентификации выделенных культур. РП по Асколи – достоверный и широко применяемый в практике тест серологической диагностики сибирской язвы. В качестве серологического теста, главным образом для изучения антигенного спектра бациллы антракса, применяют реакцию диффузионной преципитации (РДП).

Для идентификации и дифференциации возбудителя сибирской язвы от сходных микроорганизмов применяют селективную агаровую среду для выявления щелочной фосфатазы по изменению цвета колоний после воздействия паров аммиака. При этом сибиреязвенные колонии цвет не изменяют. С целью дифференциации от сапрофитов рекомендована реакция диск-преципитации, которая сочетает бактериологическую и серологическую диагностику.

Для выявления свежих случаев и ретроспективной диагностики сибирской язвы у животных предложен аллерген ВНИИВиМ.

Специфическая профилактика. Соматические полисахариды и капсульные полипептиды глутаминовой кислоты бациллы антракса не способны обусловить синтез защитных антител. Эту функцию у бациллы антракса выполняет протективный антиген: будучи одним из факторов патогенности, он обусловливает формирование иммунитета к этой инфекции по типу антитоксического.

В настоящее время защитные антитела обнаруживают при помощи РСК, РДП и непрямого варианта метода флюоресцирующих антител в сыворотке крови животных, вакцинированных сибиреязвенным протективным антигеном или живыми споровыми вакцинами. Переболевание животного сибирской язвой или же его вакцинация сопровождаются развитием гиперчувствительности замедленного типа. В результате естественного заражения и переболевания сибирской язвой у животных возникает длительный иммунитет.

Активная защита животных от сибирской язвы путем вакцинации – надежное средство профилактики данного заболевания. С этой целью применяют живые споровые сибиреязвенные вакцины.

Н.Н. Гинсбург в 1940 г. селекционировал из культуры вирулентного штамма вакцинный бескапсульный мутант СТИ-1. С 1942 г. вакцину СТИ, приготовленную из этого варианта, используют для профилактики сибирской язвы у животных. Она зарекомендовала себя как высокоиммунный препарат. В настоящее время вакцину СТИ в споровой форме применяют для вакцинации людей против сибирской язвы. Иммунитет наступает через 10 суток и длится не менее 12 месяцев.

В настоящее время животных иммунизируют вакциной из штамма 55 (ВНИИВиМ). Вакцину вводят подкожно, начиная с 3 месячного возраста, повторно вакцинируют через 6 месяцев. Напряженность иммунитета сохраняется в течении 1 года. Затем животных иммунизируют повторно.

В практике используют также живую вакцину ВГНКИ, ассоциированную живую вакцину против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота.

Для лечения и пассивной профилактики применяют антибиотики, противосибиреязвенную гипериммунную сыворотку и гамма-глобулин. Пассивный иммунитет наступает через 6 часов и сохраняется до 14 суток.

Ветеринарно-санитарная оценка и мероприятия. При возникшем подозрении на сибирскую язву дальнейший убой животных прекращают. От подозрительной туши берут часть селезенки, измененные части ткани и пораженные лимфатические узлы для микробиологического исследования. До получения результатов тушу и все органы изолируют в обособленное место.

При установлении микроскопией возбудителя сибирской язвы тушу со всеми органами и шкурой, не ожидая результатов бактериологических исследований, сжигают.

Все продукты, полученные от убоя других животных, смешанные с продуктами убоя от больных сибирской язвой, тоже сжигают. Шкуры здоровых животных, бывшие вместе со шкурой от животного, больного сибирской язвой подлежат дезинфекции в порядке, предусмотренном «Наставлением по дезинфекции сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и обработке».

После удаления сибиреязвенной туши и других продуктов убоя убойный цех немедленно дезинфицируют согласно инструкции о мероприятиях против сибирской язвы. Среди рабочих проводят экстренную профилактику против сибирской язвы в соответствии с инструкцией и методическим указанием по лабораторной и клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей, утвержденной медицинской службой.

Другие туши и продукты убоя, подозреваемые в обсеменении возбудителем сибирской язвы по ходу технологического процесса, немедленно подвергают обезвреживанию путем проваривания, но не позднее чем через 6 ч с момента убоя: в открытых котлах – в течение 3 ч с начала закипания, в закрытых – при давлении пара 0,5 атм. – 2,5 ч. Если провести обезвреживание в указанный срок невозможно, эти туши изолируют в помещение с температурой не выше +10 ⁰С, а затем направляют на обезвреживание, как указано выше, но не позже чем через 48 ч с момента убоя. В противном случае все туши животных и субпродукты, подлежащие обезвреживанию, утилизируют или сжигают. Туши, обсеменение которых возбудителем сибирской язвы по ходу технологического процесса исключается, направляют на промпереработку.

При отрицательных результатах микробиологического исследования тушу и органы, подозреваемые в заражении сибирской язвой, оставляют в изоляции до получения заключения о результатах микробиологического исследования. Необходимость проведения других мероприятий в цехе определяет ветеринарный врач. Когда бактериологическое исследование подтвердит диагноз на сибирскую язву, санитарную оценку всех продуктов убоя проводят так же, как описано выше.