Файл: chastnaya_sanitarnaya_mikrobiologia.docx

Молоко свертывается медленно (через 3-5 суток), пептонизация сгустка казеина не происходит.

Биохимические свойства. Ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу, левулезу и салицин, не разлагает глицерин и маннит. Очень редко разлагает сахарозу.

Токсинообразование. С. septicum синтезирует сложный высокоактивный экзотоксин. Токсин может быть выделен из фильтрата культур на бульоне Мартена (рН 7,6-7,8), на средах из кислотного и ферментативного гидролизата казеина.

В составе токсина обнаруживают четыре растворимых компонента: α, β, γ и δ. α-токсин – летальный, некротический и гемолитический фактор, скорее всего фермент, не относящийся к лецитиназам, гемолизирует эритроциты овцы в течение 60 минут в растворе без сахарозы. β-токсин – кислородолабильный гемолизин, представляет собой фермент дезоксирибонуклеазу; вызывает быстрый гемолиз эритроцитов; нейтрализуется антисывороткой С. perfringens. γ-токсин – фермент гиалуронидаза. δ-токсин – кислородостабильный гемолизин, лизирующий эритроциты барана, лошади и человека. В культуральных фильтратах С. septicum кроме токсических компонентов обнаружены также фибринолизин и коллагеназа, которые усугубляют деструктивные процессы при газовой гангрене.

Антигенная структура. У С. septicum выделены О- и Н-антигены. Установлена общность споровых антигенов у С. septicum и С. chauvoei, но их четко дифференцируют по О-антигену. С помощью Н-анигена внутри вида С. septicum выявлено 6 сероваров.

Устойчивость. Вегетативные формы микроба быстро гибнут под влиянием различных факторов окружающей среды; и довольно чувствительны к кислороду. Споры относительно устойчивы. В почве возбудитель может вегетировать и сохраняется годами.

Патогенность. Вызывает газовую гангрену у животных и человека, а также брадзот овец. К заражению чувствительны лошади, крупный рогатый скот, овцы, свиньи. Патогенен для всех лабораторных животных, но в основном для биопробы используют морских свинок. Животные, зараженные подкожно или внутримышечно, погибают через 8-20 ч с признаками газового отека. На месте инъекции у них легко снимается шерсть, происходит выпотевание красноватой жидкости. При вскрытии кожа легко отделяется, подкожный слой красного цвета, мышцы отечны, геморрагично инфильтрированы и пропитаны пузырьками газа. В грудной и брюшной полостях скапливается значительное количество жидкости. Кишечник вздут.

Культуру легко выделить из крови сердца и из печени.

Clostridium perfringens. Открыли и описали в 1892 г. Уэлч и Неттал. Широко распространен в природе и встречается повсеместно, особенно часто его обнаруживают в почве, богатой гумусом. Патогенные штаммы микроба выделяют из почвы, загрязненной фекалиями животных. Основной резервуар патогенных штаммов – здоровые животные, в желудочно-кишечном тракте которых С. perfringens размножается и выделяется с фекалиями в окружающею среду. Так происходит загрязнение кормов, пастбищ, почвы, вначале вегетативными формами, а затем спорами: микроб быстро спорулирует и длительное время сохраняется.

С. perfringens – самый нетребовательный анаэроб, очень актив­ный в биохимическом отношении и весьма патогенный.

Морфология. С. perfringens всех шести сероваров – неподвижные, без жгутиков, с закругленными концами, довольно толстые палочки длиной 4-8 и шириной 0,6-0,5 мкм. Под воздействием различных факторов (антибиотики, состав среды и др.) форма бактерий сильно изменяется: в культуре наряду с типичными клетками обнаруживают короткие толстые палочки, иногда кокковидной формы, или же длинные нити до 100-145 мкм. Палочки нередко бывают изогнутыми.

В организме животных микроб образует капсулу, которая окружает тело микроба в виде светлого ободка, хорошо видного при окраске простым способом. У вирулентных штаммов капсула шире и они более резистентны к фагоцитозу. Капсула сохраняется при выращивании культур на питательных средах, содержащих нативный белок. При длительном хранении или после частых пересевов на среды, бедные нативным белком, способность к образованию капсулы утрачивается.

При выращивании на щелочных средах, богатых белками и не содержащих углеводы, бактерии образуют крупные овальные центральные или субтерминальные споры.

