Файл: Practicum_po_microbiologii.doc

Раздел II. Основы санитарной микробиологии

Практическая санитарная микробиология устанавливает состав микрофлоры внешней среды – воздуха, почвы, воды, пищевых продуктов, кормов и др. с целью их гигиенической характеристики. Оценка этих показателей связана не только с обнаружением в этих объектах патогенных бактерий, но и в значительной степени с присутствием санитарно-показательных микроорганизмов.

Исследуемые продукты (объекты) оценивают по результатам ряда санитарно-микробиологических тестов с учетом органолептических биохимических и других показателей. Поэтому государственные стандарты и технические условия включают микробиологические нормы лишь как один из элементов, характеризующих исследуемые объекты.

Общие принципы санитарно-биологической оценки исследуемых объектов (продуктов) сводится к следующему:

1. Отбор проб для исследования.

2. Общий количественный учет микроорганизмов в определенных объемных или весовых единицах исследуемых объектов (продуктов).

Принято считать, что чем выше микробная обсемененность объекта внешней среды, тем больше вероятность присутствия в них патогенных или условнопатогенных микроорганизмов.

Для количественного учета микроорганизмов применяют в основном прямой подсчет микроорганизмов и определение общего микробного числа (ОМЧ). Этот метод позволяет учитывать только живые микроорганизмы. Вначале в зависимости от предполагаемого загрязнения готовят десятикратные разведения исследуемого материала на стерильном физиологическом растворе или водопроводной воде. Из последних двух разведений засевают по 1 мл и заливают расплавленной охлажденной до 45°С плотной питательной средой, чаще всего МПА.

Культивирование посевов производят при 37°С в течение 24-48 часов (или при 22°С 72 часа).

По количеству выросших колоний судят о степени микробной загрязненности исследуемого объекта (продукта).

3. Определение санитарно-показательных микроорганизмов в исследуемых объектах (продуктах).

Санитарно-показательными (или индикаторными микроорганизмами) называют некоторые условнопатогенные микробы – представители облигатной нормальной микрофлоры животных и человека. Обнаружение этих микроорганизмов во внешней среде свидетельствует о фекальном или воздушно-капельном загрязнении выделениями животных или человека.

Выявление фекального или воздушно-капельного загрязнения исследуемого объекта позволяет установить его потенциальную опасность для животных и человека. Это объясняется тем, что выявить патогенные микроорганизмы в объектах внешней среды очень сложно, поскольку часто их концентрация невелика, а процесс идентификации каждого вида патогенных бактерий во внешней среде очень трудоемок.

К санитарно-показательным микроорганизмам, свидетельствующим о каловом загрязнении объектов внешней среды, относятся прежде всего бактерии группы кишечной палочки (БГКП), а также клостридии, главным образом Сl. perfringens, энтерококки и др.

В нашей стране в основном на каловое загрязнение объектов внешней среды определяют бактерии группы кишечной палочки по показателям – коли-титр и коли-индекс (см. раздел микробиологическое исследование воды).

4. В исключительных случаях объекты внешней среды исследуют на присутствие и патогенных микроорганизмов.

Тема 17. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха (17.1) и почвы (17.2)

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Дать общее представление о микрофлоре воздуха и почвы, о путях их загрязнения, овладеть методами исследования этих объектов.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для исследования воздуха: чашки Петри, пробирки с расплавленным МПА, аппарат Кротова. Для исследования почвы: пробы почвы, стерильный физиологический раствор, разлитый по 9 и 10 мл по пробиркам, чашки Петри, пробирки с расплавленным МПА (столбиком), стерильные пипетки на 1 мл, среда Кесслера в пробирках по 9 мл.

17.1. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха

С санитарно-микробиологической точки зрения воздух представляет собой среду, в которой микроорганизмы не способны размножаться. В воздухе нет питательных веществ, недостаточно воды, оказывают бактерицидное действие на микробы солнечные лучи. Условно микрофлору воздуха можно разделить на постоянную, т.е. более часто обнаруживаемую в воздухе, и временную, находящуюся в воздухе не всегда и менее стойкую к воздействию различных факторов окружающей среды. К постоянной микрофлоре воздуха относятся пигментные кокки, споры бактерий, плесеней и актиномицетов, дрожжеподобные грибы и др.

Болезнетворные микробы попадают в воздух из почвы и с выделениями больных людей и животных. В основном контаминация воздуха микроорганизмами происходит капельным путем – при кашле, чихании, фыркании.

Показателем загрязнения воздуха в животноводческих помещениях являются стрептококки, стафилококки, кишечные палочки, которые могут длительное время удерживаться в воздухе во взвешенном состоянии и переноситься совместно с другими микроорганизмами в виде аэрозоля.