Хорошо красится основными красками. В культурах грамположительная.

Культивирование. С. perfringens не относится к строгим анаэробам. В среде Китта-Тароцци дает равномерную муть и газообразование уже через 3-4 ч после посева. Газообразование происходит за счет сбраживания глюкозы и изомальтозы при расщеплении гликогена мышц или печени, находящихся в среде. Через 3-5 суток среда просветляется и на дно выпадает обильный белый осадок. Культура издает запах масляной кислоты. Рост также можно получить на простом бульоне с глюкозой. При росте на кровяном агаре через 12-18 ч образуются мелкие (до 2-4 мм) колонии, окруженные обширной зоной гемолиза, которые под влиянием кислорода приобретают оливковый или зеленоватый цвет. Колонии круглые, сочные, куполообразные, с гладкой блестящей поверхностью и ровным краем.

На молоке через 8-10 ч появляется плотный губчатый сгусток, часто приподнятый газом до пробки, молочная сыворотка прозрачная. При росте на среде Вильсона-Блера в результате восстановления железа уже через 6-8 ч вырастают черные колонии в толще среды, так как среду заливали после посева слоем МПА для создания анаэробных условий. При этом в чашке отмечается сильное газообразование. Мозговая среда не чернеет.

Биохимические свойства. С. perfringens обладает протеолитическими свойствами. Свернутую сыворотку и вареные кусочки мяса разжижает медленно – на 2-7-е сутки. Однако у большинства штаммов серовара А протеолитическая активность выражена в значительной степени за счет ферментов, расплавляющих через 24 ч желатин. Характерное свойство для С. perfringens – способность свертывать лакмусовое молоко с образованием сгустка кирпичного цвета и полным просветлением молочной сыворотки. Все штаммы сбраживают, с образованием кислоты и газа, глюкозу, галактозу, мальтозу, лактозу, левулезу, сахарозу и не ферментируют маннит и дульцит. Некоторые штаммы могут разлагать глицерин и инулин.

Токсинообразование. С. perfringens вырабатывает сложный экзотоксин, образующий свыше 15 токсических факторов.

К основным токсическим факторам относят следующие: альфа-токсинфосфолипаза (лецитиназа С) – один из главных факторов, обладающий летальным, некротическим, гемолитическим и цитопатогенным действиями; бета-токсин – летальный некротический фактор; гамма-токсин – летальный, не обладающий гемолитической активностью, фактор; дельта-токсин – летальный и гемолитический яд; эпсилон-токсин – летальный некротический протоксин, активирующийся трипсином; тета-токсин обладает резко выраженными гемолитическими и в слабой степени летальными и некротическими свойствами; йота-токсин – летальный, некротический протоксин, активирующийся трипсином; каппа-токсин представлен коллагеназой, действующей на нативный коллаген; лямбда-токсин – желатиназа, действующая на денатурированный коллаген и желатин; ми-токсин – гиалуронидаза; ни-токсин – дезоксирибонуклеаза.

В составе экзобелков возбудителя обнаружены нейраминидазный и плазмокоагулазный компоненты, а также фибринолитический фермент. Сложный состав экзопродуктов бактерий этого вида определяет его разностороннее действие и спектр патогенности.

Антигенная структура. На основании антигенного состава токсических факторов различают шесть сероваров С. perfringens: А, В С, D, Е и F.

Серовар А (С. welchii) вызывает газовую гангрену (злокачественный отек) у людей и животных, а штаммы, образующие энтеротоксин, – пищевые токсикоинфекции. Вызывает энтеротоксемию телят и поросят, а также некротический мастит овец, коз и крупного рогатого скота. Синтезирует альфа-, тета- и каппа-токсины.

Серовар В (Lamb dysentery bacillus) вызывает анаэробную дизентерию (некротический энтерит) ягнят, козлят, телят, поросят, жеребят и цыплят. В числе токсических компонентов обнаруживают альфа-, бета-, эпсилон-токсины, а также протеиназу и гиалуронидазу.

Серовар С (В. paludis) вызывает геморрагическую энтеротоксемию овец, иногда энтеротоксемию телят, ягнят, поросят, коз и верблюдов. Синтезирует альфа- и бета-токсины.

Серовар D (В. ovitoxicus) – возбудитель энтеротоксемии овец («мягкая почка»), выделяют также при энтеротоксемии коз, телят и при «травяной болезни» у лошадей. Синтезирует альфа- и эпсилон-токсины.

Серовар Е (С.perfringens typ E) выделяют при энтеротоксемии телят и ягнят. Синтезирует альфа- и йота-токсины, а также активные коллагеназу и протеиназу.

Серовар F (В. enterotoxicus) описан как возбудитель некротичес­кого энтерита людей, выделяет альфа- и бета-токсины.

Устойчивость. Вегетативные клетки малоустойчивы, резистентность же спор, напротив, очень высокая. Споры различных штаммов серовара А выдерживают нагревание при 100 ⁰С в течение 1-3 ч.

Патогенность. Все серовары С. perfringens способны вызывать газовую гангрену у человека и животных. Отдельные варианты являются возбудителями специфических инфекционных болезней у животных различных видов: анаэробной дизентерии ягнят, энтеротоксемии овец, телят и др.

В экспериментальных условиях весьма чувствительны к заражению голуби, воробьи, морские свинки, более устойчивы кролики, белые мыши, крысы.

Clostridium novyi (С. oedematiens). Выделил Нови в 1883г. из трупа морской свинки. Этиологическую роль этого вида бактерий как возбудителя газовой гангрены установили в 1915 г. Вейнберг и Сеген.

Морфология. Крупная полиморфная прямая или слегка изогнутая с закругленными, иногда обрубленными концами, палочка длиной 4-8 и шириной 1-1,5 мкм; бактерии составляют короткие цепочки из 3-5 клеток и более. Капсул не образует. В молодых культурах палочки подвижны (перитрихи), в присутствии кислорода подвижность быстро теряется. Образует круглые или овальные субтерминальные споры, которые обычно обнаруживаются через 24 ч роста культуры. Хорошо окрашиваются спиртово-водными растворами обычных анилиновых красок. Молодые вегетативные клетки грамположительные, в старых культурах – грамотрицательные.

Культивирование. С. novyi – один из строгих анаэробов. Оптимальная температура 37 ⁰С, рН 7,8. В среде Китта-Тароцци дает обильный рост с помутнением среды и слабым газообразованием. Культуры издают неприятный запах. Время инкубирования около 48 ч. В последующем бульон просветляется и на дне образуется хлопьевидный осадок. На кровяном агаре с глюкозой растет в виде шероховатых серого цвета колоний с неправильными бахромчатыми краями и отростками, образующими на периферии колоний переплетенные нити. Колонии окружены зоной гемолиза. В глубине столбика агара с глюкозой колонии имеют форму чечевицы, комочков ваты, хлопьев, часто с желтоватым или коричневатым центром. Через 36-48 ч с момента посева можно наблюдать разрыв агара за счет образования газов.

Мозговая среда не чернеет. Молоко свертывается медленно с выпадением мелких сгустков, пептонизация их не наступает.

Биохимические свойства. Сахаролитические свойства выражены слабо и различны у отдельных сероваров. С. novyi сероваров А, В, и С ферментирует глюкозу, фруктозу и мальтозу, а серовар D – только глюкозу; глицерин разлагают все серовары, кроме некоторых штаммов серовара В. Способность разлагать углеводы неоднозначна (в зависимости от штамма). Протеолитические свойства выражены слабо.

Токсинообразование. С. novyi в организме и при росте на элективных питательных средах синтезирует и выделяет очень активный и сложный токсин из восьми компонентов. К числу более изученных относят альфа-, бета-, гамма- и дельта-токсины. Альфа-токсин – термолабильный, летальный, некротический, капиллярный яд; вызывает некроз тканей, их отек и гибель животных. Бета-токсин – фосфолипаза С (лецитиназа) обладает некротическим, гемолитическим и летальным действием. Гамма-токсин – фосфолипаза D; некротизирующий и гемолитический токсин. Дельта-токсин – кислородолабильный.

Экзотоксин С. novyi по активности превосходит токсины других возбудителей газовой гангрены: сильнее угнетает фагоцитоз и обладает гемолитическим действием, которое нейтрализуется специфической антитоксической сывороткой, ему присущи летальные и некротические свойства. Токсин разрушается при нагревании до 50 ⁰С в течение 30 минут.

Микроб также образует патогенные ферменты – гиалуронидазу, фибринолизин, дезоксирибонуклеазу, протеиназы.

Антигенная структура. По составу растворимых антигенов токсина различают четыре серовара С. novyi: А, В, С и D.