Выживаемость патогенных микроорганизмов, находящихся в каплях, пыли, зависит от биологических свойств возбудителя, а также температуры и влажности воздуха. Например, возбудители туберкулеза, стафилококкоза, сибирской язвы, хорошо переносящие высыхание, длительное время сохраняются в бактериальной пыли.

Микробиологическое исследование воздуха проводят для определения общего количества микроорганизмов (микробного числа) и количества санитарно-показательных микроорганизмов. Общее число микроорганизмов в воздухе определяют при посеве на МПА; санитарно-показательных микробов – на кровяном агаре, желточно-солевом или кровяно-солевом агаре. В случае необходимости исследуют на наличие спор, плесеней и дрожжей – на сусло-агаре или среде Сабуро; протеолетических бактерий – на МПЖ или молочном агаре.

Отбор проб воздуха и техника посева

Существует много методов отбора проб воздуха для исследования: осаждение микроорганизмов под влиянием гравитационных сил или седиментационный метод по Коху; принудительное осаждение микробов с помощью ударного действия струи воздуха (метод Кротова); фильтрации воздуха через жидкость; фильтрации воздуха через твердые растворимые и нерастворимые фильтры.

Фильтрационные методы основаны на аспирации (продувании) воздуха через твердые растворимые, твердые нерастворимые и жидкие фильтры, которые затем исследуют.

Для аспирации воздуха через фильтры применяют прибор Дьяконова. В качестве твердых нерастворимых фильтров используют мембранные фильтры и бактериоуловители Киктенко и Речменского.

Наиболее доступными и чаще применяемыми являются методы Коха и Кротова.

Седиментационный метод по Коху или чашечный метод. Осаждение микробных частиц и капель происходит под действием силы тяжести и нисходящих потоков воздуха на поверхность плотной среды в открытых чашках Петри, которые оставляют открытыми на 5, 10, 15 и более минут в зависимости от предполагаемой загрязненности воздуха.

Посевы на чашках с МПА и кровяным агаром культивируют при 30-37°С в течение 48 ч, на среде Сабуро – при комнатной температуре (20-22°С) 4 суток или при 30°С – 72 ч, а затем проводят подсчет числа выросших колоний.

При определении микробного числа на МПА подсчитывают колонии по всей чашке, если их выросло немного (менее 300); при большом числе колоний подсчет производят по секторам или с помощью приборов.

После подсчета выросших колоний микроорганизмов определяют их количество в 1³ м воздуха по формуле Омелянского, согласно которой на площадь чашки с питательной средой 100 см² в течение 5 мин оседает столько микробных клеток, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Х=

где Х – количество микробов в 1 м³ (1000 л) воздуха;

а - количество выросших колоний в чашках;

b - площадь чашки (80 см² );

5 - время по правилу Омелянского;

Т - время, в течение которого чашка была открыта;

10 - объем воздуха в литрах (1м³).

Метод Кротова

Этот метод является наиболее совершенным. Прибор смонтирован в портативном виде, состоит из узла для отбора пробы (на специальную площадку помещают без крышки чашку Петри с питательной средой), электромотора, вентилятора и микроманометра. Механизм улавливания микроорганизмов из воздуха в приборе Кротова основан на ударном действии струи воздуха, которая засасывается через узкую клиновидную щель верхней крышки прибора. Струя воздуха с большой скоростью (от 10 до 20 л/мин) ударяется о влажную поверхность питательной среды в чашке Петри, вследствие чего находящиеся в струе воздуха микробные аэрозоли прибиваются к ней. Для равномерного распределения микробных клеток на поверхности среды чашка закрепляется на вращающейся площадке (рис. 51). Продолжительность посева 1-2 мин или более, в зависимости от предполагаемой загрязненности воздуха. После посева выключают прибор, закрывают чашку Петри и помещают в термостат для культивирования на 24-48 ч при 37°С.

Подсчет колоний производят так же, как и при седиментационном методе. В дальнейшем число микробов в 1 м³ воздуха считают по формуле

Х=

где Х – число микробов в 1 м³ воздуха;

а – число выросших колоний;

1000 л – 1 м³ воздуха;

b – количество пропущенного воздуха

Рис. 51. Внешний вид аппарата Кротова для бактериологического исследования воздуха: 1 – вентиль микроманометра; 2 – микроманометр; 3 – накидные замки; 4 – вращающийся диск; 5 – крышка; 6 – диск; 7 – клиновидная щель; 8 – корпус; 9 – основание

В настоящее время нет жестких нормативов бактериальной загрязненности воздуха для животноводческих помещений. Однако есть указания, что допустимые санитарно-бактериологические показатели для воздуха животноводческих помещений не должны превышать 500-1000 бактерий в 1 куб. метре.